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1、植物分析植物分析实验指导书安徽农业大学安徽农业大学 资环学院资环学院 20082008 年年 6 6 月月植物样品分析实验目录植物样品分析实验目录实验一实验一 植物样品采集、制备和保存植物样品采集、制备和保存 (一)植物组织样品的采集、制备和保存 (二)瓜果样品的采集、制备和保存 (三)籽粒样品的采集、制备和保存 实验二实验二 植物样品的水分测定植物样品的水分测定 (一)风干植物等含水较少试样的水分测定（常压直接烘干法） (二)幼嫩和新鲜植株等含水较多试样的水分测定（常压二步烘干法）实验三实验三 直接灰化法测定植物样品的粗灰分直接灰化法测定植物样品的粗灰分实验四实验四 植物样品消化植物样品消化
2、 (一)H2S04H202法 (二)混合加速剂消煮法实验五实验五 植物样品中氮的测定植物样品中氮的测定 (一)奈氏比色法 (二)半微量蒸馏法 实验六实验六 植物样品中全磷测定植物样品中全磷测定( (钒钼黄比色法钒钼黄比色法) ) 实验七实验七 植物样品中全钾测定植物样品中全钾测定( (火焰光度法火焰光度法) ) 实验八实验八 植物钙镁的测定植物钙镁的测定(EDTA(EDTA 络合滴定法络合滴定法) ) 实验九实验九 土壤和植物中硼的测定土壤和植物中硼的测定 (一)姜黄素比色法 (二)甲亚胺H 比色法 (三)植物样品干灰化及硼测定 实验十实验十 土壤和植物锰的测定土壤和植物锰的测定(KMn0(K
3、Mn04 4比色法比色法) ) (一)土壤有效锰测定 (二)植物中锰的测定 实验十一实验十一 土壤和植物中铜、锌的测定土壤和植物中铜、锌的测定( (原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法) ) (一)土壤中有效铜、锌测定 (二)植物中铜、锌测定 实验十二实验十二 硫氰酸盐比色法测定土壤和植物中的钼硫氰酸盐比色法测定土壤和植物中的钼实验十三实验十三 土壤和植物中铁的测定土壤和植物中铁的测定( (邻菲罗啉比色法邻菲罗啉比色法) ) (一)土壤有效铁测定 (二)植物中铁的测定实验十四实验十四 纯蛋白质的测定纯蛋白质的测定 (一)沉淀分离后消化测定 (二)染料结合法实验十五实验十五 氨基酸总量的测定氨基
4、酸总量的测定( (茚三酮比色法茚三酮比色法) ) 实验十六实验十六 水溶性糖的测定水溶性糖的测定( (蒽酮法蒽酮法) ) 实验十七实验十七 淀粉的测定淀粉的测定(HCl(HCl 水解一菲啉碘量法水解一菲啉碘量法) ) 实验十八实验十八 粗脂肪的测定粗脂肪的测定( (残余法残余法) ) 实验十九实验十九 果蔬总酸度的测定果蔬总酸度的测定 实验二十实验二十 维生素维生素 C C 的测定的测定 (一)2，6二氯靛酚滴定法 (二)荧光测定法 实验二十一实验二十一 氮肥的测定氮肥的测定 (一)甲醛法(铵态氮肥中氮的测定) (二)蒸馏法(尿素含氮量测定) 实验二十二实验二十二 磷肥的测定磷肥的测定 (一)
5、喹啉钼酸重量法(过磷酸钙有效磷测定) (二)喹啉钼酸容量法 (三)过磷酸钙中游离酸测定 (四)钒钼黄法(磷矿粉中有效磷测定) 实验二十三实验二十三 钾肥测定钾肥测定 (一)火焰光度法 (二)四苯硼钠重量法 实验一实验一 植物样品采集、制备和保存植物样品采集、制备和保存( (一一) )植物组织样品的采集、制备和保存植物组织样品的采集、制备和保存植物组织样品的采集首先是选定有代表性的株样。如同土壤样品的采集方法，在田间 按照一定的路线多点采取组成平均样品。株样数目应视植物的种类、株间变异程度、种植 密度、株样大小或生育期以及所要求的准确度而定，一般为 10-50 株。从大田或实验区采 样要注意群体
6、的密度、长势、生育期的一致。如果为了某一特定的目的，例如缺素诊断采 样时，则应注意株样的典型性，并且要同时在附近地块选取有对比意义的正常典型株样， 使分析结果能通过比较说明问题。用于营养诊断测定样品还要特别注意植株的采集部位的 组织器官及采样的时间。 采样的植株如需要分不同的器官测定，需要立即将其剪开，以免养分运转。剪碎的样 品太多时，可在混匀后用四分法缩分至所需要量。用于营养诊断分析的样品还应尽可能立 即称量鲜重。 采集的植株样品是否需要洗涤应视样品的清洁程度和分析要求而定。一般微量元素的 分析和肉眼明显看得见或明知受到施肥污染的样品需要洗涤。植物样品应在刚采集的新鲜 状态冲洗，否则一些易溶
7、性养分很容易从已经死亡的组织中洗出。一般可以用湿棉布（必 要时可沾一些很稀的如 1mg/L 的有机洗涤剂）擦净表面的污染物，然后用蒸馏水或去离子 水淋洗 1-2 次即可。 一般测定不容易起变化的组分用干燥样品较方便。新鲜样品应该立即干燥，减少体内 呼吸作用和霉菌活动引起的生化变化。植株样品的干燥通常分两部分：先将鲜样在 80- 90烘箱中鼓风烘 15-30min（松软组织 15min，致密组织烘 30min） ，然后降温到 60-70， 逐尽水分。 干样品可用研钵或带柄刀片或齿状（用于种子样品）的磨碎机粉碎，并过筛。分析样 品的细度应视称量的多少而定，通常可用圆孔直径为 0.5-1mm 筛，称
8、量少于 1g 的样品最好 过 0.25mm 甚至 0.1mm 筛。过筛后应充分混匀，保存于磨口的广口瓶中，内外各贴一样的标 签。样品瓶应置于洁净、干燥处。若样品可能需要保存很常时间，应进行灭菌（如 射线） ，然后置于聚乙烯或袋中封口保存。 样品在粉碎和储藏过程中，又会吸收空气中的水分。所以，在精密分析称样前，还必 须将粉碎的样品在 65（12-24h）或 90（2h）再次烘干，一般常规分析则不必。称样时 应充分混匀后多点采样，这在称样量少而样品相对较粗时更应特别注意。 用于微量元素分析的样本采集与制备应特别注意要防止可能引起的污染。例如在干燥 箱中烘干时，应该防止金属粉末的污染。用于样品采集和
9、粉碎样品的研钵设备应该采用不 锈钢器具和塑料网筛。如要准确分析铁，最好在玛瑙研钵上研磨。( (二二) )瓜果样品的采集、制备和保存瓜果样品的采集、制备和保存瓜果是泛指果实、果浆和块茎、块根等。瓜果的成熟期很长，一般主要在成熟期采样， 必要时在此期采 2-3 次。每次应在实验区或地块中随机采取 10 株以上位相同、成熟度一致 的瓜果组成平均样品。平均样品的果实数，较小的如青椒不少于 40 个，番茄、洋葱等不少 于 20 个；黄瓜、茄子不少于 15 个；较大的如西瓜、大白菜等不少于 10 个。数量多时，则 可以切取果实的 1/4 组成平均样品，总重以 1Kg 左右为宜。 果树的果实采样特别要注意选
10、择品种特征典型的样株才能比较各品种的品质。样株要 注意挑选树龄、株型、生长势、载果量一致的正常株，老、幼和旺盛生长的果实都缺乏代表性。在同一果园同一样品的果树中选 3-10 株作为代表株，从每株的全部收获物中选取大 小的向阳和背阴的果实共 10-15 个组成平均样品。一般总重不少于 1.5Kg。采回的瓜果样品应该冲洗、擦干。瓜果蔬菜的分析一般都要新鲜的样品。随分析的目 的要求不同，有的要全部样品，有的只要可食部分。大的样品或数量多时，可均匀地切其 中一部分，但所取部分中各种组织的比例应与全部的相当。样品经切碎后用高速组织粉碎 机或研钵打碎成浆状。从混匀的浆液中取样。多汁的瓜果也可在切碎后用纱布
11、或直接用手 挤出大部分汁液，将残渣粉碎后在与汁液一起混匀、称样。新鲜瓜果的短时间内保存可以采用冷藏或酒精浸泡处理，将已经称量的新鲜样品加入 足够量的沸热中性 950ml/L 乙醇，使其最后浓度达 800ml/L，再在水浴回馏 0.5h。如欲制 成干样则立即干燥，尽量使样品成分不发生变化。可以采用类似幼嫩或新鲜植株等含水较 多试样的水分测定，即先短时间 110-120高温，然后降到 60-70的二步烘干法的类似步 骤快速干燥样品，但总的烘干时间不宜长，一般为 5-10h。最好用真空烘箱。( (三三) )籽粒样品的采集、制备和保存籽粒样品的采集、制备和保存籽粒样品一般也多用于品质分析。从个别植株上
12、如谷类或豆类作物上采取种子样品时， 应考虑栽培条件的一致性。种子脱粒后，去杂、混匀，按四分法缩分为平均样品，重量不 少于 25g。若从实验小区或大田采集可按植株组织样品的采集方法，选定株样后脱粒、混 匀，四分法后取得约 250 g 样品。大粒种子如花生、大豆、蓖麻等可取 500g 左右。采样时 应选择完全成熟的种子，因为不成熟的其化学成分有明显的差异。若从成批收获物中取样， 则应在保证样品有代表性的原则下，在散装堆中设点随机取样，或从包装袋中随机取原样 品，再用四分法或分样器缩分至 500g 左右。 将采取的籽粒样品风干，去杂的挑去不完整粒，用磨样机或研钵磨碎，使其全部通过 0.5-1mm 筛
13、，处于瓶或袋中，内外贴上和放置标签备用。油料作物中的大粒种子，如花生、 向日葵、等，应去掉厚的果壳或种皮，只分析种仁。但棉籽种皮不容易剥掉，可用水浸泡 4-6h，在用刀将种子切成两半，取出种仁。 为了防止油料作物种子在磨碎过程中损失油分，可以从采取的样品中用四分法缩分出 少量样品，在 70-80干燥箱内干燥 15-18h，取出，在瓷研钵中用研棒击碎，不能研磨。 大豆和其他含油相对较少的种子则可以直接用植物搅拌机。实验二实验二 植物样品的水分测定植物样品的水分测定( (一一) )风干植物等含水较少试样的水分测定（常压直接烘干法）风干植物等含水较少试样的水分测定（常压直接烘干法）一、方法原理一、方
14、法原理 样品在 100-105情况下烘干一定时间至“恒重” ，即失去的重量，被认为是水分重量， 所以这是一种间接的测定水分方法。样品在高温烘烤时可能有部分易焦化、分解或挥发成 分损失而产生水分测定的正误差，也可能因为水分未完全逐尽（特别是胶体和半胶体的试 样，其结合水难以完全排除）或在样品冷却、称量时吸湿，或有部分油脂等被氧化增重而 造成的负误差。但在严格控制操作条件下，对大多数试样而言，烘干法仍然是测定水分的 简易标准法。二、实验仪器二、实验仪器（1）电热烘干箱 （2）称量铝盒 （3）干燥器。宜使用经 135干燥 2-3h 的变色硅胶作干燥剂，对油脂类样品宜用吸湿力 强的五氧化二磷等作干燥剂
15、。 （4）分析天平三、操作步骤三、操作步骤 1. 取洁净的铝盒，打开盒盖，放入 100-105烘箱中烘 30min，取出，移至干燥器中 平衡后称重，继续烘干至“恒重” 。 2. 将粉碎、混匀的风干样品 3-5.000g 平铺在铝盒中盖好盖，尽快地称量铝盒和内容 物质量。 3. 将盖横放在盒旁，置于已经预热至 115的烘箱中，调整温度至 100-105，烘干 3-4h，取出盖好，移入干燥器冷却后称量，如此反复，直至“恒重” 。四、结果计算四、结果计算水分（%）风干基=（m1-m2）x 100/（m1-m0） 干物重（%）风干基=（m2-m0）x 100/（m1-m0） 式中： m0空铝盒的质量（
16、g）m1（空铝盒+样品）的质量m2（空铝盒+烘干样品）的质量五、注意事项五、注意事项 1. 本法适用于风干植物、谷物种子类及其加工品、干茶叶、咖啡、坚果、肉、海带等绝大 部分含水较少的试样。 2. 应注意样品的采集、储藏和粉碎时水分的变化。一般情况下，粮食样品颗粒过分干燥不 好，粉碎时可造成样品的水分变化。 3. 粮油种子类样品经粉碎后也可以采用 130烘干 20-60min 的快速烘干法，其结果与常 规法相近。 4. 烘干法测水分时尤以大气湿度影响最大，因此实验室内相对湿度不应高于 70。称重 烘干样品的速度要快。 5. 在植物样品或农产品分析中，为易于理解和接受，水分的计算习惯都以分析样品（风干 后新鲜样品）为基础。如某一含水%（鲜湿基）为 85%的新鲜植物样品，如以干样计算，它 的含水将为 556%，前者易于理解，
