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1、食 用 菌 学 报 Z 2010. 17 (2) : 80 84收 稿 日 期 :2009212230 原 稿 ; 2010204212 修 改 稿基 金 项 目 :国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 “ 药 用 木 腐 真 菌 桑 黄 资 源 及 其 抗 肿 瘤 活 性 的 研 究 ” (编 号 :30870013) 的 部 分 研究 内 容作 者 简 介 :郭 佳 (1982 - ) ,女 ,吉 林 农 业 大 学 中 药 材 学 院 在 读 硕 士 ,主 要 从 事 火 木 层 孔 菌 化 学 成 分 和 抗 肿 瘤 作 用 的 研 究 。3 本 文 通 讯 作 者 126. 编 号
2、 :100529873 (2010) 0220080205两 种 桑 黄 发 酵 产 物 的 抗 肿 瘤 活 性 对 比郭 佳 1 , 宋 荣 1 , 包 海 鹰 1 , 崔 宝 凯 2(1吉 林 农 业 大 学 中 药 材 学 院 ,吉 林 长 春 130118 ; 2北 京 林 业 大 学 微 生 物 研 究 所 ,北 京 100083)摘 要 : 选 用 小 鼠 对 火 木 层 孔 菌 ( 和 瓦 尼 木 层 孔 菌 ( 酵 产 物 进行 抗 肿 瘤 体 内 试 验 ,测 定 其 对 小 鼠 抑 瘤 率 、 免 疫 器 官 指 数 、 免 疫 因 子 含 量 和 生 存 率 的 影 响
3、。 结 果 表 明 ,火 木 层 孔 菌 和 瓦 尼 木 层 孔 菌 发 酵 产 物 高 、 低 剂 量 组 (1 000 500 均 对 肿 瘤 具 有 一 定 抑 制 作 用 ,其中 瓦 尼 木 层 孔 菌 发 酵 产 物 低 剂 量 组 (500 抑 瘤 效 果 最 佳 ,其 抑 瘤 率 为 58. 7 %。 火 木 层 孔 菌 和 瓦 尼 木 层孔 菌 发 酵 产 物 高 、 低 剂 量 组 均 可 提 高 小 鼠 血 清 中 白 细 胞 介 素 2 ( 的 含 量 、 延 长 小 鼠 的 生 存期 ,但 是 对 血 清 中 肿 瘤 坏 死 因 子 (f 2 ) 含 量 的 影 响 作
4、 用 不 显 著 。关 键 词 : 火 木 层 孔 菌 ; 瓦 尼 木 层 孔 菌 ; 抗 肿 瘤桑 黄 ,俗 称 桑 黄 菇 、 桑 臣 、 桑 耳 等 ,属 于 多 孔菌 科 木 层 孔 菌 属 真 菌 ,是 一 种 珍 贵 的 大 型 药 用 真菌 1 。 桑 黄 作 为 药 用 真 菌 最 早 记 载 于 本 草 纲目 ,传 统 中 医 认 为 桑 黄 性 甘 、 平 ,味 苦 、 辛 ,归 肝 、膀 胱 经 ,用 于 治 疗 血 崩 、 血 淋 、 脱 肛 泻 血 、 带 下 、 闭经 、 脾 虚 泄 泻 等 2 。 现 代 药 理 学 研 究 表 明 ,桑 黄在 抗 癌 、 增 强
5、 免 疫 3 5 以 及 抗 肝 纤 维 化 等 方 面 效果 显 著 6 ,7 。 尤 其 是 抗 肿 瘤 方 面 ,桑 黄 对 肿 瘤 生长 具 有 显 著 的 抑 制 作 用 8 ,9 ,并 可 增 强 荷 瘤 小 鼠的 细 胞 免 疫 功 能 10 。 是 目 前 国 际 公 认 的 抗 肿 瘤最 好 的 大 型 真 菌 之 一 ,无 任 何 毒 性 作 用 ,是 一 种极 具 开 发 价 值 的 珍 贵 药 用 真 菌 6 。 目 前 我 国 桑黄 所 涉 及 的 种 类 大 约 有 20 种 ,本 研 究 选 择 的 是生 长 在 东 北 地 区 长 白 山 的 两 个 种 ,即
6、火 木 层 孔 菌( i 和 瓦 尼 木 层 孔 菌( v 。 笔 者 对 这 两 种 桑 黄 发 酵 产物 的 抗 肿 瘤 活 性 进 行 了 研 究 ,并 对 其 抑 瘤 机 理 做了 初 步 探 讨 ,旨 在 为 桑 黄 的 进 一 步 开 发 利 用 奠 定基 础 。1 材 料 与 方 法1. 1 菌 种 与 培 养 基火 木 层 孔 菌 ( P. i 和 瓦 尼 木 层 孔 菌( P. v 子 实 体 采 自 吉 林 省 长 白 山 ,经 吉 林农 业 大 学 图 力 古 尔 教 授 鉴 定 ,由 本 实 验 室 分 离 、纯 化 菌 种 并 保 存 ,菌 种 编 号 分 别 为 体
7、 培 养 基 :蔗 糖 3 %、 蛋 白 胨 0. 3 %、 酵 母 粉0. 3 %、 硫 酸 铵 0. 2 %、 磷 酸 二 氢 钾 0. 1 %、 硫 酸 镁0. 05 %。1. 2 实 验 动 物清 洁 级 昆 明 种 小 鼠 120 只 ,雌 性 ,体 重 1822 g ,购 自 吉 林 大 学 实 验 动 物 中 心 (合 格 证 编 号 :200320001) ;腹 水 型 瘤 小 鼠 购 自 吉 林 省 肿瘤 医 院 。1. 3 主 要 试 剂 与 仪 器52氟 尿 嘧 啶 (52购 自 吉 林 省 肿 瘤 医 院 ;2 试 剂 盒 和 剂 盒 购 自 上 海 锐 聪 实 验室
8、设 备 有 限 公 司 ;酶 标 仪 (美 国 Sp 。1. 4 桑 黄 菌 丝 培 养 和 发 酵 产 物 制 备向 装 有 50 体 培 养 基 的 三 角 瓶 中(250 入 4 块 0. 5 的 活 化 后 的 斜 面母 种 块 ,25 , 120 r/ 培 养 5 d ,培 养 物 作 为液 体 菌 种 用 于 下 步 实 验 。500 角 瓶 中 装 入 140 体 培 养 基 ,按 20 %的 量 分 别 接 入 不 同 桑 黄 的 液 体 菌 种 ,于30 、 130 r/ 养 8 d ,然 后 将 菌 丝 体 连 同 发酵 液 一 起 放 入 恒 温 烘 箱 内 35 加 热
9、 24 h 至 干 ,第 2 期 郭 佳 ,等 :两 种 桑 黄 发 酵 产 物 的 抗 肿 瘤 活 性 对 比所 得 干 燥 物 用 研 钵 磨 成 粉 末 ,即 得 火 木 层 孔 菌 发酵 物 和 瓦 尼 木 层 孔 菌 发 酵 产 物 。分 别 取 两 种 发 酵 产 物 粉 末 ,用 生 理 盐 水 配 成1 000 500 种 浓 度 ;以 25 的 52生 理 盐 水 为 溶 剂 )为 阳 性 对 照 。1. 5 桑 黄 发 酵 产 物 体 内 抑 瘤 实 验1. 5. 1 荷 瘤 小 鼠 模 型 制 备取 接 种 7 d、 生 长 良 好 的 腹 水 型 瘤 小鼠 ,颈 椎 脱
10、 臼 处 死 ,无 菌 抽 提 腹 水 ,用 生 理 盐 水 稀释 至 浓 度 为 1 106 个 / 细 胞 悬 液 ,以 每 鼠0. 1 种 于 120 只 小 鼠 右 后 腋 皮 下 。 正 常 饲喂 24 h 后 用 于 抑 瘤 实 验 。1. 5. 2 实 验 动 物 分 组 及 给 药 方 式120 只 小 鼠 被 随 机 分 成 不 同 的 12 个 组 ,每 组10 只 。 阴 性 对 照 组 以 生 理 盐 水 灌 胃 ,阳 性 对 照 组以 52 腔 注 射 给 药 ,另 有 4 组 分 别 以 两 种 不 同浓 度 的 两 种 桑 黄 发 酵 物 灌 胃 给 药 ,各 组
11、 给 药 体 积均 为 0. 2 10 g。 连 续 给 药 7 d ,每 天 1 次 。将 12 组 小 鼠 平 均 分 为 两 批 ,第 一 批 用 于 对抑 瘤 率 、 免 疫 器 官 指 数 和 免 疫 因 子 含 量 的 检 测 ,第 二 批 用 于 观 察 小 鼠 生 存 期 ,计 算 生 存 率 。1. 5. 3 抑 瘤 率 、 脾 指 数 和 胸 腺 指 数 检 测第 一 批 小 鼠 末 次 给 药 (即 第 8 天 ) 24 h 后 分别 称 重 ,之 后 摘 眼 球 取 血 、 处 死 小 鼠 ,摘 取 瘤 块 、脾 脏 和 胸 腺 ,分 别 称 重 ,计 算 抑 瘤 率
12、、 脾 指 数 、 胸腺 指 数 。肿 瘤 抑 制 率 = (对 照 组 平 均 瘤 重 - 给 药 组 平均 瘤 重 ) / 对 照 组 平 均 瘤 重 100 %脾 指 数 = 脾 的 重 量 (g)胸 腺 指 数 = 胸 腺 的 重 量 (g)1. 5. 4 2 、 量 和 白 细 胞 数 检 测第 8 天 小 鼠 摘 眼 球 取 血 0. 5 1 先 抽 取20 ,用 3 %的 冰 醋 酸 稀 释 20 倍 ,轻 轻 摇 匀后 使 用 细 胞 计 数 器 进 行 白 细 胞 计 数 。 将 剩 余 血液 离 心 (2 000 g ,20 mi n) ,取 血 清 测 2含 量 。 2
13、测 定 采 用 联 免 疫检 测 法 ,操 作 步 骤 按 试 剂 盒 说 明 进 行 。 加 入 终 止液 后 ,轻 轻 混 匀 ,在 酶 标 仪 上 450 读 取 吸 收值 O D ,按 标 准 品 曲 线 ,计 算 样 品 的 2 含 量 。1. 5. 5 生 存 时 间 检 测将 第 二 批 小 鼠 连 续 给 药 30 d ,观 察 每 组 小 鼠生 存 期 ,计 算 生 存 率 。1. 6 统 计 数 据 的 处 理所 有 数 据 采 用 0 统 计 软 件 进 行 处理 ,实 验 数 据 均 采 用 均 数 加 减 标 准 差 ( x s)表 示 。2 结 果 与 分 析2.
14、1 桑 黄 发 酵 产 物 对 小 鼠 的 抑 瘤 作 用两 种 桑 黄 发 酵 产 物 体 内 抑 瘤 结 果 如 表 1 所示 ,两 种 桑 黄 发 酵 产 物 高 、 低 剂 量 组 对 肿 瘤 均 具有 一 定 抑 制 作 用 ,抑 瘤 率 均 大 于 30 % ,其 中 瓦 尼木 层 孔 菌 发 酵 产 物 低 剂 量 组 的 抑 瘤 效 果 最 佳 ,其抑 瘤 率 为 58. 7 % ,与 52 的 抑 瘤 率 (58. 8 %)相 近 。表 1 火 木 层 孔 菌 和 瓦 尼 木 层 孔 菌 的 发 酵 产 物 对 小 鼠 的 抑 瘤 率 . . 22 ( d)D (g) 瘤 率 ( %) 组 0. 847 0. 30752 照5225 0
