1 附件 9：促进消化功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率1.1.2 小肠运动实验1.1.3 消化酶测定1.2 人体试食试验1. 2.1 临床症状观察1. 2.2 胃/肠运动实验2 试验原则2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目2.2 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察3 结果判定3.1 动物实验：动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性3.2 人体试食试验： 临床症状积分结果和胃 /肠运动实验结果阳性， 可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性3.3 动物实验和人体试食试验均为阳性结果，可判断受试样品具有有助于促进消化功能的作用2 促进消化功能检验方法Method for the Assessment of Facilitating Digestion Function1 动物实验1.1 实验原理胃肠道是营养物质的摄取、 消化与吸收的器官， 对食物的消化作用主要是依靠其运动、消化酶的分泌来完成的。
如果某一保健食品能对这一环节或几环节有调节作用，那它就有可能有促进消化功能的作用1.2 实验项目促进消化功能动物实验包括大鼠体重、 体重增重、摄食量和食物利用率实验；小肠运动实验；消化酶的测定等三部分1.3 实验动物根据实验项目可选用单一性别成年小鼠或大鼠小鼠18g~22g，每组 10 只~15 只，大鼠 120g~150g，每组 8 只~12只1.4 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10 倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组和模型对照组受试样品给予时间30d（小肠运动实验受试样品给予时间7d~15d） ，必要时可延长至 45d1.5 实验内容1.5.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率选用同一性别的大鼠实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10％分不同剂量实验组和阴性对照组，经口给予受试样品， 每周测 2 次体重和食物摄入量实验结束时计算体重、体重增重、摄食量和食物利用率1.5.2 小肠运动实验选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯或洛哌丁胺造模。
可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为指示剂经口给予受试样品实验结束前禁食不禁水20h，于测定当天各实验组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水，30min 后各实验组和模型对 照 组 给 予复 方 地 芬诺 酯 5mg/kgbw ~6mg/kgbw 或洛 哌 丁 胺 5mg/kgbw ~6mg/kgbw(依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末 后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用)，空白对照组给予蒸馏水， 30min 后各组再给予指示剂 (精确称取阿拉伯树胶100g，加水3 800ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g 加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后定容到 1000ml，于冰箱中 4℃保存，用前摇匀 )，25min 后断颈处死动物，计算墨汁推进率按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（ %）＝ 墨汁推进长度（ cm）/ 小肠总长度（ cm） ×100%1.5.3 消化酶的测定选用同一性别的大鼠 分不同剂量实验组和阴性对照组，实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10％经口给予受试样品实验结束前各组动物禁食不禁水 24h，采用乙醚麻醉大鼠幽门结扎法收集一定时间内排出的胃液，测定单位时间内胃液量。
取胃液 1mL 放入 50mL 的三角烧瓶中， 加入 0.05mol/L 盐酸溶液 15mL 摇匀，放入新鲜制作的蛋白管两根塞好瓶口，在37℃恒温箱中孵育 24h，取出蛋白管，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm） ，以四端之值求其平均值计算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量胃蛋白酶活性单位（ μ/mL）＝四端蛋白管透明部分长度均值2×16 胃蛋白酶排出量（ μ/h）＝胃蛋白酶活性×每h 胃液量1.6 数据处理和结果判定计量资料可用方差分析， 但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算 F 值，F 值50％）的资料应用秩和检验表临床症状积分2.6.1 临床症状结果判定2.6.1.1 试食前后试食组自身比较及试食后试食组与空白对照组组间比较，临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，可判定该指标阳性适用于选用空白对照组）2.6.1.2试食前后试食组自身比较临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，且试食后试食组与阳性对照组组间比较，临床症状积分无明显增加， 可判定该指标阳性适用于选用阳性对照组）2.6.2 胃／肠运动试验结果判定试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，胃／肠运动试验指标明显改善，且钡条排出率大于等于30%为有效， 经统计处理差异有显著性，可判断该指标阳性。
2.6.3人体试食试验结果判定临床症状积分结果和胃 /肠运动实验结果阳性， 可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性症状轻（ 1 分）中（ 2 分）重（ 3 分）食欲食欲较差食欲差食欲很差腹痛持续时间短， 不需服药经常发作，引发两胁不适频繁发作，引发两胁疼痛腹胀腹胀有时发作腹胀较频繁， 在较长时间内不缓解腹胀频繁嗳 气泛 酸烧心间有发作， 偶有嗳气、泛酸、 烧心饮食不适即泛酸、烧心引起两胁不适较频繁发作，泛酸、烧心可有两胁疼痛失眠疲乏偶有发作饮食不适即发作较频繁发作6 人体试食原始记录格式、动物试验原始记录格式有助于促进消化功能保健食品人体试食观察表产品名称 _______________________________ 编号______________ 姓名___________ 性别______ 年龄______ 职业_______ 民族______ 住址或 ___________________________________________________ 既往史 ______________________________________________________ 家族史 ______________________________________________________ 胃镜检查结果： _______________________________________________ 诱因：情志不畅饮食不节劳累受寒 吸烟史：年支/日饮酒史：年两/日 发病时间 ____________________ 病程_______年 工作性质 : 脑力轻体力重体力症状变化 观察项目试食前 年月日试食中 年月日试食后 年月日 食欲不振早饱餐后饱胀不适上腹痛反酸 烧心嗳气恶心便秘便溏小结注：症状重度 3 分；中度2 分；轻度1分；无症状0 分体格检查 项目试食前试食后项目试食前试食后发育营养状况脊柱四肢五官及颈部胸部：心，肺腹部检查：压痛（肝脾）心率（次 /分）血压（ mmHg）精神小便7 临床检测 项 目结 果项 目结 果项 目结 果EKG B 超胸 透化验检查 项目试食前试食后项目试食前试食后HGB g/L CREumol/L RBC*1012/LBUNmmol/L WBC*109/L TC mmol/L ALT u/L TG mmol/L AST u/L TP G/L GLUmmol/L ALB G/L 胃动力检查 项目试食前试食后 胃肠运动试验钡条试验报告： 试食前 ________________________________________________________ 试食后 ________________________________________________________ 诊断：疗效判断：有效无效并发症：不良反应：观 察 者：年月日8 有助于促进消化功能保健食品动物试验原始记录格式1．剂量设计：推荐量/ 人·日 ( /kgBW)样品前处理及配制：1.1 墨汁配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加去离子水800ml,煮沸至溶液透明，称取活性炭 50g 加入上述溶液混匀，煮沸3 次，冷却至室温加去离子水定容至1000ml。
于 4℃冰箱中存放，用前摇匀1.2 0.5mg/ml 复方地芬诺酯悬液配制：取复方地芬诺片20 片(2.5mg/片)，用乳钵研磨后， 加去离子水至100ml，临用前配制1.30.05mol/L 盐酸：取12N 浓盐酸 1.25ml 加去离子水至300ml 2 操作步骤 : 2.1 小肠运动实验：动物检疫年月日- 年月日，未见异常，可用于试验于年月日选健康小鼠只，雌性， 随机分为5 组，每组只分别按推荐日摄入量 ( /kgBW)即、、 10、倍即、、/kgBW 为三个剂量组以为溶剂，按 ml/10gBW经口灌胃阴性对照组按ml/10gBW经口灌胃给予溶剂模型对照组按 ml/10gBW经口灌胃给予溶剂各组每天灌胃一次，连续天于月日，隔夜禁食16h，不限水于月日进行检测小肠运动实验小肠运动实验以复方地芬诺酯（5mg/kgBW ）按 10mL/kgBW对剂量组及模型对照组动物经 口灌胃阴性对照组给予等量去离子水经口灌胃30min 后，各剂量组动物按10mL/kgBW经口给予以含不同剂量受试物的墨汁，对照组动物给予墨汁，按10mL/kgBW经口灌胃。
25min 后处死，剖腹测量小肠全长及墨汁前沿与幽门的距离，按下式计算墨汁推进率2.2 测定：体重、体重增长、摄食量、食物利用率：动物检疫年月日- 年月日，未见异常，可用于试验月日选健康雄性种大鼠只，按体重随机分为组，每组只动物 单 笼 饲 养 分 别 按 推 荐 日 摄 入 量 ( /kgBW) 、 5 、倍 ， 即%100)()(cmcm 小肠总长度墨汁推进长度墨汁推进率9 /kgBW 为三个剂量组以为溶剂，按 ml/100gBW经口灌胃阴性对照组按ml/100gBW经口灌胃给予溶剂各组每天灌胃一次，连续 d每 w称体重次,记录进食量于月日，隔夜禁食24h，不限水于月日各组动物测定胃液量和消化酶2.3 消化酶的测定： 受试动物逐只用戊巴比妥钠(50mg/kgBW)麻醉，固定于解剖台，无菌条件下，于腹腔做一小切口，小心找到胃幽门结扎，常规缝合动物继续禁食，不禁水 h后，打开腹腔， 结扎喷门，取出全胃，用试管取出全部胃液，计算单位时间内胃液分泌量，取胃液1 ml 放入带盖平皿中，加入0.05mol/L 盐酸溶液15ml，摇匀，放入新鲜制作蛋白管2 支，封盖，置37℃温箱孵育24h，取出蛋白管， 测量透明部分长度(mm)，求四端均值。
测定胃蛋白酶活性 蛋白管制作方法： 采用麦特 (Mett) 的毛细管法，将内径1-2mm粗细均匀的毛细血管截成10cm , 洗净烤干 取适量蛋清充分打匀后，用纱布过滤，将上述毛细血管利用虹吸作用，灌满蛋清( 管内应无气 泡混入 ) 放置于 85℃热蒸汽使蛋白凝固待冷却后，取出石蜡将蛋白管两端封固，贮冰箱中 备用单位时间胃液量计算： 单位时间胃液量(ml/h)= 胃液总量 / h 消化酶计算： 胃蛋白酶活性单位(/ml)= 四端蛋白管透明带长度均值2*16 胃蛋白酶排出量(/h)= 胃蛋白酶活性* 单位时间胃液量 2.4 统计： 数据采用 SPSS 11.0 for windows 软件进行方差分析 小肠运动实验测定数据经转换，并经方差齐性检验再进行方差分析若变量转 换后仍未达到正态或方差齐的目的，改。