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1、1HPLCMS 技术在中药鉴定中的应用【摘要】 为了保证中药的质量，各种现代的鉴定法越来越多地在中药鉴定中被应用。利用高效液相色谱-质谱(HPLC MS)联用技术，将 HPLC 对复杂样品的高分离能力与 MS 的高选择性、高灵敏度以及能够提供分子量与结构信息的优点结合起来，可对中药质量进行比较全面的评价。 【关键词】 高效液相色谱-质谱联用；中药；鉴定高效液相液质联用(HPLC MS)是指高效液相液相色谱与质谱串联的技术。HPLC是目前分离复杂体系最为有效的分析工具，由于其仪器自动化、普及化程度愈来愈高，已成为中药分析最常用的仪器之一。MS 是一种高灵敏度的检测器，且不同化合物的特征性强,可用
2、于部分解析未知化合物的结构。HPLC MS 将 HPLC 的高分离效能与 MS 的强大结构测定功能组合起来,为中药化学成分的快速分析提供了一个重要的新技术1。1 HPLC MS 在中药化学成分分析中的作用采用 HPLC MS 联用技术进行中药化学成分分析，可以同时得到化合物的保留时间、在线紫外光谱、分子量及特征结构碎片等丰富的信息，具有高效快速和高灵敏度的特点，只需对样品进行简单预处理或衍生化，尤其适用于含量少、不宜分离得到或在分离过程中容易发生变化或损失的成分，因此在中药化学成分分析中得到广泛应用。如采用 HPLC UV MS 联用技术构建牛膝药材的指纹图谱，标示了 4 个共有峰,并借助 H
3、PLC MS 联用技术对其主要色谱峰进行了初步归属。采用液相色谱(LC) MS 联用技术测定 10 批豆科植物补骨脂 Psoralea corylifolia L2样品，鉴定共有峰和特征峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积，标示了12 个共有峰，为豆科植物补骨脂全面质量控制提供了参考。研究山麦冬(LiriopeSpicata)甲醇提取物中的物质组成情况，建立了山麦冬 HPLC ESI MS 特征指纹图谱，其中山麦冬甲醇提取物色谱图中有 17 个共有峰的重现性与精密度的 RSD5%，可用于山麦冬的品质评价与品种鉴别。采用 HPLC 紫外可见分光光度(UV) MS 联用技术分别对刺五加(Ru
4、pr etMaxim)Harms 药材水溶性和脂溶性成分进行指纹图谱研究， MS 检测器对于 UV 检测器是较好的补充，可以提供更多的化合物信息，从而为刺五加药材及其制剂的鉴别提供更加全面、可靠的依据。采用 HPLC UV MS 联用技术对忍冬和山银花药材进行指纹图谱研究,得到分离度和重现性均较好的忍冬和山银花药材 HPLC UV 及 HPLC MS 指纹图谱，分别对忍冬指纹图谱中 8 个色谱峰和山银花图谱中 5 个色谱峰进行了初步定性,并比较了 2 种药材指纹图谱的差异。应用 HPLC 二极管陈列检测器(DAD)MS 联用技术测定 9 个川芎 LigusticumchuanxiongHort
5、 样品，鉴定其共有峰和特征峰，指定参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，9 个样品的色谱指纹图谱共有 21 个共有峰，色谱图分为 4 个区；所有样品中 21 个共有峰的相对保留时间稳定(RSD1%)，同一公司同一年采收的样品 13 个主要共有峰(归一化法峰面积1%)的相对峰面积稳定;而不同公司同一年采收的样品 13 个主要共有峰的相对峰面积差异非常显著(P0.001)2。2 HPLC MS 在中药代谢研究HPLC MS 联用技术能够直接分析溶液样品，特别适合分析复杂介质中强极性、难挥发或热不稳定的化合物，在中药代谢产物研究中得到广泛应用。采用液相色3谱 电喷雾离子阱串联质谱测定大
6、鼠尿样中黄芩苷及其异构体的化学结构以及其排泄情况。根据代谢物的多级质谱和紫外吸收光谱数据推测，两种给药途径均检测到原形药黄芩苷及其异构体黄芩素 6 O 葡萄糖苷酸。采用 HPLC ESI MS研究何首乌中二苯乙烯苷在小鼠体内的代谢产物时发现，二苯乙烯苷在体内的代谢物为葡萄糖醛酸结合物。采用高效液相色谱 串联质谱法测定大鼠血浆中汉黄芩素浓度，针对黄酮类化合物在生物体内多与葡萄糖醛酸结合，消除半衰期较长的特点，灵敏度提高3。 3 HPLC MS 在中药药物动力学研究中药药物的有效性和安全性与药物及其代谢物在体液和组织中的浓度有关，药物动力学研究要求对生物样本中的微量乃至痕量成分进行定量分析。而目前
7、药物研制日趋低剂量，使常规的分离检测技术难以满足复杂介质中痕量成分准确定量的要求。采用 HPLC MS 联用技术进行药物动力学研究，具有高灵敏度和高专属性特点，不仅简化工作过程，减少样品制备和色谱分离的时间，而且能够同时测定样品中复方制剂的多组分浓度，达到常规分析中的高样品通量。应用 HPLC MS法测定人血浆中伪麻黄碱浓度，以 SRM 扫描方式，以准分子离 m/z166 作为母离子，利用生成的主要碎片离子 m/z147 进行定量分析，血浆中的内源性物质不干扰待测物的测定，其定量下限可达 5ngml，具有高度的专属性和灵敏度。利用HPLC MS 法，测定 Beagle 狗血浆中石杉碱甲，线 性
8、范围为 0.112ngml，最低定量浓度为 0.1ng 1ml，可以检测到 Beagle 狗静注和口服 100g 石杉碱甲后 12h的血药浓度4。4 HPLC MS 在中药质量标准研究中的应用对中药进行成分分析是中药质量控制研究的必然趋势，中药指纹图谱技术即4是基于此观点而兴起的一种半定量分析技术。然而，目前开展的指纹图谱研究大多数采用 HPLC/UV 分析方法，很难对其中的大多数指纹峰进行指认,导致指纹图谱难以与药物的活性直接联系起来，亦难以用于指导制剂工艺的优化。HPLC/MS技术则可以提供未知色谱峰丰富的结构信息,据此推导其可能的化学结构,从而很好地解决这一问题。采用 HPLC MS 技
9、术对丹参注射液进行了化学指纹图谱及代谢指纹图谱的研究5通过选择性离子检测及提取主要色谱峰的质谱图，并参考文献报道及对照品对照，在丹参注射液的化学指纹图谱中指认了 12 个成分，在大鼠静脉注射丹参注射液后血浆 HPLC/MS 代谢指纹图谱中指认了 10 个成分。LC/MS 均可显示出其独特的优越性，甚至可用于中药复方的定量分析。5 结语HPLC MS 联用技术已在中药化学成分分析、中药质量控制、中药代谢产物鉴定和中药药物动力学研究等方面广泛应用。HPLC MS 联用技术解决了传统液相检测器灵敏度和选择性不够的缺点，提供了可靠、精确的相对分子质量及结构信息，简化了试验步骤，节省了样品准备时间和分析
10、时间，特别是适合亲水性强、热不稳定化合物及生物大分子的分离分析，有着广泛的应用前景。【参考文献】1刘样东,梁琼麟,罗国安,等.液质联用在医药领域中的应用J.药物分析杂志,2005,25(1):110.2张尊建,余静,杨春华,等.忍冬、山银花 HPLC UV MS 指纹图谱研究J.中成药,2003,25(11):863.3王源园,张尊建,王兴旺,等.牛膝的 HPLC UV MS 指纹图谱研究J.中药5材,2003,26(11):787.4Zhao L,Huang C,Shan Z,et al.Fingerprint analysis of PsoraleacorylifoliaL by HPLC and LC MSJ.JChro_matogr BAnalyt Technol Biomed Life Sci,2005,821(1): 67.5韩凤梅,李紫,蔡敏,等.山麦冬的 HPLC ESI MS 特征指纹图谱研究J.中草药,2005,36(9):1395.
