《bmi-1基因在胃癌中的表达及其临床意义(1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《bmi-1基因在胃癌中的表达及其临床意义(1)（45页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、江苏大学硕士学位论文Bmi-1基因在胃癌中的表达及其临床意义姓名：祁卫东申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：刘建20100610江苏大学硕士学位论文摘要目的探讨B m i l 基因在胃腺癌细胞株，胃癌组织和癌旁组织以及胃癌患者外周血中的表达水平及其与临床病理特征的关系，研究B m i l 基因与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法收集8 0 例胃癌患者的癌组织和癌旁组织，培养胃腺癌细胞株( S G C 7 9 01 ，B G C 8 2 3 ，A G S ) ，采用R T P C R 和R e a l t i m eP C R 的方法检测B m i l 基因的表达情况。另外收集经R T 。P
2、 C R 检测B m il 基因阳性胃癌患者的2 0 例外周血标本，同时收集2 0 例健康体检者外周血标本，用淋巴细胞分离液( F i c o l l ) 分离获得单个核细胞，采用巢式P C R 和R e a l t i m eP C R 的方法检测其B m i l 基因的表达情况。采用W e s t e r nb l o t 在蛋白水平上验证胃癌组织和对应的癌旁组织以及胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中B m i l 蛋白的表达情况。结果胃腺癌细胞株( S G C 7 9 0 1 ，B G C 8 2 3 ，A G S ) 中B m i 一1 均高表达；胃癌组织中B m i 一1 表达( 8
3、 5 ) 明显高于癌旁组织( 3 0 ) ，P 2 1 0H P F ) 或肿瘤直径 l c m 或肿瘤侵入肠壁( 固有肌层或肌层外) 或有淋巴江苏大学硕士学位论文结、肝脏转移。良性类癌细胞有中度以下异型性、核分裂指数参一I - c b n ( 赫5 璃，)图3 4R T P C R 检测胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中B m 卜1 基因的表达注：健康体检者单个核细胞( a ) ：a l 表达，a 2 不表这B m i - 1 ；胃癌患者单个核细胞( b ) ：b 4 不表达，其余均表达B m i 一1 ；B ：W a t e rb l a n k ；M ：D L 一2 0 0 0m a r
4、 k e r 。F i g 3 4D e t e c ti o no fB m i - l e x p r e s s i o ni nt h ep e r i p h e r a Ib l o o do f t h eg a s t r i cc a r c i n o m ap a t i e n t sa n dH e a l t hp e o p l eb yR T P C RN o t e ：p e r i p h e r a lb l o o do ft h eH e a l t hp e o p l e ( a ) ：a le x p r e s sB m i 一1m R N A
5、 ；a 2d on o te x p r e s sB m i 一1m R N Ap e r i p h e r a lb l o o do ft h eg a s t r i cc a r c i n o m ap a ti e n t s ( b ) ：a lIs a m p l e se x p r e ssB m i 1m R N Ae x c e p tb 4 ；3 3 5R e a l t i m eP C R 检测G A P D H 与B m i I 标准品的制备制备了B m i 1 基因和G A P D H 基因标准品，B m i 1 基因在0 5 x 1 0 3 p l 0
6、5 1 0 9 “l 范围内扩增线性系数为O 9 9 9 5 2 ，扩增效率为1 0 7 7 ，G A P D H 基因1 0 3 l x l 1 0 8 t l 范围内扩增线性系数为O 9 9 9 8 3 ，扩增率为1 1 8 ，可以用于实时定量P C R 。N o r mF I L * o r o图3 5 1B m i 一1 基因标准品扩增曲线F i 9 3 5 1T h ea m p li f i c a t i o nc u r v eo fB m i 一1S t a n d a r dp r e p a r a t i o n1 6江苏大学硕士学位论文图3 5 2B m i - 1
7、基因标准品扩增产物融解曲线F i g 3 5 2D e li q u e s c e n c ec u r v eo ft h ep r o d u c to fP C Rf o rB m i - 1i ns t a n d a r dp r e p a r a t i o n h U) C o r m u 吖O 图3 5 3B m i - 1 基因标准曲线F i g 3 5 3S t a n d a r dc u r v ef o rB m i 一。01 5、O1 52 S细C y c l e图3 5 4G A P D H 基因标准品扩增曲线F i 9 3 5 4T h ea m p li
8、f i c a ti o nc u r v eo fG A P D HS t a n d a r dp r e p a r a t i o n1 7江苏大学硕士学位论文图3 5 5G A P D H 基因标准品扩增产物融解曲线C o a c e r t t a 颤o a图3 5 6G A P D H 基因标准曲线F i g 3 5 6S t a n d a r dc u r v ef o rG A P D H3 3 6R e a l t i m eP C R 检测B m i 1 在胃癌组织和癌旁组织中的表达R e a l t i m eP C R 结果显示，胃癌组织中B m i 1m R N
9、A 表达显著高于其癌旁组织和胃癌周围转移淋巴结组织，胃癌周围转移淋巴结组织q b B m i 1m R N A 表达高于其癌旁组织，采用贮检验，P 0 0 5 。结果见图3 3 6 。1 8江苏大学硕士学位论文图3 3 6R e a lt i m eP c R 检测B m i 一1 在胃癌组织，癌旁组织，胃癌周围转移淋巴结组织的表达注：1 ：胃癌组织；2 ：癌旁组织，3 ：胃癌周围转移淋巴结组织。F i g 3 3 6E x p r e s s i o no fB m i 一1m R N Ab yr e a l - t i m eP C Ri nt h ep a lr e dg a s t r
10、 i cc a n c e r ，m a t c h i n g ，n o n c a n c e r o u st is s u e sa n dm e t a s t a t i cl y m p hn o d et i s s u e N o t e ：1 ：g a s t r i cc a n c e rt is s u e ；2 ：，m a t c h i n g ，n o n c a n c e r o u st i s s u e s ；3 ：m e t a s t a t i cl y m p hn o d et i S s u e 3 3 7R e a l - t i m e
11、P C R 检测胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中B m i 1 基因的表达R e a l t i m eP C R 结果显示，胃癌患者单个核细胞中B m i 1 的表达高于健康体检者，采用贮检验，P O 0 5 。( 图4 ) 。1 9江苏大学硕士学位论文图3 3 7R e a lti m eP c R 检测胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中B m i _ 1 基因的表达注：1 ，3 ，5 ：胃癌患者单个核细胞；2 ：，4 ，6 健康体检者血单个核细胞F i g 3 3 7E x p r e s s i o no fB m i - 1m R N Ab yr e a l t i m eP C
12、Ri np e r i p h e r a lb l o o do ft h eg a s t r i cc a r e i n o m ap a t i e n t sa n dH e a lt hp e o p l e N o t e ：1 ，3 ，5 ：p e r i p h e r a lb l o o do f t h eg a s t r i cc a r c i n o m ap a ti e n ts ；2 ：，4 ，6 ：3 3 8W e s t e r nb l o t 结果p e r i p h e r a lb l o o do fH e a l t hp e o p
13、l e3 3 8 1W e s t e r nb l o t 检测配对的胃癌，癌旁组织中B m i 1 蛋白的表达以G A P D H 的蛋白表达为内参照，B m i 1 蛋白在胃癌患者癌组织B m i 一1 强表达，而在癌旁组织中呈弱表达。两者表达水平有差异。，见图3 3 8 1TtX l丁2N 2B 磷l 一重( 3 4 K 薹) )G A P D H ( 3 8 K D )图3 3 8 1胃癌患者癌组织和癌旁组织中B m i 一1 蛋白表达注：癌组织( T ) ：均表达B l l l i 一1 ；癌旁组织( N ) ：N 1 ，弱表达，N 2 不表达_ B m i 一1 ；F i g 3
14、 3 8 1B m i - 1p r o t e i ne x p r e sS i O i li ng a s t r i Cc a n c e r ，a d j a c e n tn o n c a n c e r o u stis s u e sb yW e S t e r nb l o tN o t e ：G a S t r iCtiSs u e ( T ) ：a 1ls a m p l e se x p r e s SB m i 一1 ；N o n c a n c e r o u stis s u e s ( N ) ：N 1 w e a k l ye x p r e s s ，N
15、2d on o te x p r e s sB m i 一1 2 0江苏大学硕士学位论文3 3 8 2W e s t e r nb l o t 检测胃癌患者及健康体检者单个核细胞中B m i 1 蛋白表达以内参基因G A P D H 的蛋白表达为参照，在胃癌患者和健康体检者外周血单个核细胞中B m i 1 均呈强表达，表达水平未见明显差异，见图3 3 8 2( 。l、2D1D 2G A 要) D H ( 38 K i _ ) )3 3 8 2W e s t e r nb l o t 检测胃癌患者及健康体检者单个核细胞中B m i - 1 蛋白表达注：胃癌患者( c ) 及健康体检者( D )
16、单个核细胞c P B m i - 1 蛋白均表达F i g 3 3 8 2B m i 一1p r o t e i ne x p r e s s i o ni np e r i p h e r a lb l o o do ft h eg a s t r i cc a r e i l l o l n ap a t i e n t sa n dt t e a l t hp e o p l eb yw e $ t e r nb l o tN o t e ：a l ls a m p I e s i f it h ep e r i p h e r a lb l o o do f t h eg a s t r i cc a r e i n o m ap a t i e n t s ( D ) a n
