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1、实验十六 维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）目的要求（1）学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。 （2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有 化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多 水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢
2、型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维 生素C氧化为脱氢型。根据它具有还原性质可测定其金属含量。还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二 氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全 部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料 立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化， 此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸 量成正比。 本法用于测定还
3、原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。试剂和器材一、试剂 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 标准抗坏血酸溶液（1mg/ml）: 准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于 1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。二、材料 苹
4、果、卷心菜等。三、器材 锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏斗，滤纸，微量滴定管（5ml），容量瓶 （100ml，250ml）。操作方法一、提取 水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20g，加入20ml 2%草 酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容 至50ml。二、 标准液滴定 准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚 溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫
5、克抗 坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。三、样品滴定 准确吸取滤液两份，每份10ml, 分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同前。另取10ml 1%草酸作空白对照滴 定。四、计算 式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；C为样品提取液的总毫升数； D为滴定时所取的样品提取液毫升数； T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数（由操作二计算出）； W为待测样品的重量（g）。注意事项(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。 (2) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2mi
6、n。滴定所用的染料不应 小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。 (3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。 (4) 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用。 (5) 干扰滴定因素有： 若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层 呈现淡红色。Fe2可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2不会很 快与染料起作用。 样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加
7、入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。 (6) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。思考题： 1为了测得准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？ 2 试简述维生素C的生理意义。附注： 维生素 C 标定法：为了准确知道标准维生素 C 含量，须经标定，方法如下： （1） 将标准维生素 C 溶液稀释为 0.02mg/L； （2） 量取上述标准维生素C溶液5mL于锥形瓶中， 加入6%碘化钾溶液0.5mL，1%淀粉 3 滴，再以 0.001mol/L 碘酸钾标准液滴定，终点为蓝色。 21 V0.088*Vmg/mL）抗坏血酸浓度（ 式中：V1滴定时所消耗 0.001mol/L 碘酸钾标准液的量（mL） ； V2滴定时所取抗坏血酸的量（mL） ； 0.0881mL 碘酸钾标准液（0.001mol/L）相当于抗坏血酸的量（mg）
