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1、1HPLC 法测定阿奇霉素散剂的含量【摘要】 目的 建立 HPLC 法测定阿奇霉素散剂的含量。方法 采用 C8 柱，以0.045mol/L 磷酸二氢胺溶液乙腈(21)(用三乙胺调 pH 至 7.35)为流动相，流速1ml/min，检测波长 210nm，柱温 40。结果 阿奇霉素的线性范围为50.31006g/ml，平均回收率 100.1%，r=1.0000，RSD=0.8%(n=9)。结论 HPLC 法测定结果与微生物检定法比较无显著性差异。本方法可准确、快速、简便地测定阿奇霉素散剂的含量。 【关键词】 高效液相色谱法； 阿奇霉素散剂； 含量测定Content determination of
2、 azithromycin powder by HPLC ABSTRACT Objective To establish an HPLC method for the determination of azithromycin powder.Method The chromatographic conditions were as followed: C8 column, 0.045 mol/L ammonium phosphate monobasic solutionacetonitrile (21) (adjusted to pH7.35 with triethylamine) as mo
3、bile phase, temperature: 40, the flow rate: 1.0 ml/min, detection wavelength: 210nm. Results The linear range was in therange of 50.31006g/ml (r=1.0000), and the mean recovery (n=9) was 100.1% (RSD=0.8%).Conclusion The method is rapid, simple and accurate to determine the content of azithromycin pow
4、der.KEY WORDS HPLC; Azithromycin powder; Content determination阿奇霉素为氮杂内酯类抗生素，日抗基和中国药典2005 年版1均采用微生物检定法测定其含量， 欧洲药典4.6 版和 USP26 版中均采用 HPLC 法，专属性较强，试验周期短，但均使用的是聚合物极性柱， 欧洲药典柱温为 70，USP 采用电化学检测器，其采用的设备在我国药检部门尚未普及2。抗生素微生物检定法操作较为复杂，试验周期长，影响因素多，误差较大。本文采用 HPLC 法测定阿奇霉素散剂含量，可使阿奇霉素与其有关物质得到较好的分离，方法简便、快速、准确。21 仪器与试
5、药Aglient 1100 高效液相色谱仪/DAD 检测器，Aglient 化学工作站。试药：阿奇霉素对照品(130352 200304，946u/mg)及红霉素对照品(130307 200215，923u/mg)均由中国药品生物制品检定所提供； 阿奇霉素散剂规格为 0.25g(以阿奇霉素计，批号 030601，030602，030603)由安徽安科药业股份有限公司生产；纯化水，乙腈(色谱纯)，磷酸二氢铵(分析纯)。2 色谱条件色谱柱：Eclipse XDB C8 柱(4.6mm150mm，5m)；流动相：0.045mol/L 磷酸二氢铵溶液乙腈(21)(用三乙胺调 pH 至 7.35)；流速
6、：1ml/min，检测波长：210nm，柱温：40。在上述色谱条件下，十六醇、蔗糖等辅料、阿奇霉素对照品、供试品及阿奇霉素与红霉素对照品溶液的色谱图见图 1。3 方法与结果3.1 方法的专属性考察精密称取阿奇霉素对照品 20mg，分别置 10ml 容量瓶中，进行如下破坏试验：酸破坏：加入 0.1mol/L 的盐酸溶液溶解并稀释至刻度， 室温放置 2h； 碱破A：辅料空白； B：阿奇霉素对照品； C：供试品； D：阿奇霉素与红霉素对照品(1：阿奇霉素； 2：红霉素)图 1 HPLC 色谱图 略3坏：加入 0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，制成约 2mg/ml 的溶液，室温放置 2h
7、；氧化破坏：加入 5%双氧水溶解并稀释至刻度，室温放置 2h；热破坏：60加热破坏 6h，加流动相溶解并稀释刻度。按上述色谱条件进样记录图谱(图 2)，结果表明阿奇霉素对热较稳定，其它条件均不稳定，破坏产生的各相关杂质峰与主峰均能基线分离，说明该色谱条件能准确测定阿奇霉素的含量。3.2 线性关系精密称取阿奇霉素对照品，加流动相溶解并稀释，摇匀，制成 2mg/ml 的储备液。精密量取储备液 0.5、1、2.5、5、10ml 分别置于 10ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下分别进样 20l，每一组浓度进样 3 次，记录峰面积。以阿奇霉素素对照品浓度 x(g/ml)对色谱峰面
8、积 y 绘制标准曲线，其回归方程为：y0.4791x-1.7562 r=1.0000 结果表明，阿奇霉素浓度在 50.31006g/ml范围内呈良好线性关系。3.3 进样精密度对同一份对照品溶液，连续进样 6 次，按上述色谱条件测定峰面积，RSD 为0.07%。3.4 稳定性试验取上述溶液分别放置 0、1、4、6、8 和 12h 后测定，其峰面积基本一致，RSD 为0.8%，表明溶液在 12h 内稳定。 3.5 最低检测限按信噪比 31 计，阿奇霉素的检测限为 60ng。43.6 加样回收率试验精密称取份已知含量的同一批号的样品，各置 50ml 容量瓶中，分别加入精密称定的阿奇霉素对照品，用流
9、动相制成相当于含量测定浓度的 80%、100%和 120%的溶液，3 个浓度各测定三次，计算回收率，低、高、中三种浓度回收率分别为99.2%、100.8%和 100.4%；RSD 分别为 0.66%、0.75%和 0.36%，得平均回收率为100.1%。因此选取得高效液相色谱法准确度较好。3.7 样品含量测定取阿奇霉素散剂 10 袋，精密称定装量后，取内容物混合均匀，精密称取适量(约相当于阿奇霉素 100mg)置 100ml 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿奇霉素对照品同法测定。按外标法计算其含量，并与阿奇霉素散剂原标准卫生部药品质
10、量标准WS 034(X 022) 97规定的微生物检定法比较，两种方法的测定结果无显著性差异，结果见表 1。图 2 方法的专属性图谱 略表 1 含量测定 略4 讨论(1)阿奇霉素为大环内酯类抗生素，紫外吸收较弱，取其末端吸收 210nm 波长处测定，可得到满意的响应值。柱温较低时峰形拖尾，在 40时明显改善。5(2)对多种不同的流动相如乙腈0.1%三乙胺水溶液(3070)(用磷酸调 pH 值至4.0)3；0.5%磷酸二氢铵乙腈(7327)；甲醇水(928)4等进行试验，结果显示，以 0.045mol/L 磷酸二氢胺溶液乙腈(21)(用三乙胺调 pH 至 7.35)为流动相时峰形较好，保留时间合
11、适，主峰与辅料及杂质峰(红霉素峰)能达到基线分离。(3)阿奇霉素散剂中的辅料如十六醇、蔗糖等在 210nm 处有吸收，但均与主峰很好分离，不干扰对阿奇霉素的含量测定。(4)虽然采用 HPLC 法和微生物检定法对阿奇霉素散剂的含量进行测定没有显著性差异，但 HPLC 法快速、简便，精密度高，误差小，结果准确。【参考文献】1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)S. 北京：化学工业出版社，2005：2912 The United States Pharmacopeial Convention Inc. The United States Pharmacopeial S. Rochville MD: The United States Pharmacopeial Comvention Inc., 2002:1883 关倩明，李子雄，张秋莲. HPLC 法测定阿奇霉素的含量J. 药物分析杂志，1998，18(5)：3004 姜建国，张西茹，杨梁，等. 高效液相色谱法分离测定阿奇霉素及其相关物质J. 中国现代应用药学，2003(5)：395
