《脐血CD133+造血干祖细胞生物学特性的研究和抗CD133单克隆抗体的研制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脐血CD133+造血干祖细胞生物学特性的研究和抗CD133单克隆抗体的研制（112页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、脐血c D l 3 3 + 造血干祖细胞生物学特性的研究和抗C D l 3 3 单克隆抗体的研制研究背景脐血C D l 3 3 + 造血干祖细胞生物学 特性及诱导分化和体外扩增的研究研究背景造血干祖细胞( H S P C ) 生物学特性的研究对临床造血干细胞移植和基础研究均至关重要。目前，针对造血细胞表面抗原的单克隆抗体己被广泛应用于鉴定和分选不同亚群的造血细胞。在过去的1 0 年间，C D 3 4 作为造血干祖细胞的表面标志物已被广泛采纳，但是近几年来已有资料证实C D 3 4 一- - H S P C 的存在，并且表明C D 3 4 一- - H S P C 可能比C D 3 4 + -
2、H S P C 更为原始“，1 9 9 7 年，M i r a g l i a 等报道了一个新的H S P C 表面抗原A C l 3 3 并制备成功了识别该抗原的单克隆I g G 抗体p J ，2 0 0 0 年6月由国际白细胞分化抗原工作组会议( I L D A W ) 命名为C D l 3 3H 3 。许多资料表明C D l 3 3 可能是一较C D 3 4 更为早期的造血干祖细胞表面标志。有关这方面的研究仍有许多问题尚待解决。1C D l 3 3 抗原的结构1 1 基因结构C D l 3 3 抗原的CD N A 由一个长的开放读码框架( O R F ) 和两个非编码区( U T R )
3、三部分组成。O R F 中有2 5 9 8 个核苷酸，编码一条8 6 5 个氨基酸，分子量为9 6 8K D的多肽链。5 U T R 长3 7 个核苷酸，起始密码子A T G 位于第3 8 核苷酸处，其侧翼有一K o z a k 共有序列，在3 和“位各有一鸟苷酸。其后有一共同的1 9 个氨基酸的信号肽。CD N A 第1 5 位核苷酸还有一上游A T G ，但其侧翼无K o z a k 共有序列；3 U T R有1 1 5 9 个核苷酸，终止密码子U G A 位于第2 7 6 3 核苷酸处，第3 9 0 6 核苷酸处连接有一长2 0 个碱基的p o l y A 序列f 5 】。1 2 蛋白结
4、构C D l 3 3 抗原是分子量为1 2 0K D 的糖蛋白，其N 端连接2 0K D 的聚糖，整个l脐血c D l 3 3 + 造血干祖细胞生物学特性的研究和抗C D l 3 3 单克隆抗体的研制研究背景分子由一条长8 6 5 个氨基酸的多肽链组成。C D l 3 3 抗原N 端为一短的含8 5 个氨基酸的胞外域，其次是2 个在空间上靠近的跨膜域和1 个富含半胱氨酸残基胞内环，1 个含2 5 5 个氨基酸的环状胞外域，另一对空间上靠近的跨膜结构( 1 M ) 域和1 个富含半胱氨酸残基胞内环，再次是一个2 9 0 氨基酸的环状胞外域，第5 个T M 域，最后是含5 0 个氨基酸的C 末端胞
5、浆内尾。研究发现，8 个N 型连接的糖基化位点均分于2 个环状胞外域中。在第1 个胞外域中有一亮氨酸拉链模式，另外，4 个T M 域中都含有半胱氨酸残基，最后1 个T M 域中含有一赖氨酸残基，胞内尾端含有5 个酪氨酸残基，提示C D l 3 3 可能是一生长因子受体，在与配体结合后酪氨酸残基磷酸化可引起级联反应。此5T M 顺序与已知的4 段或7 段T M 在顺序上并不相似，与含多段T M 的蛋白在分子质量以及胞外环大小方面存在显著不同，这表明C D l 3 3 抗原是T M受体家族的新成员口0 3 。C D l 3 3 抗原结构模式图2脐血C D l 3 3 + 造血干祖细胞生物学特性的研
6、究和抗C D l 3 3 单克隆抗体的研制研究背景2C D l 3 3 抗原的表达研究表明C D l 3 3 抗原主要表达于成人骨髓、胎儿骨髓( F B M ) 、胎肝、脐血及动员前后的外周血( P B ) 等造血组织的C D 3 4 + 细胞亚群上。流式细胞术或免疫染色技术在其它正常组织上也可检测到C D l 3 3 抗原的表达。许多细胞系均可检测出C D l 3 3的转录本，一些细胞株和某些白血病细胞也可检测到C D l 3 3 蛋白的表达。2 1 正常造血组织C D l 3 3 抗原主要表达于正常造血组织如A B M 、F B M 、F L 、U C B 及P BC D 3 4 +细胞亚
7、群上，随着细胞的分化成熟其表达减弱、消失。而在其它成熟血细胞如有核红细胞、淋巴细胞、粒细胞、单核细胞、血小板等均未检测到其表达【5 】。研究表明，C D 3 4 + 细胞占A B M 全部有核细胞的1 4 ，在U C B 中约占1 ，而C D l 3 3 + 细胞的比例总是较C D 3 4 + 细胞低。Y i n 等【3 】用多色F A C S 分析人不同来源的造血干细胞、祖细胞和定向祖细胞的表达情况。A B M 、U C B 和M P B 中，C D l 3 3 + 细胞占C D 3 4 +细胞平均比例分别为7 0 、3 5 1 和5 4 9 ；在F B M 和F L 中比例分别为3 1 6
8、 和2 9 9 。M a t s u m o t o 等【6 】研究显示C D l 3 3 + 细胞占外周血总单个核细胞的O 0 2 3 0 0 5 7 。在静息期外周血中C D l 3 3 + 细胞占C D 3 4 + 细胞的5 5 ，而在脐血中为8 3 ，B M 中为4 8 。B o n a n n o 等“ 3 对7 例新鲜脐血所作研究表明，8 5 ( 7 9 9 0 ) C D 3 4 +细胞共表达C D l 3 3 ；B f i h r i n g 等8 3 发现大部分的C D l 6 4 + 、C D l 3 5 + 、C D l l 7 + 、C D 3 8 k ”、C D 3
9、3 + 和C D 7 1 帅细胞位于C D l 3 3 + 细胞群内。上述统计结果有所差异，这可能与选择的标本例数及制备细胞标本方法不同所致。制备标本纯度越高，C D l 3 3 十细胞阳性率也就越高：分析标本数量越多，结果也就越精确嘲。2 2 其它组织采用F A C S 技术检测，也可在非造血组织上检测到C D l 3 3m R N A ，如胰腺、肾和胎盘均可见到C D l 3 3 抗原的转录本。肝脏、肺、脑和心等组织中也有弱的信号，3脐血c D l 3 3 + 造血干担细胞生物学特性的研究和抗C D l 3 3 单克隆抗体的研制墅塞堕墨但石蜡切片的免疫组化染色只在骨髓中检出C D l 3
10、3 蛋白的表达，造成这种差异的原因有待进一步研究n 0 1 。细胞系和正常组织的研究资料均表明C D l 3 3 抗原的表达可能是在转录最后水平进行调节卯。C D l 3 3 抗原还可能表达在视网膜上。P o t g e n s 研究表明J ，各种类型的滋养层细胞和滋养层来源的细胞系中均可检测到C D l 3 3 蛋白或m R N A 的表达，C D l 3 3n - 7 D l 作为所有滋养层细胞亚型和滋养层细胞系的阳性标记。2 3 白血病细胞2 3 1C D l 3 3 与急性白血病M i r a g l i a 等1 5 1 报道在1 2 例急性自血病中C D 3 4 + 表达1 I 例
11、，这1 1 例中3 例呈现C D l 3 3 + ，4 例低水平表达C D l 3 3 ，另外4 例( 占3 6 4 ) 不表达C D l 3 3 。而且C D l 3 3在M 4 、M s 呈高表达，在其它类型急性髓细胞白血病( A M L ) 或急性淋巴细胞自血病( A L L ) 中则低或不表达。H o r n 掣1 2 1 研究了3 0 例A M L C D l 3 3 表达情况，并初步比较与染色体异常、F A B分型、完全缓解率( C R ) 关系。3 0 例中，C D l 3 3 b r i g h t 9 例，C D l 3 3 d i m l 5 例，6 例为C D l 3 3
12、 ，所有的C D l 3 3 + 细胞均表达C D 3 4 ；1 0 例C D l 3 3 “”C D 3 4 ，3 例C D l 3 3 C D 3 4 - ，C D l 3 3 表达并不局限于M 4 或M 5 ，可见于多种亚型( M 1 、M 2 、M 4 、M 5 、M 6 ) ；C D l 3 3 ”龇有染色体异常的占7 l ，C D l 3 3 d i m 染色体异常占6 4 ，C D l 3 3 染色体异常为5 0 ，统计学上无显著差异。另外，与被认为预后较好的I t ( 8 ：2 1 ) ，i n v ( 1 6 ) ，t ( 1 6 ：1 6 ) 或预后较差的 7 ，d e l
13、 ( 7 q ) ，d e l ( 5 q ) 核型改变均无关。患者经同样标准诱导方案治疗，C D l 3 3 + 表达阳性( C D l 3 3 6 “g h t 和C D l 3 3 击“) 患者的C R 率为6 1 ，C D l 3 3 的为8 3 ，两者没有显著的差异。B i l l u i n g 等报道了2 3 例A M L 和9 例A L LC D l 3 3 的表达分析结果。A M L中C D 3 4 + 为1 8 例，其中C D l 3 3 + 1 5 例( 占8 3 ) ，C D l 3 3 3 例( 占1 7 ) ；C D 3 4 5例，其中C D l 3 3 + 4 例
14、( 占8 0 ) 。A L L 中C D 3 4 + 7 例，其中C D l 3 3 + 4 例( 占5 7 ) ，C D l 3 3 - 3 例( 占4 3 hC D 3 4 2 例，其中C D l 3 3 + 1 例。而S n e l l 掣报道1 7 例A L L 均未检测到C D l 3 3 阳性。B t h h _ r i n g 的结果与M i r a g l i a的相似：9 例A L L 中，2 例C D l 3 3 b r i 咖，2 例C D l 3 3 咖。4脐血c D l 3 3 + 造血干祖细胞生物学特性的研究和抗C D l 3 3 单克隆抗体的研制研究背景W u c
15、 h t e r t 4 对1 4 2 例A M L 、1 1 9 例A L L 、1 3 例C D 3 4 + v e 双表型A L 和2 4 例C M L急变病人进行C D l 3 3 和C D 9 0 表达分析。结果表明，5 的病人表达C D 9 0 ，3 8 表达C D l 3 3 。A M L 、A L L 两者间C D 9 0 和C D l 3 3 的表达无显著差别。在A M L 病人中，C D l 3 3 更多的表达在c D 3 4 + 白血病患者而不是C D 3 4 一患者，但并不局限于C D 3 4 + 1 刍血病细胞。所有8 例有1 l q 2 3 异常和M L L ( 混
16、合系白血病) 基因易位的前一B A L L细胞均表达C D l 3 3 ，而9 例没有M L L 基因易位前B A L L 细胞中只有2 例表达C D l 3 3 ；与此相反，有t ( 9 ；1 1 ) 和M L L 基因易位的5 例A M L 都不表达C D l 3 3 。鉴此，C D l 3 3和C D 9 0 表达分析对A L 免疫表型没有价值，但C D l 3 3 有可能作为非成熟A M L 细胞和带有M L L 基因易位前B A L L 细胞的标记。周余等n 5 3 对7 6 例A L 患者白血病细胞膜上的C D l 3 3 的表达进行检测，结果表明：正常对照和A L 患者的C D l 3 31 1 3 R N A 表达与C D l 3 3 蛋白表达相一致，A L 患者C D l 3 3 表达水平显著高于正常对照；A L 患者C D l 3 3 和C D l 3 3mR N A 高表达率分别为4
