常用药品试剂和培养基的配制

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1、常用药品试剂和培养基的配制常用药品试剂和培养基的配制(一) 反应剂 1、检查葡萄糖试剂 配方一 本尼迪克(Benedict)溶液 (1) 在 400 毫升蒸馏水中溶解 85 克柠檬酸钠和 50 克无水碳酸钠。 (2) 在 50 毫升加热的蒸馏水中溶解 8.5 克硫酸铜。 把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅拌,如果产生沉淀,要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用(存放时间较久而产生沉淀是,取上层清液使用,不必重新配制) 。 本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖,可测出 0.15 0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时,如果未知物中有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物

2、。 配方二 裴林(Fehling)溶液 (1)把 34.5 克硫酸铜溶于 500 毫升蒸馏水中。 (2)把 125 克氢氧化钾(钠)和 173 克酒石酸钾钠溶解在 500 毫升蒸馏水中。 上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时,使他们等量的混合,加入待测物的试管内,加热到沸腾。如果有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 2、检查淀粉的试剂 鲁哥氏(Lugols)溶液(碘液) 取 6 克碘化钾溶于 20 毫升蒸馏水中,搅拌到溶解后,加入 4 克碘,等碘充分溶解,在加入 80 毫升蒸馏水,贮存在棕色试剂瓶内。 碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉,也用作染色剂,例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。 3、

3、检查蛋白质的试剂 配方一 米伦(Millon)试剂 在 60 毫升浓硝酸(比重 1.42)中溶解 40 克汞(水浴加温可助溶) ,溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释,静置澄清后,取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。 在待测物中加入少量米伦试剂,加热,如果有蛋白质,会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。 配方二 双缩尿试剂 分别配制 10%氢氧化钠溶液和 1%硫酸铜溶液。 在 3 毫升待测物中加入 1 毫升 10%氢氧化钠溶液和 1 滴 1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质,会出现紫色反应。 4、检查脂肪的试剂 苏丹()酒精饱和溶液 取 0.2 克苏丹(或苏丹) ,放入纯酒精中,加热,使它充分溶

4、解,成为饱和酒精溶液,过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。 5、酸碱指示剂 配方一 酚酞试剂和试纸 酚酞试剂 取 1 克酚酞,溶解在 100 毫升 60%的酒精溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。 酚态试纸 取 1 克酚酞,溶解在 100 毫升 95%酒精溶液里,加入 00 毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后,取出,放在无氨气影响处晾干。 酚泰试剂(试纸) pH 值变色范围 8.210,在酸性和中性溶液中都无色,再碱性溶液中呈深红色。 配方二 红蓝石蕊试纸 取市售石蕊 1 克,放在 80 毫升 10%酒精溶液中搅拌,使它溶解,然后过滤。把滤液分成两份。1 份滴入稀磷酸或稀硫酸,到出现红色为止。另 1

5、 份滴入稀氢氧化钠溶液,到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条,随后取出滤纸条,放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干,即的红、蓝两种石蕊试纸。 红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝,蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。 6、检查二氧化碳的试剂 检查二氧化碳的试剂,可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。 配方一 溴代麝香草酚蓝溶液 取 0.1 克溴代麝香草酚蓝,溶解在 100 毫升蒸馏水里,滴入少量 0.1%氢氧化钾溶液,使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。 溴代麝香草酚蓝溶液 pH 值变色范围是 6.0(黄)7.6(蓝) 。待测物中如果有二氧化碳,会形成碳酸而使溶液变成黄色。 配方二 石灰水 在蒸馏水中加入生石灰

6、(氧化钙) ,变加边搅拌,直到加入的生石灰不再溶解,呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后,倾出上层清液,用滤纸过滤,放在密闭瓶内保存。 如果测定的物质中有二氧化碳,会生成碳酸钙,使石灰水变浑浊。 7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力,可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制 1%中性红溶液和 1%甲基蓝溶液,这两种溶液各取 1 份混合,用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色,而使死细胞全部染成蓝色。 (二)分离液 1、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎(Maccallum)液 取 1 份浓硝酸、2 份甘油、3 份水,混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块(横纹肌、心肌和平

7、滑肌)投入这种溶液里浸渍,分离时间需 13 日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。配方二 氢氧化钾溶液 取 35 克氢氧化钾,放在 100 毫升蒸馏水中,加热,使它完全溶解后,在室温下冷却。 把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中,浸泡 1530 分钟后,肌细胞便可分离。 2、上皮细胞分离液 配方一 福尔马林氯化钾溶液 称取 58.44 克氯化钠,用蒸馏水溶解,再稀释到 1000 毫升,加入 2 毫升福尔马林。 这种溶液是很好的上皮细胞分离液,分离很迅速,而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块,放在此溶液里 2 小时即可分离,口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需 3 日左右

8、。 配方二 水和氯醛溶液 称取 5 克水和氯醛,用蒸馏水溶解,再稀释到 100 毫升,就得到 5%水合氯醛溶液。 从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块,投入以上溶液中,浸泡 2448 小时。 3、神经细胞分离液 配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林氯化钠溶液来分离神经细胞(见 2) 。 配方二 硼酸生理盐水溶液 在生理盐水溶液内加入一些硼酸,搅拌到不再溶解时为止,使成为饱和溶液。 把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。 4、植物茎细胞分离液 杰弗里氏(Jeffreys)液 取等量的 10%铬酸溶液和 10%硝酸溶液混合,成铬酸硝酸溶液。 这种溶液用来分离木

9、本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里,加热煮沸,冷却后再加热煮沸。这样重复几次,到材料全部沉于水底后,投入分离液内,分离时间是 2448 小时。 5、植物根尖细胞分离液 配方一 盐酸酒精溶液 在 1 份 95%酒精中慢慢的加入 1 份浓盐酸,即成盐酸酒精溶液,装瓶密闭保存。 把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分离。 配方二 4%盐酸溶液 配制 4%盐酸溶液。 截下植物根尖部位,投入盛有 4%盐酸溶液的小烧杯内,在 60 摄氏度温水中隔水温热 12 分钟,使根尖软而不酥,这时分离效果最好。 6、植物纤维分离液 取 10 克氢氧化钠(或氢氧化钾) ,溶解在

10、90 毫升水里,制成 10%氢氧化钠(或氢氧化钾)溶液,放在瓶里密闭保存。 把植物茎纵切成细条,剪成小段后,投入分离液内。 7、植物细胞质壁分离液 配方一 30%蔗糖溶液 取 30 克蔗糖,溶解在 70 毫升蒸馏水里,装瓶备用。 配方二 5%氯化钠溶液 取 5 克食盐,溶解在 95 毫升蒸馏水里,装瓶备用。 配方三 5%硝酸钾溶液 取 5 克硝酸钾,溶解在 95 毫升蒸馏水里,装瓶备用。 (三)生理盐水 配方一 各种动物需用的生理盐水 哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9%。称取 0.9 克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到 100 毫升。 鸟类 需用的生理盐水浓度是 0.75%。称取 0.75

11、 克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。 两栖类 需用的生理盐水浓度是 0.65%。称取 0.65 克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。 配方二 任氏(Ringers)生理盐水 氯化钠 6.5 克 碳酸氢钠 0.2 克 氯化钾 0.14 克 磷酸二氢钠 0.01 克 氯化钙 0.12 克 先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中,混合后用蒸馏水稀释到 980 毫升。然后取氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水中,把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内,边滴、边搅拌,以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。 此溶液用于变温动物,尤其常用于两栖类。 配方三 乐氏(Lockes)生理盐

12、水 氯化钠 9.0 克 碳酸氢钠 0.10.3 克 氯化钾 0.42 克 氯化钙 0.24 克 把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解,混合后加蒸馏水到 980 毫升。把氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水里,逐滴加入上述溶液中。 以上溶液用于恒温动物,尤其常用于哺乳类。 (四)培养液 1、人造海水 配方一 氯化钠( ) 24.72 克 氯化钾( ) 0.67 克 氯化钙( ) 1.36 克 氯化镁( ) 4.66 克 硫酸镁( ) 6.29 克 碳酸氢钠( ) 0.18 克 蒸馏水 加到 1 升 把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中,再加入碳酸氢钠,最后用蒸馏水稀释到 1000 毫升。 配方二

13、氯化钠 45.0 克 硫酸镁 0.1 克 氯化镁 5.0 克 氯化铁(1%溶液) 1 滴 先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙溶解在 20 毫升蒸馏水里,把此溶液逐滴加到上述溶液内,装瓶保存。 配方二 克诺普氏(Knops)溶液 硝酸钾 1 克 硫酸镁 1 克 磷酸二氢钾 1 克 硝酸钙 3 克 先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙,用 20 毫升蒸馏水溶解,加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀,在使用是必须摇动。 在以上溶液中加入蔗糖溶液(14%) ,能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿

14、藻。 3、植物无土培养液 配方 霍格伦德(Hoagland)和斯纳德(Snyder)液 硝酸钙 0.821 克 硝酸钾 0.506 克 磷酸二氢钾 0.136 克 硫酸镁 0.120 克 酒石酸铁 0.005 克 把上述盐类溶解在少量蒸馏水里,然后稀释到 1000 毫升。 (五)培养基 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏 0.3 克 蛋白胨 1.0 克 氯化钠 0.5 克 琼脂 1.5 克 水 1000 毫升 在烧杯内加水 100 毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用 10%盐酸或 10%的氢氧化钠调整 pH 值到 7.27.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌 30 分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250 克,用刀细细剁成肉末后,加入 500 毫升蒸馏水和 5 克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖 2 小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液 pH 值调到 7.5 左右。每支试管内加入 10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。 配方四 根瘤菌培养基 葡萄糖 10 克 磷酸氢二钾

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