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1、1HPLC 法同时测定风寒感冒片中葛根素和 橙皮苷的含量【摘要】 目的 建立风寒感冒片的含量测定方法。方法 采用 HPLC 法，色谱柱为Diamond C18（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为甲醇 水（体积比 2575），检测波长：葛根素 250 nm，橙皮苷 283 nm。结果 葛根素在进样量为 0.1563.152 g 范围内，橙皮苷在进样量为 0.1002.006 g 范围内，与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率：葛根素为 99.0%，RSD=0.97%，橙皮苷为98.4，RSD=1.27（n=9）。结论 该法操作简便易行、准确可靠，可用于风寒感冒片的质量控制。 【关键词
2、】 风寒感冒片 葛根素 橙皮苷 高效液相色谱法风寒感冒片是由麻黄、葛根、紫苏叶、防风、陈皮、白芷等十一味中药经提取加工而成的片剂，具有解表发汗、疏风散寒的作用，临床用于感冒身热、头痛、咳嗽、鼻塞、流涕。本文采用 HPLC 法同时测定本品所含葛根素、橙皮苷的含量，以此作为风寒感冒片的质量控制指标。1 仪器、试剂与样品Waters2695 高效液相色谱仪， Waters2487 紫外检测器（美国 Waters 公司）;Milli PORE 纯水器（美国密里博公司）。葛根素对照品、橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为高纯水；其他试剂均为分析纯；风寒感冒片样品（规格
3、：每片重 0.6 g）及缺葛根、陈皮的阴性对照样品由广西辉越制药有限公司提供。22 方法与结果2.1 色谱条件 Diamond C18 色谱柱(5 m，4.6 mm250 mm)；流动相为甲醇 水（体积比 2575）；检测波长葛根素为 250 nm，橙皮苷为 283 nm；柱温：35 ；进样量：10 L。理论板数按葛根素峰计算应不低于 2 000。色谱图见图 1。2.2 供试品溶液的制备 取本品 10 片，除去包衣，研细，取 0.4 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入体积分数 30乙醇 100 mL，称定重量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，用体积分数 30乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，
4、取续滤液作为供试品溶液。1.葛根素；2.橙皮苷图 1 对照品（A）、供试品（B）和阴性对照品的色谱图（略）Figure 1 HPLC chromatograms of standard（A）, sample（B）and blank sample（C）2.3 线性关系考察 精密称取葛根素对照品 19.70 mg、橙皮苷对照品 12.54 mg，置 25 mL 量瓶中，加体积分数 30乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液 0.5、1、2、3、5、10 mL，分别置 25 mL 量瓶中，加体积分数 30乙醇稀释至刻度，摇匀，进样 10 L 测定。以对照品进样量为纵坐标
5、，峰面积为横坐标绘制标准曲线，结果葛根素进样量在 0.1583.152 g 范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:Y=2.159105X+1. 164105（r=0.999 8）；橙皮苷进样量在 0.1002. 006 g 范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:Y=1.153105X+1.435105（r=0.999 9）。2.4 精密度试验 取供试品溶液（批号 050701），连续进样 5 次，测定色谱峰面3积，结果葛根素 RSD 为 0.5，橙皮苷 RSD 为 0.7，表明仪器精密度良好。2.5 稳定性试验 对同一供试品溶液（批号 050701），12 h 内每隔 2 h 测定 1 次，结
6、果葛根素的 RSD 为 0.8%，橙皮苷的 RSD 为 0.9，表明供试品溶液在 12 h 内稳定性良好。2.6 重复性试验 取供试品（批号 050701）6 份，按“ 2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定。结果 6 份样品中葛根素平均含量为 5.34 mg/片，RSD 为 0. 8；橙皮苷平均含量为 0.32 mg/片，RSD 为 1. 0。表明重复性良好。2.7 加样回收率试验 取本品（批号 050701，葛根素含量 5.34 mg/片、橙皮苷含量 0.32 mg/片）0.2 g，共 9 份，精密称定，分别精密加入对照品溶液（精密称取橙皮苷对照品 10.12 mg，置 10 mL 量瓶
7、中，加体积分数 30乙醇使溶解并稀释至刻度，即得含橙皮苷 1.012 mgmL-1 的对照品溶液，备用；另精密称取葛根素对照品33.68 mg，置 500 mL 量瓶中，精密加入上述橙皮苷对照品溶液 2 mL，加体积分数 30甲醇稀释至刻度，摇匀，即得含葛根素 0.067 36 mgmL-1、橙皮苷 0.004 048 mgmL-1 的溶液）20、25、30 mL，按“ 2.2”项下方法制备并测定含量，计算回收率，结果见表 1、表 2。2.8 样品测定 取 3 批样品按照“2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定，用峰面积按外标法计算含量，结果见表 3。 3 讨论3.1 取本品供试液适当稀释后
8、，于紫外分光光度计上在 200400 nm 范围内扫描，其最大吸收波长为 250.4 nm 与 283.6 nm，与 2 种对照品的最大吸收波长基本一致，故采用 250 nm 作为葛根素测定波长，283 nm 作为橙皮苷的测定波长。阴性4样品色谱图表明，空白样品对测定无干扰。3.2 对本品的提取溶剂进行了筛选，比较了甲醇、乙醇及不同比例的乙醇溶液，结果以体积分数 30乙醇溶液为溶剂提取的含量较高，故确定其为提取溶剂。表 1 葛根素加样回收率测定结果（略）Table 1 Recovery test of puerarin表 2 橙皮苷加样回收率测定结果（略）Table 2 Recovery te
9、st of hesperidin表 3 样品测定结果（略）Table 3 Assay results of samples3.3 提取方式 试验了超声处理、加热回流等方法，结果选定为加热回流 1 h。3.4 流动相的选择 参考有关文献16，比较了甲醇 水 醋酸（体积比30704）、乙腈 0.1磷酸（体积比 2080）等多种比例的溶液，结果以甲醇 水（体积比 2575）为流动相可使葛根素、橙皮苷与相邻的色谱峰达到基线分离，且峰形较好。3.5 本文方法可同时测定葛根素、橙皮苷的含量，方法简便、快速、准确，可作为风寒感冒片的含量控制方法。【参考文献】1 仲平，赵焕霞，张村，等.高效液相色谱法测定太子
10、金颗粒中橙皮苷的含量J.中国现代应用药学杂志，2002 ，19(4):308-310.52 张燕平，吴丹，孙毅坤.高效液相色谱法测定加味保和冲剂中橙皮苷的含量J.中国中药杂志，2001，26（5）： 318-319.3 崔升淼，赵春顺，何仲.HPLC 法测定愈风宁心软胶囊中葛根素的含量J. 广东药学院学报，2006,22(6):602-604. 4 谢友良，曾惠芳，李俊哲，等.胃肠舒胶囊定性定量方法的研究J.中国实验方剂学杂志，2004，11(1):3-5.5 尚远宏，刘圆，石圣洪，等.RP HPLC 测定参仁强体胶囊中橙皮苷的含量J.华西药学杂志，2007，22(1):72-73.6 金阳.反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量J.时珍国医国药，2007，18（4）：890-891.
