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1、1北柴胡茎叶化学成分研究作者：刘培 冯煦 董云发 王鸣 赵友谊 赵兴增【摘要】 目的对中药北柴胡茎叶的化学成分进行分离和鉴定。方法用色谱法和波谱解析方法对北柴胡茎叶的化学成分进行分离和结构鉴定。结果共得到 7 个化合物：香草酸、水杨酸、咖啡酸乙酯、原儿茶酸、柴胡色原酮酸、山萘酚、芦丁 。结论化合物为柴胡属植物中首次分离得到。 【关键词】 北柴胡 化学成分 结构鉴定Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of the aerial part of Bupleurum chinense DC. MethodsDried aerial
2、 parts of Bupleurum chinense DC.were extracted with EtOH and their chemical constituents were isolated and structures were confirmed by physical and chemical properties and spectral analysis. ResultsSeven compounds were obtained and identified as vanillic acid, salicylic acid, ethyl caffeate, protoc
3、aechuic acid, saikochromonic acid, kaempferol and rutin. ConclusionCompound were obtained from genus Bupleurum for the first time.Key words：Bupleurum chinense DC ； Chemical constituent； Structure identification柴胡为伞形科（Umbelliferae）柴胡属 Bupleurum 植物。具疏散退热，舒肝升阳之功效，主治感冒发热，寒热往来，疟疾，胸胁胀痛，月经不调及子宫脱垂等证。现代药理研究证
4、明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、增强免疫、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用。 中国药典（2005 年版）收载北柴胡 Bupleurum chinese DC.和狭叶柴胡 B. scorzonerifolium Willd.的干燥根为药用柴胡来源。作者对北柴胡茎叶的化学成分进行了提取、分离和结构鉴定，从其乙醇提取物中分离得到了 7 个化合物，并通过理化性质分析和波谱解析等手段确定了它们的结构为香草酸2（vanillic acid，1）、水杨酸（salicylic acid，2）、咖啡酸乙酯（ethyl caffeate，3）、原儿茶酸(protocaechuic acid，4）、柴胡色原酮
5、酸（saikochromonic acid，5）、山萘酚（kaempferol，6）、芦丁(rutin, 7)。其中化合物 2，3，4 为首次从柴胡属植物中分离得到。1 仪器与试药核磁共振光谱用 Bruker AV-300、AV-500 型核磁共振光谱仪测定（TMS 内标）；红外光谱用 Shimadzu IR-435 型红外分光光度计测定（KBr 压片）；熔点用 X4 型数字显示显微熔点测定仪（未校正）测定；ESI-MS 在 Agilent 1100 LC/MSD SL 上测定；LABCONCO(freeze dry system/LYPH LOCK 4.5)冷冻干燥仪。化合物纯度由 Agil
6、ent-1100 高效液相色谱仪检测。柱色谱材料为 D101 型大孔吸附树脂、聚酰胺（100200 目）、硅胶(200300 目)、RP-C18（YMC;12 m）及 Sephadex LH-20（Amersham Biosciences），柱色谱试剂均为分析纯，高效液相色谱试剂均为色谱纯。2 方法与结果2.1 提取与分离北柴胡干燥茎叶 15 kg，粉碎后用 80%乙醇冷浸提取 2 次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得总浸膏。总浸膏用正丁醇萃取，减压浓缩后得正丁醇部浸膏 320 g，水溶解后上大孔吸附树脂换水洗脱后，分别用不同体积分数的 95%乙醇梯度（=20%，30%，50%，70%）洗脱，
7、20%乙醇洗脱得流分，30%乙醇洗脱得流分，50%乙醇洗脱得流分，70%乙醇洗脱得流分。流分经硅胶干柱色谱，以氯仿-甲醇-水（体积比为 410.5）洗脱得 15 个组分（Fr.1Fr.15），其中，Fr.3 经 Sephadex LH-20，甲醇洗脱得化合物 1（15 mg）；Fr.5 经 RP-C18 反相柱色谱，水-甲醇（11）洗脱得化合物 2（12 mg）；Fr.7-12 经 RP-C18 反相柱色谱，水-甲醇3（91）洗脱得化合物 5（6 mg）。流分经硅胶干柱色谱，氯仿-甲醇溶剂系统（73）洗脱得化合物 4(7 mg)。流分经硅胶干柱色谱，石油醚-醋酸乙酯溶剂系统（体积比 1000，
8、9010，8020）梯度洗脱，得 20 流分，流分 10 经反相柱色谱，水-甲醇（体积比 37）洗脱得化合物 3(0.6 g)。流分经聚酰胺色谱柱不同体积分数乙醇梯度洗脱，得化合物 6(0.5 g)和 7(3.0 g)。2.2 结构鉴定2.2.1 化合物 1 无色针晶（醋酸乙酯），mp 210212， 溴甲酚绿显色反应阳性(示存在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)，1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：12.46(1H，brs，-COOH)，9.81(1H，brs，ArOH)， 7.43(1H，d，J=2.0Hz,H-2)，7.45(1H，dd，J=8.7，2.0Hz，
9、H-6 )， 6.84(1H，d，J=8.7Hz，H-5)， 3.81(3H，s，OCH3 )。NOESY 谱中，3.81(3H，s，OCH3 )与7.43(1H，d，J=2.0Hz,H-2)有 NOE 效应。经与文献1对照，确定化合物 1 为香草酸。2.2.2 化合物 2 无色针状结晶（乙醇），mp 151154，溴甲酚绿显色反应阳性(示存在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)， 1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：6.97(1H，d，J=7.9Hz，H-3)， 7.54(1H，dd，J=7.9，1.7 Hz，H-4)，6.94(1H，t，J=7.9Hz，H-5)，7
10、80(1H，dd， J=7.9，1.7Hz，H-6)，12.65（1H，s，-OH），15.87（1H，s，-COOH）。 13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：112.9(C-1)，161.1(C-2)，117.0(C-3)，135.6(C-4)，119.1(C-5)，130.2(C-6)，171.8(C-7)。以上氢谱与碳谱数据与文献2基本一致，确定化合物 2 为水杨酸。2.2.3 化合物 3 无色针晶(甲醇)，mp 142143 ，IR cm-1：3430(-OH)，1660(C=O)，1622(C=C)，1602，1590(-Ar)，1042(CO-)。1HNMR(500MH
11、z，DMSO- d6)：7.04(1H，d， J=2.1Hz，H-2)，6.75(1H，d， J=8.2 Hz，H-5)，7.00(1H，dd， J=8.2，2.1Hz，H-6)，6.25(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，7.46(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)， 4.15(2H，q，-CH2)，1.24(3H，t，CH3-)，9.09(1H，s，-OH)，9.54(1H，s，-OH)。ESI-4MS(mz)：208(M+)，180(M+ -CH2CH3+H)，163(M+ -OCH2CH3)。 13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：125.5（C-1），114.8（
12、C-2），145.5（C-3），144.9（C- 4），115.7（C-5），121.2（C-6），114.0（=C），148.3（=C），166.4（-C=O），59.6（-CH2），14.2（CH3-）。以上氢谱与碳谱数据与文献3基本一致，确定化合物 3 为咖啡酸乙酯。 2.2.4 化合物 4 无色针晶（甲醇），mp 204206，溴甲酚绿显色反应阳性(示存在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)， 1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：7.35（1H，d，J=2.0Hz，H-2）， 6.79(1H，d，J=8.2Hz，H-5)，7.30(1H，dd，J=8.2，2.0
13、Hz，H-6)，9.26(1H，s，-OH)， 9.63(1H，s，-OH)，12.27(1H，s，-COOH)。 13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：121.7(C-1)，116.6(C-2)，144.9(C-3)，150.0(C-4)，115.1(C-5)，121.9(C-6)，167.3(-COOH)。 以上氢谱与碳谱数据与文献4基本一致，确定化合物 4 为原儿茶酸。2.2.5 化合物 5 淡黄色针晶(甲醇)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)，溴甲酚绿显色反应阳性(示存在羧基)。 1HNMR(500MHz，DMSO-d6): 6.67(1H，s，H-3)，6.19
14、(1H，d，H-6)， 6.46(1H，d，H-8)。 13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：160.7(C-2)，109.0(C-3)，183.2（C-4），161.4（C-5）， 98.8（C-6），161.6（C-7），93.99（C-8），157.6（C-9），104.5（C-10），164.6（-COOH）。以上氢谱与碳谱数据与文献5基本一致，确定化合物 5 为柴胡色原酮酸。2.2.6 化合物 6 淡黄色针晶(甲醇)，mp 275276，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)，盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应阴性。与山萘酚标准品共薄层，Rf 值一致。与标准品混合
15、后熔点不下降。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):12.47, 10.75, 10.07, 9.35(各 1H, s, D2O 可交换, 5-OH, 7-OH, 3-OH, 4-OH), 8.04(2H,d,J=8.7Hz,H-2,H-6), 6.93(2H,d,J=8.7Hz,H-3,H-5), 6.44(1H,d,J=2.0Hz,H-8), 6.19(1H,d,J=2.0Hz,H-6)。以上氢谱数据与文献6基本一致，确定化合物 6 为山萘酚。2.2.7 化合物 7 淡黄色针晶(甲醇)，mp 185186，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(示有酚羟基存在)，盐酸-镁粉反应及 Molish
16、反应阳性，与芦丁标准品共薄层，Rf 值一致。高效液相检测与芦丁标准品保留时间相同（液相色谱条件：Agilent 5Eclipse CDB-C18 色谱柱，4.6 mm250 mm，5 m；柱温：30；流动相：20甲醇；流速：1.0 ml/min；检测波长：365nm）。1HNMR(500MHz，DMSO-d6):12.59,10.79,9.62,9.14(各 1H,s,D2O 可交换,5-OH,7-OH,3-OH,4-OH), 7.55（1H, d, J=2.0Hz, H-2）, 7.53(1H, dd, J=2.0,8.2Hz, H-6), 6.84(1H, d, J=8.1Hz, H-5), 6.38(1H, d, J=2.0Hz, H-8), 6.19(1H, d, J=2.0Hz, H-6), 5.33(1H, d, J=7.4Hz, Glc H-1)
