《急性肺栓塞大鼠肺部炎症反应的机制及白藜芦醇的干预作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《急性肺栓塞大鼠肺部炎症反应的机制及白藜芦醇的干预作用（49页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、目的急性肺栓塞大鼠肺部炎症反应的机制及白藜芦醇的干预作用中文摘要l研究大鼠急性肺栓塞后肺部炎症反应的机制；2研究中药单体白藜芦醇对急性肺栓塞大鼠肺部炎症反应的干预作用。方法9 6 只S D 大鼠按完全随机设计分为正常对照组( N 组) ，溶剂对 照组( D 组) ，血栓栓塞组( T 组) ，白藜芦醇+ 栓塞组( T R 组) ，各 组分l h 、4 h 、8 h3 个时间点组，分别为N l 、N 4 、N 8 组，D l 、D 4 、 D 8 组，T l 、T 4 、T 8 组，T R l 、T R 4 、T R 8 组，每组8 只。采用大鼠自 体血凝栓回输体内( 导管经右颈静脉插至肺动脉)
2、复制急性肺血栓 栓塞模型。所有各组大鼠均接受手术及插管处理。N 组于相应时间 点大鼠尾静脉注入等量生理盐水：D 组大鼠尾静脉注射等量1 二甲 基亚砜( D M S 0 ) 溶液( D M S 0 用生理盐水稀释成l 的D M S O 溶液) ；T 组大鼠输入血栓复制急性肺栓塞模型；T R 组大鼠在输入血栓复制急性肺栓塞模型后，立即予尾静脉注射白藜芦醇溶液l O m g k g ( 白藜 芦醇溶于1 的D M S O 溶液) 。按改良右心导管法制备急性肺栓塞模型。 各组大鼠右心房取血( 1 0 m l 注射器右心房缓慢取血5 - 8 m 1 ) 室温静 置l O m i n 后4 0 0 0 r
3、 m m i n 、4 离心l O m i n 分离血浆，用E L I S A 法检 测大鼠血浆单核细胞趋化蛋白- 1 ( M C P - 1 ) 和肿瘤坏死因子一Q ( T N F Q ) 的变化；取大鼠左肺中下叶用1 0 多聚甲醛液固定，石蜡包埋切片，用于大鼠肺组织H E 染色、免疫组化法检测M C P - 1 、激光共聚焦 显微镜下采用免疫荧光法检测磷酸化p 3 8 的表达；取大鼠右肺及左温州医学院硕士学位论文下肺装入D E P C 水处理的冷冻管一7 0 保存，用于R T - P C R 检测肺组织M C P - 1m R N A 及w e s t e r nb l o t 检测肺组织
4、磷酸化p 3 8 的变化。结果l 肺组织H E 染色结果显示：N 、D 组各时间点组大鼠肺内炎症细胞数较少；急性肺栓塞组各时间点组大鼠肺内可见大量炎症细胞； T R l 组大鼠肺组织内炎症细胞数较T 1 组无明显差异( P O 0 5 ) ， T R 4 组、T R 8 组大鼠肺组织内炎症细胞数分别较T 4 组、T 8 h 组为少( P O 0 5 ) 。( 2 ) T N F a 检测结果：T l 组大鼠血浆T N F a 较N l 、D l 组无统计学意义( P 0 0 5 ) ，T 4 、T 8 组大鼠血浆T N F a 分别较N 、D 组相应时间点有统计学意义( P O 0 5 ) ，
5、T R 4 、T R 8 组大鼠血浆T N F Q 的表达量分别较T 4 、T 8 组为低( P O 0 5 ) ， T R 4 、T R 8 组大鼠肺组织中磷酸化p 3 8 的量分别较T 4 、T 8 组为低 ( P 0 0 5 ) ， T R 4 、T R 8 组大鼠肺组织中M C P - 1m R N A 的量分别较T 4 、T 8 组为低( P 0 0 5 ) T h el u n gi n f l a m m a t o r yc e l l so fG r o u pT R 4a n dG r o u pT R 8w e r el e s st h a nt h a to fG r
6、 o u pT 4a n dG r o u pT 8 偿 O 0 5 ) T h e r ew e r en os i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c eb e t w e e nt h eM C P 一1o fG r o u pT Ra td i f f e r e n tt i m ep o i n t si np l a s m aa n dt h a to fG r o u pT ( P 0 0 5 ) ( 2 ) T N F 一伐t e s tr e s u l t s ：t h ep l a s
7、 m ao fT N F 一0 li nr a t sw e r en os t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n c eb e t w e e nt h eG r o u pT 1a n dG r o u pN 1o rG r o u pD1 ( P O 0 5 ) B u t ，t h ep l a s m ao fT N F ai nG r o u pT 4a n dG r o u pT 8w a sr e s p e c t i v e l yh i g h e rt h a nt h a to fG r o u pNa n dG r o
8、 u pDi nt h ec o r r e s p o n d i n gt i m e 但0 0 5 ) ，T h ee x p r e s s i o no fT N F - 仅i nG r o u pT R 4a n dT R 8w e r er e s p e c t i v e l yl e s st h a nt h a to fG r o u pT 4a n dG r o u pT 8 伊 0 0 5 ) T h ep h o s p h o r y l a t i o np 3 8o f温州医学院硕士学位论文G r o u pT R 4a n dG r o u pT R 8i
9、 nl u n gt i s s u el e s st h a nt h a to fG r o u pT 4a n dG r o u pT 8 ( P0 0 5 ) T h eM C P 一1m R N Ai nG r o u pT R 4 ，T R 8w a sh i g h e rt h a nG r o u pT 4a n dG r o u pT 8 伊 O 0 5 ) ，T R 4 、T R 8 组分别较T 4 、T 8 组大鼠肺内炎症细胞数少( P 0 0 5 ；V ST 4 组A P 00 5 ，V STT 4 组P o 0 5 ) ( 见表2 - 1 ) 。表2 一l 各组各
10、时间点大鼠血浆中M C P - I 的表达( 曼s ，刀韵T a b l e 2 1M C P Ie x p r e s s i o no fp l a s m aa td i f f e r e n tt i m ep o i n t si ne a c hg r o u p ( x s ，口甸V SN l 、D l 组A P 0 0 5 ，V SN 4 、D 4 组木P O 0 5 ，V SN 8 、D 8 组P O 0 5 1 2N 、D 、T 、T R 组各时间点大鼠血浆中M C P l 的表达量比较结果显示：N 、D 、T 、T R 组各时问点大鼠血浆婀P l 的表达量无统计学意义(
11、 P 0 0 5 ) ( 见表2 2 ) 。表2 - 2 各时间点各组大鼠血浆M C P - 1 的表达( 爻s ，7 钢T a b l e 2 2M C P le x p r e s s i o no fp l a s m ai ne a c hg r o u pa td i f f e r e n tt i m ep o i n t s ( 曼s ，刀韵V SN l 、N 4 组P O 0 5 ，V SO l 、D 4 组半P 0 0 5 ，V ST 1 、T 4 组P O 0 5 ，V ST R l 、T R 4 组# P 0 0 5 2 4温川医学坑碗l 学位沧文一。A 卜N 0 2
12、一= i = = = ；j uT T R48时u J ( h )图21各组各时间点大鼠血浆中M C P l 量的变化图T 4 组与N 4 、D 4 组比较+ P O0 5 ，T 8 组与N 8 、D 8 组比较A P 00 5F i g2 】t h ec h a n g eIl g u r eo fM C P 一1i nP l a s m aa td i f f e r e n tt i m ep o i n t so fe a c hg r o u p13 各时间点N 、D 、T 、T R 组人鼠血浆T N F Q 的表达量比较结果显示：T 1 组较N l 、D l 组无统计学意义( P O
13、0 5 ) ，T 4 、T 8 组分别较N 、D 组千H 应时间点有统计学意义( P 00 5 ) ， R 4 、T R 8 组大鼠向浆T N F o 的表达量分别较T 4 、T 8 组有统计学意义( P 00 5 ：V SN 4 、D 4 组P 00 5 ：V SD I 、D 4 组P 00 5 ：V ST i 组# P 0 0 5 ) ，T R 4 、T R 8 组大鼠肺组织磷酸化p 3 8O D 比值分别较T 4 、T 8 组低( P O 0 5 ；V SN 4 、D 4 组半P O 0 5 ；V SD 1 、D 4 组A P 0 0 5 ；V ST l 组：I ：P 00 5 ) ，T
14、 R 4 、T R 8 组大鼠肺组织M C Plm R N AO D 比值分别较T 4 、T 8 组低( P 0 0 5 ；v sN 4 、D 4 组术P 0 0 5 ；V SD 1 、D 4 组：I tP 0 0 5 ；V ST 1 组# 术P O 0 5 ) ，表明肺栓塞后并未引起全身血中M C P - 1 显著的升高。然而，用半定量R T - P C R 检测肺组织中M C P - I m R N A 表达的结果显示，栓塞组各时间点大鼠肺组织中M C P - Im P d N AO D 比值分别较N 、D 组高，并随时间的延长O D I ：L 值变大，表明在肺栓塞后肺组织中M C P l
15、 的表达升高，并随时间的延长而升高。免疫组化检测M C P l 的表达结果显示，M C P - 1 在肺组织中明显表达。可见，在肺栓塞早期M C P l 的表达即升高，而M C P - 1 做为炎症趋化因子可能对急性肺栓塞后肺部炎症细胞的浸润起着关键的作用。单核细胞趋化蛋白l ( M o n o c y t ec h e m o a t t r a c t a n tp r o t ei n l ，M C P 1 ) 属于趋化因子家族。趋化因子是对白细胞具有趋化作用的一类小分子蛋白质或多肽，可分为4 类，u o c x c 趋化因子、c c 型趋化因子、C 趋化因子及C N C 趋化因子。M
16、C P - 1 是c c 亚族的一员，其基因位于第1 7 号染色体上。M C P 一1 可由体内多种细胞产生，包括内皮细胞、平滑肌细胞、单核细胞、巨噬细胞、系膜细胞、脂肪细胞等乜5 l ，M C P - 1 的功能主要是能够趋化和活化诸如树突状细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、T 淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞及嗜酸性粒细胞等炎性细胞瞳6 1 ，使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集。M C P l 能促单核细胞迁移到炎症部位，主要通过与C C R 2 高亲和力的结合而发挥生物学作用。单核细胞趋化蛋白( m o n o c y t ec h e m o a t t r a c t a n tp r o t e i n ，M C P s ) 的受体( c cc h e m o
