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1、如何使用透析袋如何使用透析袋自 Thomas Graham 1861 年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。透析的动力是扩散压
2、，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是 4透析，升高温度可加快透析速度。透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国 Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量 MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为 MwCO）通常为1 万左右。商品透析袋制成管状，其扁平宽度为 23 mm50 mm 不等。为防干裂，出厂时都用10的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质
3、，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。可先用 50乙醇煮沸 1 小时，再依次用50乙醇、0.01 mol/L 碳酸氢钠和 0.001 mol/L EDTA 溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明，50乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于 4蒸馏水中，若长时间不用，可加少量 NaN2，以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方
4、可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加 50是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。检查透析效果的方法是：用 1 BaCl2 检查(NH4)2SO4，用 1 AgNO3 检查 NaCl、KCl等。为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司（
5、Biomed Instruments Inc.）生产的各种型号的Zeineh 透析器，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高 二透析袋使用前如何处理透析袋使用前如何处理透析袋的使用前处理：1. 把透析袋剪成适当长度（10-20cm）的小段。2. 在大体积的 2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸 10 分钟。3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸 10 分钟。5. 冷却后，存放于 4 度，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。6. 用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净。透析膜 (前处理方法如下)：1. 戴手套把透析膜剪成适当长度，浸在蒸馏水中 15 min 泡软。2. 浸入 10 mM sodium bicarbonate 中，并加热至 80，一边搅拌至少 30 min。3. 换到 10 mM Na2EDTA 中浸泡 30 min，以新鲜的 EDTA 同样方法处理三次。4. 再用 80 蒸馏水洗 30 min，然后换到 20% 酒精中，放在 4 冰箱中保存。
