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1、生生 物物 化化 学学 实实 验验 讲讲 义义生物化学实验基本要求生物化学实验基本要求一、生物化学实验室规则一、生物化学实验室规则 1. 每个同学都应该自觉遵守课堂纪律,维护课堂秩序,不迟到,不早退,不大声谈笑。 2. 实验前必须认真预习,熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤,懂得每一操作步骤的意义和了解所 用仪器的使用方法,否则不能开始实验。实验过程中要严肃认真地按操作规程进行实验,并把实验结果 和数据及时、如实记录在实验记录本上,文字简练、准确,要求同学们记录完整准确的实验数据,养成 良好的实事求是的工作作风和求真务实的科学态度,严禁伪造实验数据,弄虚作假。 3. 实验台面应随时保持整洁,仪
2、器、药品摆放整齐,公用试剂用毕,应立即盖严放回原处。勿使试剂、 药品洒在实验台面和地上。实验完毕,仪器须洗净放好,将实验台面抹试干净,才能离开实验室。 4. 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约。洗涤和使用仪器时,应小心细致,防止损坏仪器。 使用贵重精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障须立即报告教员,不得擅自动手检修。 5. 实验室内严禁吸烟!煤气灯应随用随关,严格做到:人在火在,人走火灭。乙醇、丙酮、乙醚等易 燃品不能直接加热,并要远离火源操作和放置。实验完毕,应立即关好煤气开关和水笼头,拉下电闸。 离开实验室以前应认真、负责地进行检查,严防发生安全事故。 6. 所有实验用的废液,
3、废弃物等,都要收集在适当的容器内,加以储存再处理,不能倒在水槽内或到 处乱扔。 7. 仪器损坏时,应如实向教员报告,并填写损坏仪器登记表,然后补领。 8. 实验室内一切物品,未经本室负责教员批准,严禁携出室外,借物必须办理登记手续。 9. 每次实验课由班长负责安排值日生。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的 工作及填写实验情况登记卡和实验记录 。 二、实验报告要求及格式二、实验报告要求及格式 实验结束后,应及时整理和总结实验结果,写出实验报告。 下面简单介绍实验报告的格式。 (实验名称) 姓名 学号 日期 目的和要求 原理 试剂配制及仪器 操作方法 实验结果 讨论与分析 在实
4、验报告中,目的和要求、原理以及操作方法部分应简单扼要的叙述,但是对于实验条件(试剂配 制及仪器)和操作的关键环节必须写清楚。对于实验结果部分,应根据实验课的要求将一定实验条件下 获得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比,并尽量总结成各种图表,如原始实验数据及其处 理的表格、标准曲线图以及比较实验组与对照组实验结果的图表等。另外,还应针对实验结果进行必要 的说明和分析。讨论部分可以包括:关于实验方法(或操作技术)和有关实验的一些问题,如实验的正 常结果和异常现象以及思考题,进行探讨;对于实验设计的认识、体会和建议;对实验课的改进意见等。三、生物学实验室常用仪器使用方法与保养三、生物学实验室
5、常用仪器使用方法与保养 1、冷冻离心机、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它 生物样品的分离制备实验中,都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必 需的重要工具。 使用方法:使用方法: (1)离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。 (2).打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心 筒须与样品同时平衡),关闭机盖。 (3).按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键,以
6、便记忆输入的各项信息。 (4).按启动键,离心机将执行上述参数进行运作,到预定时间自动关机。 (5).待离心机完全停止转动后打开机盖,取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机 腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。 注意事项:注意事项: (1).机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线。 (2).开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入。 (3).样品应预先平衡,使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。 (4).挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏,以免腐蚀机腔或造成事故。 (5).擦拭离心机腔时动作要轻,以免损坏机腔内
7、温度感应器。 (6).每次操作完毕应作好使用情况记录,并定期对机器各项性能进行检修。 (7).离心过程中若发现异常现象,应立即关闭电源,报请有关技术人员检修。 附:相对离心力与每分钟转速的换算 离心机的转速,在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转速函数,亦为离心 半径的函数,即转速相同时,离心半径越长,产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学 的,近年来主张用相对离心力(RCF)来表示比较合理。现在国际资料中,已改用相对离心力来表示。 2、分光光度计分光光度计 不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同,从而形成特征性的吸收光谱。分光光度法不仅适应 于可见光区,
8、同时还可扩展至紫外光区及红外光区,因此给科研实验带来了极大方便。下面重点介绍分 光光度计的使用及注意事项。 使用规则 (1).接通稳压器电源,待稳压器输出电压稳定至 200V 后打开光度计电源,仪器自动进入初始化。 (2).初始化约需时 10 min,内容包括:寻找零级光;建立基线;最后当显示器指示nm 时, ,表明 仪器完成初始化程序,可进入检测状态。 (3).按要求输入各项参数,选择相应比色杯(玻璃或石英) ,将空白管、标准管及待测管依次放入比色皿 架内,关上比色池盖。 (4).以空白管自动调零。 (5).试样槽依次移至样品位置,待数据显示稳定后按“START/STOP”键,打印机自动打印
9、所测数据,重复 上述步骤,直到所有样品检测完毕。 (6).检测结束后应及时取出比色杯,并清洗干净放回原处,同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关,做 好使用情况登记。 注意事项注意事项 (1).仪器初次使用或使用较长时间(一般为一年) ,需检查波长准确度,以确保检测结果的可靠性。 (2).由于长途运输或室内搬运可能造成光源位置偏移,导致亮电流漂移增大。此时对光源位置进行调整, 直至达到有关技术指标为止。若经调整校正后波长准确度、暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未 符合要求,则应停止使用,并及时通知有关技术人员检修。 (3).每次检测结束后应检查比色池内有否溶液溢出,若有溢出应随时用滤纸吸干,
10、以免引起测量误差或影 响仪器使用寿命。 (4).仪器每次使用完毕,应于灯室内放置数袋硅胶(或其它干燥剂) ,以免反射镜受潮霉变或沾污,影响 仪器使用,同时盖好防尘罩。 (5).仪器室应通常保持洁净干燥,室温以 5-35为宜,相对温度不得超过 85%。有条件者应于室内配备空 调机及除湿机,以确保仪器性能稳定。 (6).仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质,以免损坏仪器。 (7).仪器长时间不用时,应定时通电预热,每周 1 次,每次 30min,以保证仪器处于良好使用状态 3、电泳仪:、电泳仪: 电泳技术是生物化学与分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大
11、类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类 电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维 薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G 薄层等,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。 所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动 速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组 份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原 理设计制造的。 使用方法使用方法 (1).首先用
12、导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接,注意极性不要接反。 (2).电泳仪电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小,根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。(3).接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止,设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行。(4).工作完毕后,应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头。 注意事项注意事项 (1).电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取 放东西,如需要应先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电。 (2).仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,
13、虽然仪器内部附设有保险丝, 但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 (3).由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间 也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。 (4).在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围) ,可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容 易影响仪器寿命。 (5).某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接 好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏。 (6).使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免
14、发生意 外事故。 4、分析天平:分析天平: 分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法,是获得可 靠分析结果的保证。分析天平的种类很多,有普通分析天平、半自动/全自动加码电光投影阻尼分析天平 及电子分析天平等。 操作方法操作方法 (1).检查并调整天平至水平位置。 (2).事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器) ,按仪器要求通电预热至所需时间。 (3).预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节。待稳定标志显示后,可进行正式 称量。 (4).称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,轻按一下去皮键,天平将自动校对零点,然后 逐渐
15、加入待称物质,直到所需重量为止。 (5).被称物质的重量是显示屏左下角出现“”标志时,显示屏所显示的实际数值。 (6).称量结束应及时除去称量瓶(纸) ,关上侧门,切断电源,并做好使用情况登记。 注意事项注意事项 (1).天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁、干燥及较恒定的温度,同时应避免光线直接 照射到天平上。 (2).称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留 物质时使用。 (3).电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热,每周一次,每次预热 2h,以确保仪器始终处于良好使用状态。 (4).天平箱内应放置吸潮剂(如硅胶) ,当吸
16、潮剂吸水变色,应立即高温烘烤更换,以确保吸湿性能。 (5).挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量,防止腐蚀天平。实验一实验一 蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定考马斯亮蓝G-250染色法 一、实验目的:一、实验目的: 1、学习、掌握利用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量的原理及方法;2、掌握分光光度计的使用方法; 3、掌握标准曲线的绘制。 二、实验原理二、实验原理: 蛋白质含量测定依法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老 的经典方法,即定氮法,双缩脲法(Biuret 法) 、Folin酚试剂法(Lowry 法)和紫外吸收法。另外还有 一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford 法) 。其中 Bradford 法和 Lowry 法 灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏 1020 倍,比 Biuret 法灵