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1、1清燥润肺合剂质量标准研究作者：周娟娟,潘金火,卢欢,朱和平,潘文【摘要】 目的 建立清燥润肺合剂的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中甘草酸含量进行测定。结果 薄层色谱中阴性无干扰,专属性强；甘草酸在 0.203 11.692 1 g 范围内线性关系良好,r0.999 8,平均回收率为98.24%,RSD2.62%。结论 本试验建立的方法简便、快捷,重复性好,可用于清燥润肺合剂的质量控制。 【关键词】 清燥润肺合剂；质量标准；甘草酸；高效液相色谱法；薄层色谱法Key words：Qingzao Runfei Mixtu
2、re；quality standard；glycyrrhizic acid；HPLC；TLC清燥润肺合剂由桑叶、石膏、甘草、黑芝麻、北沙参、麦冬、枇杷叶等 9 味药材组成。具有清燥润肺之效,用于燥气伤肺、干咳无痰、气逆而喘、咽干鼻燥、心烦口渴等病症。笔者根据处方组成药物的理化性质1及反复试验,对桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶进行了鉴别,同时,采用高效液相色谱法测定了制剂中甘草酸的含量,建立了可靠、稳定、简单的质量控制方法。1 仪器与试药Agilent1100 高效液相色谱仪,Agilent1100 紫外检测器,HP Chemstations 工作站。清燥润肺合剂 10 批样品由扬州市三药制药
3、有限公司生产并提供(批号为061101、061102、061103、061104、061105、061106、061107、061126、061128、061130)；甘草药材购自扬州市药材公司(由扬州市三药制药有限公司提供,批号为2060912、060920、060928),经南京中医药大学王春根教授鉴定为豆科植物甘草的干燥根及根茎；甘草酸铵对照品购自中国药品生物制品检定所(批号 110731- 200511)。硅胶 G 由青岛海洋化工厂生产；所有试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产,均为分析纯或色谱纯。2 定性鉴别2.1 桑叶取桑叶对照药材 2 g,加石油醚(6090 )20 mL,超声处理
4、 20 min,弃去石油醚液,药渣挥干,加无水乙醇 30 mL,超声处理 20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水 30 mL 使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为对照药材溶液。取本品 20 mL,蒸干,残渣加 80%乙醇 50 mL,超声处理 20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水 30 mL 使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为供试品溶液。取除桑叶以外的其它 8 味药材按处方比例制得的阴性样品 20 mL,用与供试品溶液制备相同的方法制得阴性对照液。吸取上述 3 种溶液各 5 L,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G薄层板上,以甲苯-乙酸
5、乙酯-甲酸(521)的上层溶液为展开剂,置于展开剂预饱和20 min 的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,而阴性对照液无此斑点。2.2 甘草2取甘草对照药材 1 g,加乙醚 30 mL,超声处理 20 min,滤过,药渣挥干,加甲醇 30 mL,超声处理 20 min,滤过,滤液挥干,残渣加水 30 mL 使溶解,滤过,用水饱和的正3丁醇萃取 2 次,每次 20 mL,合并正丁醇液,用水洗涤 2 次,每次 20 mL,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为对照药材溶液。取本品 10 m
6、L,加乙醚 30 mL,超声处理 20 min,静置分层,置分液漏斗中,分出水层,用水饱和的正丁醇提取 2 次,每次 20 mL,合并正丁醇液,用水洗涤 2 次,每次 20 mL,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为供试品溶液。取除甘草以外的其它 8 味药材按处方比例制得的阴性样品 10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。吸取上述 3 种溶液各 5 L,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15112)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%的硫酸乙醇溶液,在 105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点
7、,阴性对照液无干扰。2.3 北沙参取北沙参对照药材 5 g,加乙醚 30 mL,加热回流 1 h,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇 1 mL 使溶解,作为对照药材溶液。取本品 10 mL,蒸干,残渣加乙醇 20 mL 使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 1 mL 使溶解,作为供试品溶液。取除北沙参以外的其它8 味药材按处方比例制得的阴性样品 10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。吸取上述 3 种溶液各 10 L,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚(6090 )-乙酸乙酯(11)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨缸内熏 40 min,紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照
8、药材色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,阴性对照液无干扰。2.4 麦冬4取麦冬对照药材 2 g,加水 20 mL,加盐酸 2 mL,煮沸 2 min,放冷,滤过,滤液用三氯甲烷 10 mL 萃取,取三氯甲烷液,蒸干,残渣加三氯甲烷 0.5 mL 溶解,作为对照药材溶液。取本品 10 mL,加盐酸 1 mL,煮沸 2 min,放冷,滤过,滤液用三氯甲烷 10 mL 萃取 1 次,取三氯甲烷液,蒸干,残渣加三氯甲烷 0.5 mL 使溶解,作为供试品溶液。取除麦冬以外的其它 8 味药材按处方比例制得的阴性样品 10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。吸取上述溶液各约 5 L,分别点于同
9、一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(201)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%的硫酸乙醇溶液,在 105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照液无干扰。2.5 枇杷叶取枇杷叶对照药材 5 g, 加水 200 mL 煎煮 2 h,滤过,滤液用 5%的氢氧化钠溶液调 pH 值至 10,用乙酸乙酯 40 mL 萃取,浓缩,残渣加 1 mL 甲醇溶解,作为对照药材溶液。取本品 10 mL,加水 20 mL 稀释,摇匀,滤过,用 5%的氢氧化钠溶液调 pH 值至 10,用乙酸乙酯 40 mL 萃取,浓缩,残渣加 1 mL 甲醇溶解,作为供试品
10、溶液3。取除枇杷叶以外的其它 8 味药材按处方比例制得的阴性样品 10 mL,按供试品溶液制备方法制得阴性对照液。吸取上述溶液各约 10 L,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(841)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%的硫酸乙醇溶液,在 105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性5对照液无干扰。 3 含量测定3.1 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(6336.60.4)为流动相；检测波长为 250 nm；柱温 30 。理论塔板数按甘草酸峰计算应不低于 3 000。3.2 对照品溶液的制备精密称
11、取甘草酸铵对照品,加甲醇制成 0.207 3 mg/mL 的溶液。精密量取 5 mL,置10 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得 0.103 65 mg/mL 的对照品溶液。3.3 供试品溶液的制备取 10 个批号的样品,每批取 2 份,分别精密量取 20 mL,加水饱和的正丁醇 20 mL,超声 30 min,置分液漏斗中取正丁醇液。下层加水饱和的正丁醇 20 mL 萃取,合并正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇定量转移至 10 mL 量瓶中,定容,摇匀,即得。3.4 空白试验取除甘草以外的其它 8 味药材,按处方比例制得阴性样品,按供试品溶液的制备方法制得阴性对照液。精密吸取 10 L,连续
12、进样 3 次。结果表明,空白对照液未检出与甘草酸铵对照液对应的色谱峰,视为空白无干扰。色谱图见图 1。3.5 线性关系考察分别吸取浓度为 0.103 65 mg/mL 的甘草酸铵对照品溶液(折合甘草酸为 0.101 653 mg/mL)2、4、6、8、10 mL,用甲醇定容至 10 mL,各进样 10 L。以甘草酸铵平均峰面积为纵坐标,进样量(g)为横坐标进行线性回归,得回归方程：Y721.62X16, r0.999 8,指标成分甘草酸的线性范围为 0.203 11.692 1 g。3.6 精密度试验精密吸取同一对照品溶液 10 L,连续进样 5 次,结果测得甘草酸铵峰面积值的RSD0.71%
13、。3.7 稳定性试验精密吸取批号为 061105 的样品溶液 10 L,每间隔 2 h 进样 1 次,连续考察 10 h,峰面积的 RSD0.74%,表明指标成分在 10 h 内比较稳定。3.8 重复性试验取同一批号(061105)的样品 5 份,按“样品测定”项下方法测得样品中甘草酸铵的含量,RSD2.11%,表明重复性良好。3.9 加样回收率试验取已知含量同一批号(061105)的样品 6 份,精密量取 10 mL,分别精密加入浓度为0.103 65 mg/mL 的甘草酸铵对照液 4 mL,按供试品溶液的制备方法制得供试液。照“样品测定”项下方法测定,计算样品中甘草酸铵含量及加样回收率,结
14、果见表 1。表 1 加样回收率试验结果（略）3.10 样品测定7取 10 个批号的样品适量,按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。按上述色谱条件,分别进样 10 L,各进 2 针,用标准曲线法计算含量。10 个批号样品甘草酸含量测定结果依次为 0.031 8、0.038 3、0.039 3、0.037 1、0.038 9、0.038 6、0.038 5、0.038 9、0.039 1、0.039 1 mg/mL。4 讨论在定性鉴别的选取上,因为苦杏仁中的主要成分是苦杏仁苷,且其他成分的含量很少,而枇杷叶中也同样含有苦杏仁苷,故未对苦杏仁进行试验；而阿胶、黑芝麻的鉴别,经过试验,阴性均有干扰；故
15、暂未建立此 3 味药的鉴别方法。试验表明,上述桑叶、甘草、北沙参、麦冬、枇杷叶的鉴别专属性强,重复性好,操作简便。本试验曾以甲醇为流动相 A,水相为流动相 B,其中水相由水-冰醋酸(1001)组成,AB6634,试验结果显示,甘草酸铵峰与其他组分峰分离效果不理想。经过试验,采取以甲醇为流动相 A,水相为流动相 B,其中水相由水-冰醋酸(1001)组成,AB6337,试验结果显示,甘草酸铵峰与其他组分峰分离效果理想,出峰时间合适。【参考文献】1 肖崇厚,杨松松,洪筱坤.中药化学M.上海：上海科学技术出版社, 1997.168170.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S.北京：化学工业出版社,2005.5960.
