《IFNγ对兔盆腔术中照射后直肠组织TGFβ1mRNA含量的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《IFNγ对兔盆腔术中照射后直肠组织TGFβ1mRNA含量的影响（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1IFN 对兔盆腔术中照射后直肠组织 TGF1mRNA 含量的影响作者：张丽，王华，王娟，杨蕴一，刘孜【摘要】 目的 探讨 IFN 对兔盆腔术中照射后直肠组织的病理变化和转化生长因子 1(TGF 1)含量的影响。方法 54 只雌性新西兰大白兔随机分成单纯照射组、药物干预组和空白对照组，盆腔术中照射后当天开始每隔 4 d 给予药物干预组肌注 IFN 2.5104u/(kgf)，共 5 次;于照射后第 4、8、12、16、20 周每组分别处死 5 只兔，空白对照组于实验完成时统一处死，光镜下分别观察直肠组织的病理变化，原位杂交法检测 TGF 1mRNA 的表达变化。结果 光镜下观察直肠组织病理改变
2、及原位杂交 TGF 1mRNA 含量，对比药物干预组与单纯照射组和空白对照组间均有显著性差异(P0.05)。结论 IFN 能明显抑制 TGF 1mRNA 的表达，可减轻早期放射性炎症反应及后期放射性纤维化的程度。 【关键词】 术中照射;干扰素 ;转化生长因子 1;放射性直肠损伤ABSTRACT: Objective To study the effect of interferon (IFN ) on pathological changes and transforming growth factor 1 (TGF 1) changes in rectal tissues of rabbit
3、s which received introoperative radiotherapy (IORT).Methods Fifty four big female New Zealand albino rabbits were randomly allocated into simple irradiation group, IFN treatment group and blank control group. IFN (2.5104u/kgf) was injected into IFN treatment group every four days after IORT for five
4、 times. Five rabbits were randomly sacrificed at 4, 8 12, 16 and 20 weeks after IORT except those in blank control group. Pathological changes of the rectum were observed under light microscope and the level of TGF 1 mRNA expression was observed by hybridization in situ.Results Light microscopy show
5、ed that the pathological changes and the mRNA expression of TGF 1 in IFN treatment group at different time phases were significantly lower than those in simple irradiation group and blank control group (P0.05).Conclusion IFN can significantly inhibit the mRNA expression of TGF 1, abate acute factiti
6、al proctitis and radiation induced 2rectal fibrosis.KEY WORDS: introoperative radiotherapy; interferon ; transforming growth factor 1; radiation induced rectal injury盆腔肿瘤是临床上常见的恶性肿瘤，约占恶性肿瘤的 30%1，且发病率有逐年上升的趋势。其治疗原则强调手术、放疗、化疗等综合治疗，放疗为其中重要的治疗手段之一。如宫颈癌及子宫内膜癌的治疗过程中，约有 90%的患者需要接受放射治疗，且其疗效与放射剂量有明显的相关性2。但是，
7、放射线在杀灭肿瘤细胞的同时，不可避免要损伤正常细胞。放射性直肠损伤的发生成为盆腔肿瘤放射治疗中公认的剂量限制性因素。因此，放射性直肠纤维化成为部分盆腔肿瘤患者放射治疗后常见的晚期并发症。近年来，转化生长因子 1(transforming growth factor 1, TGF 1)与放射性纤维化的关系研究受到重视3。干扰素 (interferon , IFN )是一种抗组织纤维化的细胞因子。体外实验表明其能够抑制成纤维细胞的增殖和胶原的合成,拮抗TGF 1 的促纤维化效应4。本实验模拟临床术中放射治疗的过程，通过手术中一次性大剂量照射兔盆腔组织造模，并早期使用 IFN 进行干预，拟探讨 IF
8、N 对照射后兔直肠组织内 TGF 1 合成和分泌的影响。1 材料与方法1.1 材料 健康成年雌性新西兰大白兔 54 只，体质量(2000200)g，由西安交通大学医学院动物实验中心提供。注射用重组人干扰素 购自上海克隆生物高技术有限公司(1107 万 IU/瓶，国药准字 S10980084);鼠抗兔型胶原单克隆抗体为美国 Merck 公司产品;TGF 1(mRNA)ISH DIG Kit 为天津颢洋生物制品科技有限责任公司产品;即用型 SABC 免疫组化试剂盒及浓缩型 DAB 试剂盒均购自武汉3博士德生物工程有限公司。1.2 分组 54 只成年雌性新西兰大白兔随机分为 3 组，其中单纯照射组
9、25 只，药物干预组 25 只，空白对照组 4 只。1.3 术中照射方法 将兔麻醉后仰卧位固定于特定兔固定架上，在 X 线模拟机下确定照射野：上界至耻骨联合上缘 4cm，下界到耻骨联合，左右界分别为中线旁 2cm，射野大小为 4.0cm4.0cm。兔开腹后给予 6Mev 射线直视下单次大剂量照射，剂量为 20Gy。照射完毕后关腹结束手术。空白对照组兔行相同手术，但不予照射。1.4 术中照射设备 术中照射设备采用有机玻璃制作的盆腔 4 限光筒，其横截面为椭圆形，组织接触端为与盆腔组织良好吻合的曲面，照射野为耻骨联合上4.0cm4.0cm 范围。1.5 给药及观察方法 药物干预组于术后当天开始，以
10、后每隔 4d 肌注 IFN 2.5104u/(kgf)，共 5 次，单纯照射组和 C 组同期给予肌注 5mL 生理盐水。每日观察兔子活动、进食及排泄情况，每周称量体重。1.6 标本采集及检测方法 单纯照射组与药物干预组于术中放疗后第4、8、12、16、20 周分别随机处死 5 只兔子，取直肠组织分别进行以下操作：石蜡包埋,切片行 HE 染色;组织室温固定，石蜡包埋后制作 4m 切片，原位杂交染色，细胞浆显棕黄色颗粒为阳性反应。空白对照组兔子于实验完成时处死、取材，进行相同的组织处理。1.7 病理学的观察 参照 SZAPIEL 等5评价肺炎及肺纤维化的方法评价放射4性直肠炎或纤维化的程度，并按照
11、张东伟等6提供的计算肺损伤的病理半定量分析法进行直肠损伤病理半定量分析：无放射性直肠炎或纤维化(-，1 分)，组织无充血水肿;轻度直肠炎或纤维化(+，2 分)，组织稍有充血，水肿，增厚且阳性细胞表达率20%;中度直肠炎或纤维化( ，3 分)，直肠组织充血水肿明显，表面有点状纤维化病灶且阳性细胞表达率在 20%50%之间;重度直肠炎或纤维化( ，4 分)，组织表面纤维化病变呈片状，增厚明显，色灰白且阳性细胞表达率50%。1.8 原位杂交结果的判断标准 采用双盲法观察切片，染色结果应用电脑图像采图软件 NIKONSpot 彩色病理图文分析系统进行图像采集，以图文分析软件 IMAGE Pro plu
12、s 50 采集直肠组织原位杂交和免疫组化图像，将直肠组织各时点切片随机取染色区域 5 个高倍视野(400)，测量并记录每个视野阳性染色的平均积分吸光度(IA)值。半定量积分法判断结果：阳性细胞5%为 0 分，6%25%为1 分，26%50%为 2 分，51%75%为 3 分，75%为 4 分;阳性强度：无色为0 分，淡黄色为 1 分，黄色为 2 分，棕黄色为 3 分。将、两者积分相乘，0 分为阴性，14 分为弱阳性，58 分为阳性，912 分为强阳性。1.9 统计学处理 所有数据均以s 表示，经 SPSS13.0 统计软件进行单因素方差分析，组间比较采用 2 检验，以 P0.05 表示有显著性
13、差异。2 结 果2.1 大体标本的观察 空白对照组无明显变化;单纯照射组解剖肉眼可见照后4 周直肠组织充血、水肿明显，12 周组织增厚、色灰白，16 周组织增厚更明显，表面明显点状纤维化病灶，20 周可见纤维化病变呈片状。干预组照后 4 周也出现轻5度充血水肿，12 及 16 周未有明显组织增厚，20 周无明显纤维化病变。2.2 病理学的观察 HE 染色可见对照组直肠组织结构正常;单纯照射组照后第4 周未见明显病理学改变，照后 8 周即出现急性炎症反应，组织充血水肿明显，并有红细胞、巨噬细胞、淋巴细胞聚集，12 周时急性炎症减轻，组织仍有充血水肿，16 周时急性炎症消退，胶原组织增生，成纤维细
14、胞及淋巴细胞显著增多，20 周时胶原组织增生及炎细胞浸润更加明显，增生的胶原组织主要分布在黏膜下层以及肌层之间的疏松结缔组织内。IFN 干预组直肠组织于照射后 8 周也出现急性炎症反应，但程度明显低于单纯照射组，仅有少量炎细胞浸润，20 周时成纤维细胞及淋巴细胞均少于同时期单纯照射组，局部纤维化呈点灶状(表 1、图 1)。表 1 各组直肠组织病理分级和积分的比较 A：IFN 干预组 8 周时的 HE 染色;B：IFN 干预组 20 周时的 HE 染色;C：单纯照射组 8 周时的 HE 染色;D：单纯照射组 20 周时的 HE 染色。3.3 原位杂交的结果 正常兔直肠组织在背景染色基础上仅在肠隐
15、窝上皮细胞和肠腺嗜酸性细胞中可见 TGF 1 mRNA 杂交信号的弱表达或不表达，单纯照射组和对照组在直肠黏膜固有层的炎细胞如淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞以及成纤维细胞的胞浆中表达为主，围绕细胞核呈棕色颗粒状或团块状分布。照射后4 周，即可见 TGF 1 mRNA 杂交信号增强，8 周时 TGF 1 mRNA 杂交信号明显增强。随着时间推移，TGF 1 mRNA 阳性表达率逐渐增多，至观察截止时间20 周时表达达高峰;且单纯照射组、IFN 干预组 TGF 1 mRNA 原位杂交信号与胶原含量呈正相关。其中 IFN 干预组与单纯照射组各时间点相比杂交信号明显减弱，差异有显著性(P0.05)，单
16、纯照6射组和对照组各时间点相比差异有统计学意义(P0.05)，IFN 干预组与对照组间差别无统计学意义(表 2、图 2)。表 2 各组直肠组织 TGF 1 mRNA 原位杂交平均吸光度的比较A：IFN 干预组 8 周时的 ISH 染色;B：IFN 干预组 20 周时的 ISH 染色;C：单纯照射组 8 周时的 ISH 染色;D：单纯照射组 20 周时的 ISH 染色。3 讨 论目前，已有较多肝、肾、肺等器官放射性纤维化研究的报道。其中单次大剂量肺损伤模型的建立较多7 9，但是采用术中一次大剂量照射观察放射性直肠损伤的模型国内外鲜有报道。本研究采用术中一次性大剂量照射法建立兔放射性直肠损伤模型，观察到放射性直肠损伤的病理变化过程大致分为：急性炎症期;增生期;纤维化期。本实验观察结果提示：根据病变规律能够成功建立兔
