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1、1常用试剂的配制1 1无无CaCa2+2+、MgMg2+2+HanksHanks液液 NaCl 4.5gKCl 0.2gNaHCO3 0.175g Na2HPO412H2O 0.076gKH2PO4 0.03g葡萄糖 0.5g0.4%酚红 2.5ml将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4冰箱保存备用。2 2甲基红试剂（1）成份甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml95乙醇 300ml（2）用途：测定甲基红反应。3 3HanksHanks液（原液）液（原液）原液甲： NaCl 160gKCl 8gMgSO47H2O 2
2、gMgCl26H2O 2g上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。原液乙： Na2NPO412H2O 3.04gKH2PO4 1.2g葡萄糖 20g加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。使用时甲,乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4冰箱保存，使用前用NaHCO3调整PH值。4 40.4%0.4%酚酚红溶液称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐
3、渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗2粒几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5 5pH7.2pH7.2 Tris-NHTris-NH4 4CICI溶液(红细胞崩解液）Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03gNH4Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4保存。 6 60.05moI/L0.05moI/L pH8.6pH8.6 巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g叠氮纳 0.2g加蒸馏水溶解 ,
4、 并补加到 1000ml 。7磷酸盐缓冲液 (PB)(PB)A 液： 为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g（或 Na2HPO412H2O71.6g, 或Na2HPO4 2H2O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。8 80.1mol/LPH8.40.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（硼酸缓冲液（BBSBBS）硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）
5、 0.46g 硼酸（H2BO3） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。 9 9PH7.4PH7.4 0.01mol/L0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一：0.2mol/L Na2HPO4（ Na2HPO412H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml）0.2mol/L NaH2PO4（NaH2PO42H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml）取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tw
6、een-20即为ELISA试验的洗涤液。配制方法二：甲液（0.1mol/LKH2PO4溶液）：KH2PO413.608g，加蒸馏水至1000ml。乙液（0.1mol/L Na2HPO4溶液）：Na2HPO435.814g，加蒸馏水至1000ml。取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。3再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。10100.05mol/L0.05mol/L pH9.6pH9.6碳酸缓冲液Na2CO3 1.59gNaHCO3 2.93g加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。11110.
7、01mol/L0.01mol/L pH7.4pH7.4 PBSPBS内含内含2%BSA2%BSA（牛血清白蛋白）（牛血清白蛋白）取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。1212PH5.0PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。1313底物溶液pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1l/ml)溶解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。
8、14142mol/L2mol/L硫酸浓H2SO4（36N）取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实验终止反应。1515清洁液的配制清洁液分高、中、低液三种。低浓度清洁液重铬酸钾 100g水 750ml硫酸 250ml中浓度清洁液重铬酸钾 60g水 300ml硫酸 460ml高浓度清洁液 重铬酸钾 100g水 200ml硫酸 800ml先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，4如果
9、清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。 1616PH6.4PH6.4 l/l5mol/mll/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）：（1）l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液 KH2PO4 9.04g蒸馏水 加至1000ml（2）l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液 Na2HPO42H2 O 11.87g（或 Na2HPO4l2H2 O 23.86g蒸馏水 加至1000ml（3）PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水（PBS） l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73mll/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27mlNaCl 0.5g 混匀溶解即可。1717柯氏试剂(靛基质试剂)（1）成份纯戊醇 150ml 浓盐酸 50ml 对二甲基氨基苯甲醛 10g（2）制法：将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内，使其溶解。将浓盐酸一滴滴慢慢加入，边加边摇，不能加得太快，以致温度升高溶液颜色变深。（3）用途：测定细菌能否产生吲哚。
