《环孢素A对滋养细胞生物学功能及其信号转导的调节作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《环孢素A对滋养细胞生物学功能及其信号转导的调节作用（125页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、英文缩写览表英文缩略书丘A P 1B C S G lC s AC K 7D A BD E P CD H a n k sD M E ME L l S AE M Te v C T BE R K l ，2F B SF C MF I T cK S A PKM A P KM ：E KM M PM T TN F 虹N F K BO DP A G EP A I 1英文全称英文缩写一览表a c t i v a t i n gp r o t e i n1B r e a s tc a n c e r s p e c i f i cg e n e1C y e l o s p o r i nAc y t o k e
2、r a t i n7d i a m i n o b e n z i d i n eD i e t h y lp y r o c a r b o n a t eC a 2 + M 9 2 + 一f r e eH a n k s b a l a n c e ds a l ts o l u t i o nD u l b e e c o Sm o d i f i e dE a g l e sm e d i u me n z y m e l i a k e di m m u n o s o r b e n ta s s a ye p i t h e l i a i m e s e n c h y m a
3、 lt r a n s i t i o ne x t r a v i l l o u se y t o t r o p h o b l a s t s ，e x t r a e e l l u l a rs i g n a l r e g u l a t e dk i n a s e s1 ，2f e t a lB o v i n eS e r u mf l o wc y t o m e t r yf l u o r e s c e i ni s o t h i o c y n a t eJ u nN - t e r m i n a lk i n a s e s t r e s s - a e
4、 t i v a t e dp r o t e i nk i n a s em i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e队PK i n a s eK i n a s e ，M A P K Km a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s3 一( 4 ，5 d i m e t h y l t h i a z 0 1 2 一y 1 )一2 ，5 - d i p h e n y l t e t r a z o l i u mb r o m i d eN u c l e a rf a c t
5、 o ro f a c t i v a t e dTc e l l sN u c l e a rf a c t o rk a p p a Bo p t i c a ld e n s i t yP o l y a c r y l a m i d eg e lp l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o r1中文译名活化蛋白1乳腺癌细胞特异基因1环孢素A角蛋白7二氨基联苯胺焦碳酸二乙酯无钙、镁的H a n k s 平衡盐溶液D M E M 培养基酶联免疫吸附试验上皮基质转换绒毛外细胞滋养细胞细胞外信号调节激酶胎牛血清流式细胞术异硫氰酸荧
6、光素J u nN 端激酶，应激活化的蛋白激酶丝裂原激活的蛋白激酶M A P 激酶的激酶基质金属蛋白酶3 - ( 4 ，5 - 二甲基噻唑) 一2 ，5 一乙苯基四睦溴盐四甲基偶氮唑盐活化T 细胞的核因子核因子- k a p p a B光密度聚丙烯酰胺纤溶酶原活化剂的抑制剂英文缩写一览表p h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n eP r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e np b o p h a t i d y l i n o s i t o l 一3 】( i n a s eP h
7、 o r b o lm y r i s t a t ea c e t a t eR p l a y c o e r y t h r i nR e c u n e n ts p o n t a n e o u sa b o r t i o nr e v e r s et r a n s c r i p t i o n - p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nS o d i u md o d e c y ls u l f a t e“ I r i sB u 毹r e dS a l i n eT r a n s f o r m i n gg r o
8、w t hf a c t o r - BU r o k i n a s ep l a s m i n o g e na c t i v a t o rv i l l o u sc y t o t r o p h o b l a s t s ，v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rb a s ep a i rh o u rk i l od a l t o nm i l l i g r a mm i l I i l i t e rn a n o g r a m m er o u n d sp e rm i n u t e
9、p m o l 1m i c r o l i t r em i c r o g r a m磷酸盐缓冲液增殖细胞核抗原磷脂酰肌醇3 激酶佛波酯藻红蛋白反复自然流产逆转录一聚合酶链反应十二烷基硫酸钠T r i s 盐缓冲液转化生长因子B尿激酶纤溶酶原活化剂绒毛细胞滋养细胞血管内皮细胞生长因子碱基对小时千道尔顿毫克毫升毫微克转分钟微摩尔升微升微克呱眦一M眦随一鼢麟僻撇伽一郇h妣嘴叫蜡掣小心嵋中文摘要环孢素A 对滋养细胞生物学功能及其信号转导的调节作用中文摘要环孢素A ( C y c l o s p o r i n A ，C s A ) 自2 0 世纪7 0 年代应用于临床以来，作为免疫抑制剂发挥了极
10、其重要的作用；是目前公认的抑制移植排斥反应最为有效的药物。对某些自身免疫性疾病的治疗亦已取得一定的疗效。正常生理妊娠类似于同种异体移植，胚胎作为自然的同种移植物不受母体免疫排斥是免疫排斥现象的难一例外，实际上反映母体对胚胎的免疫耐受。而妊娠失败多囡母体对胚胎的免疫排斥所致。我们前期研究发现，于孕早期( 胚胎着床期) 腹腔注射C s A ，可恢复小鼠妊娠失败模型母一胎界面T h l T h 2 T h 3 型细胞因子免疫调节的生理平衡，形成维持正常妊娠所需的T h 2 3 型免疫偏倚，并诱导外周免疫细胞对父系抗原的免疫耐受，使流产模型的妊娠预后达到正常妊娠水平【2 】；体外实验证实C s A 可
11、刺激人早孕期滋养细胞生长，并改变其细胞形态，使其迁移能力及侵袭性增强 3 1 。采用抑制性差减杂交法获得在C s A 作用于人J A R 细胞系后6 个高表达基因，其中1 个为已知基因。2 个为功能未知的m R N A ，3 个为位于1 6 号染色体上的E S T 。显然C s A 对母胎界面具有良好的调节作用。滋养细胞携带来自胎儿的外胚层抗原，是母一胎界面唯一与母体免疫系统真接接触的胎儿细胞，在母一胎免疫耐受中发挥重要作用。许多病理性妊娠，如反复自然流产、妊高征及胎儿宫内生长迟缓等均伴有滋养细胞某些生物学功能异常。以C s A 作为研究工具，观察C s A 对细胞滋养细胞生物学功能及功能基因
12、表达的影响，并进一步解析其信号转导机制，对于解析C s A 新的药效机制，具有重要意义。本研究通过原代培养早孕期人细胞滋养细胞及J A R 滋养细胞株，在C s A 作用下，研究作为自然移植物的细胞滋养细胞生物学功能及功能基因表达的改变及其信号转导机制。为反复自然流产等妊娠疾患的治疗提供线索。中文摘要第一部分人早孕期细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定目的建立早孕期人细胞滋养细胞的分离、纯化方法，了解C D l 3 3 在滋养层细胞的表达情况，为鉴定滋养层细胞株及原代分离的细胞滋养层细胞提供新的细胞内标志。方法通过胰蛋白酶D N a s e1 分步消化，P e r c o l l 密度梯度离心法分离
13、纯化细胞滋养层细胞，经抗C y t o k e r a t i n 7 、V i m e n t i n 单克隆抗体免疫细胞化学和流式细胞术鉴定其纯度。采用三种不同的C D l 3 3 荧光标记的单克隆抗体在7 0 的甲醇固定前后对原代分离的细胞滋养层细胞和绒毛膜上皮癌细胞株( J A R ) 行流式细胞术( F C M ) 分析。结果抗C y t o k e r a t i n 7 、V i m e n t i n 单克隆抗体行免疫细胞化学和流式细胞仪鉴定细胞滋养细胞纯度达9 5 以上。7 0 甲醇固定前，三神C D l 3 3 单克隆抗体均不能与滋养层细胞反应；7 0 甲醇固定后，抗C D
14、 l 3 3 1 ( A C l 3 3 1 A P C ) 、抗C D l 3 3 2 ( 2 9 3 C 3 一P E ) 仍不能与滋养层细胞反应，而抗C D l 3 3 2 ( A C l 4 1 一P E )与细胞滋养层细胞胞内抗原结舍，A C l 4 1 阳性的细胞也是C y t o k e r a f i n 7 阳性的细胞。结论胰蛋白酶D N a s e1 分步消化，P e r c o l l 密度梯度离心法可简单、快速获得高纯度人早孕期细胞滋养细胞。C D l 3 3 2 A C l 4 1 可作为细胞滋养层细胞鉴定的一种可靠细胞内标志。第二部分环孢素A 对早孕期人细胞滋养细胞
15、增殖与凋亡的影响及其信号转导机制目的探讨环孢素A ( C y c l o s p o r i nA ，C s A ) 对早孕期人细胞滋养细胞及人滋养细胞肿瘤细胞系J A R 增殖与凋亡的调控作用。方法应用硅化聚乙酰胺吡咯烷酮( P e r c o l l ) 密度梯度离心法，分离纯化早孕期人细胞滋养细胞，经免疫细胞化学和流式细胞仪鉴定其纯度；采用M T T 法评价早孕期入细胞滋养细胞及入J A R 缨胞系活力；P C N A - P E 单标志流式细胞术分析细胞增殖情况、A n n e x i nV - F I T C P I 双标记流式细胞术分析细胞早期凋亡；通过W e s t e r n
16、b l o t 观察p E R K I 2 的水平；E L I S A 分析M A P 激酶活性。细胞内共转染A & 1 L u c i f e r a s e 、N F r B L u c i f e r a s e ：N F A T - L u c i f e r a s e 与R e n i l l a中文摘要L u c i f e r a s e S V 4 0 报告质粒，采用荧光素酶报告基因双检测系统分析各转录因子的启动子活性。结果( 1 ) C s A 在有效剂量范围内( 1 1 0 。u m o l L 1 0 u m o l L ) 以浓度依赖方式增强旱孕期人细胞滋养细胞活力和P C N A 表达：以1 0 um o l L 的C s A促进作用最强。C s A 浓度达1 0 OHm o l L 时，则抑制细胞滋养细胞的增殖活性：对J A R 细胞系呈现类似作用。( 2 ) T G F B1 、T G F B2 抑制细胞滋养细胞基础的及C s A 诱导
