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1、南京中医药大学博士学位论文丹仙片治疗乳腺增生病的实验研究姓名：孙二虎申请学位级别：博士专业：中医外科学指导教师：许芝银20090601南京中医药大学博士学位论文摘要目的丹仙片是根据导师许芝银教授多年来治“癖经验，遵循中医方剂组方原理，精选治疗“乳癖“ 药物，组方而成的治“癖“ 良方“丹仙汤“ 而来。该方疗效确切，应用多年，患者反应良好。本方由仙灵脾，丹皮，昆布三味药经先进的提取制备工艺加工而成。应用现代医学理论和实验方法，在制造乳腺增生病( H M G ) 大鼠模型的基础上，观察丹仙片对H M G 大鼠在镇痛、性激素、体重、乳头直径、脏器系数、血流变、乳腺组织病理形态改变，以及对乳腺组织E R
2、 、P R 、V E G F 、B c l 2 、b a x 表达和细胞凋亡的影响和作用机制。并与乳癖消、他莫昔芬对比。目的是验证丹仙片治疗乳腺增生病的治疗效果并初步探讨该药治疗乳腺增生病的作用机理。方法称取淫羊藿、牡丹皮、昆布各4 k g 。根据临床用药特点，牡丹皮经水蒸汽多次蒸馏，冷藏，抽滤，水提后得丹皮酚结晶。淫羊藿、昆布合并牡丹皮水蒸气蒸馏后的药渣水煎煮，合并3 次水煎液，浓缩成稠膏，最后与丹皮酚结晶混合均匀制片。实验选用昆明种雌性小鼠进行镇痛实验。扭体法：取小鼠4 0 只，随机分为空白对照组、他莫昔芬组、和丹仙片大、小剂量组，盐酸曲马多组，灌胃给药：盐酸曲马多、他莫昔芬组小鼠换算为人
3、的等效剂量，分别为1m g k g ，0 1m g k g ；丹仙片小剂量为5 9 k g ；丹仙片大剂量为2 0 9 k g 。灌胃给药，每次0 2m I ，每日1 次，连续3 天，( 空白对照组给于等量生理盐水) ，末次给药后4 0 分后，分组给每只小鼠腹腔注入1 1 冰醋酸0 3 m l ，观察记录各组小鼠出现扭体的潜伏时间，及2 0 分钟内小鼠扭体次数。热板法：取小鼠2 4 只，随机分为空白对照组、丹仙片大、小剂量组，空白对照组用0 2 m l 生理盐水灌胃；丹仙片小剂量为5 9 k g ；丹仙片大剂量为2 0 9 k g ，0 2 m l 灌胃，测定各组3 0 m i n ，6 0
4、r a i n ，9 0 m i n ，1 2 0 r a i n痛阈的变化及舔足次数。实验采用苯甲酸雌二醇和黄体酮复制乳腺增生大鼠模型，给予大鼠后腿内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇0 5 m g k g d ，连续2 5 天，继而肌注黄体酮4 m g k g d ，连续5 天，制造乳腺增生病大鼠模型。同时随机分为空白对照组、单纯疾病模型组、他莫昔芬组、乳癖消组、和丹仙片大、小剂量组，分别给药干预。给药体积l m l 1 0 0 9 ：乳癖消组依照0 5 9 k g体重；他莫昔芬组：0 1m g k g 体重：丹仙片小剂量组依照5 9 k g 体重；丹仙片大剂量依照2 0 9 k g 体重；正常对照组
5、、模型组：给予等容量蒸馏水，每日给药1 次。第5 周禁食1 2 小时后，毛细管眼眶取血后，脱颈椎处死大鼠，取脏器。应用E L I S A 法检测血清E 2 、P 、P R L ；血液流变仪检测血液流变学变化；乳腺组织做常规H E 染色；免疫组化检测乳腺组织E R 、P R 、V E G F 、B c l 2 、b a x 表达和细胞凋亡的影响。结果t1 牡丹皮经水蒸汽多次蒸馏，冷藏，抽滤，习 0 0 5 ) ，治疗后乳头直径与空白对照组比较无统计学差异( P 0 0 5 ) ；丹仙片对改善H M G 大鼠的易激惹、急躁，好斗等症状具有相当明显的作用。血流变检查中，丹仙片大、小剂量组均可降低H
6、M G 大鼠血粘度( P O 0 5 ) ，表明丹仙片可能是通过降低H M G 大鼠血粘度，改善乳腺组织的微循环的。4 E L I S A 法检测血清E 2 、P 、P R L ，实验表明：丹仙片大、小剂量均能降低大鼠血清E 2 、P R L 含量( P 0 0 5 ) 。5 通过光镜对照观察，丹仙片治疗组较模型组、药物对照组乳腺组织增生性变化有明显改善，H M G 大鼠乳腺组织腺泡数目减少，体积萎缩，腺泡腔减小：腺管扩张程度减轻，管腔内分泌物减少甚或消失，小剂量作用略好于乳癖消，大剂量接近他莫昔芬。效果提示丹仙片对乳腺组织的病理性损害有明显的抑制和缓解作用。6 模型组大鼠B c l 2 出现
7、阳性颗粒的细胞数高于正常组，丹仙片治疗组B c l 2 阳性率较模型组显著性下降，大剂量组明显，治疗后B c l 2 蛋白表达降低；B a x 表达较模型组升高，大剂量组显著。各组间无显著性差异( P O 0 5 ) 。7 模型组大鼠乳腺V E G F 蛋白表达与正常组比较有极显著性差异( P 0 0 5 ) ；E f f e c to fb o t hh i g ha n dl o wd o s a g eW a sb e t t e rt h a nR u p i x i a o ( P ) 。淫羊藿药用历史悠久，来源于小檗科淫羊藿属的多种植物。李时珍在本草纲目中称其“有益精气、坚筋骨、补
8、腰膝、强心力“ 之功效。医学入门日：补肾虚，助阳。 ：本草正义：淫羊藿，禀性辛温，益气力、强志、坚筋骨。现代药理学研究表明其叶、茎含淫羊藿甙、宝藿甙、苜蓿素、淫羊藿素、木樨草素( 1 u t e o l i n ) 、四糖藿甙等1 3 1 侧。其功效有增强性腺功能，相关实验证实，淫羊藿提取物具有雄性激素样作用 3 7 - 3 8 。它能提高孕激素水平，纠正雌、孕激素平衡失调，降低和消除雌激素对乳腺组织的刺激，调节下丘脑一垂体一卵巢轴功能，促进黄体的生成；抗炎作用淫羊藿提取物能抑制大鼠蛋清性关节炎的肿胀程度；增强免疫及对免疫应答的调节作用，淫羊藿能增加小鼠N K细胞毒活性，淋巴细胞转化活性及I
9、L 2 2 分泌活性和C D 4 C D 8 T 淋巴细胞比值等【3 9 枷l ；对小鼠的明显的镇定作用；增强细胞凋亡【4 。淫羊藿在此方中益精气，补肾虚，调冲任。其性辛温，辛能散结，甘能缓中，温能通气行血，又兼理气、化痰、散结功效，为君药。方中丹皮又称牡丹皮为毛茛科多年生小灌木植物牡丹( P a e o n i a S u f f r u 2 t i c o s a A n d r ) 根皮，辛苦、凉、微寒。丹皮归心、肝、肾、肺经。有清热凉血、和血消瘀、祛瘀止痛、：活血调经，养心除烦的功效，重庆堂随笔：丹皮虽非热药，而气香味辛，为血中气药，专于行血破瘀，故能堕胎，消癖。所谓能止血者，瘀去则新
10、血自安，非丹皮真能止血也。通经止痛，本经疏证：牡丹皮入心，通血脉中壅滞与桂枝颇同，特桂枝气温，故所通者血脉中寒滞，牡丹皮气寒，故所通者血脉中热结。本草经疏：牡丹皮，其味苦而微辛，其气寒而无毒，辛以散结聚，苦寒除血热，入血分，凉血热之要药也。其主要成分为丹皮酚。丹皮酚是一个小分子的酚类化合物，呈白色针状结晶，丹皮酚具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用，并具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化，改善微循环，保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合成等作用f 4 2 4 5 】。近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用，同时能提高机体免疫力且无明显副作用【4 7 1 。方中丹皮行气活血，通络去痛、和血祛瘀，散结，加强君
11、药通络活血行气之功为臣药。昆布咸，苦，寒，入肝、胃、肾、脾经。功效：消痰软坚；利水退肿。昆布一词出自吴普本草，科属海带科、翅藻科。本草经疏：昆布，咸能软坚，具性润下，寒能除热散结，故主十二种水肿、瘿瘤聚结气、瘘疮。东垣云：瘿坚如石者，非此不除，正咸能软坚之功也。详其气味性能治疗，与海藻大略相同。玉楸药解：泄水去湿，破积软坚、9第一章乳腺增生病的相关理论研究基础清热利水。嘉佑本草记载海带能去瘿行水，下气化痰。本草汇：昆布之性，雄于海藻，噎症恒用之，盖取其祛老痰也。现代药理研究认为，昆布调血脂、降血糖、降血压、抗凝血、免疫、调节作用、抗肿瘤、抗突变、防辐射、抗疲劳、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗纤维化功
12、效等1 4 s 5 2 1 。同时昆布乃含碘丰富的药物，小剂量碘剂可刺激垂体前叶，产生黄体生成激素，促使卵巢滤泡囊肿黄体素化，从而降低雌激素水平。昆布，咸，苦，寒，有泻下、泻热之效，有“反佐“ 之意，以免温燥太过，并可其他俩味药归于肾；且可泻泄肝火，直达病所，同做使药。观此方，配伍严谨，简洁，君臣相辅相成，共奏培肾元，益精气，补肾虚，调冲任，化淤血，通经络，解痰凝，消肿止痛，活血化瘀之功，标本兼治，起到良好治疗效果。参考文献 1 陈实功，外科正宗，第1 版，上海上海科学技术出版社，1 9 8 9 ，7 3 2 余宏迢等，乳腺肿瘤诊治图谱，河南科技出版社，1 9 9 6 。1 6 7 - 1 6
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14、7 ，2 6 - 6 7 9 张琼，赵学全，陈家旭从心理应激角度探讨乳腺增生病，辽宁中医杂志，2 0 0 5 ，3 2 8 ( 1 0 ) ：1 0 1 3 - 1 0 1 4r i o 关曾文，等乳腺癌，上海科学出版社，1 9 8 3 ：3 8 4 - 3 9 4 11 徐开，等乳腺疾病影像诊断与治疗学上海：科技教育出版社，2 0 0 2 ，2 5 2 1 2 张继增，刘华福等，乳腺增生病组织学类型及与乳腺癌的关系的研究，中华病理学杂志，1 9 9 5 ：2 4 ( 1 ) 4 3 1 3 王德修，乳腺结构不良症1 2 0 例临床及其与病理组织学的初步初步研究及其分类，中华病理学杂志，1 9
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16、0 0 ，2 7 ( 1 0 ) ：4 4 缸4 4 5【1 9 】宋爱莉从肝郁脾虚论治乳腺增生病山东中医杂志，2 0 0 1 ，2 0 ( 7 ) ：3 9 3 【2 0 】钱丽旗，李杰，刘奇伦，等乳腺增生病病因学说研究( 附3 6 3 例临床统计分析) ，中国肿瘤临床与康复，1 9 9 9 ，6 ( 6 ) ：2 3 2 4 【2 1 陈德轩，潘立群运用补肾调周法治疗乳腺增生病的经验【J 】，江苏中医药，2 0 0 2 ，2 3 ( 5 ) - 1 6【2 2 】刘秀贤，针刺治疗乳腺增生病1 0 0 例，天津中医，1 9 9 9 ，1 6 ( 6 ) ：2 81 0南京中医药大学博士学位论文 2 3 1 左尚宝，王萍，针药结合治疗乳腺增生病6 0 例临床观察，上海针灸杂
