中药化学成分提取分离中医药

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1、常规化学成分提取分离经验关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子 上就是样品层比较薄） ，这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5 厘米，那么各组分就比 较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了。 现在见到的柱子径高比一般在1：510，书中写硅胶量是样品量的3040 倍，具体的选择要具体分 析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf 在 0.20.4，杂质相差0.1 以上） ，就可以少用 硅胶，

2、用小柱子（例如200 毫克的样品，用2cm20cm 的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。 用石英做柱子，然后用HF254 做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，但没 有验证过。关于湿法、干法上样 湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干 法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明 显的固体颗粒（那说明有的

3、样品没有吸附在硅胶上）。 关于操作问题1 装柱 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。 干法和湿法装 柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢）， 一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，加压可以消除气泡，或者放置过夜，如果硅胶还没沉淀下来，没有上样品，可以重 新用玻璃棒搅拌一下，让它重新上样。2 加样。 用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶 剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英

4、砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶 样品的溶剂和样品层有一段距离（24cm 就够了） ，再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品 快速下行。3 淋洗剂的选择。 感觉上要使所需点在rf0.2 0.3 左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性， 如果rf 在0.6 ，即使相差 0.2 也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8 一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。 4 样品的收集。 用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容 易流出

5、。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别 是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，如果都用小试管那工作量又太大。 5 最后的处理。 柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。 1、洗脱剂的选择，一般是以第一个点在TLC 上Rf值0.2 0.3 为基础，稀释一倍进行第一个样品点的洗脱， 并在洗脱下第一个点后更换下一个点的洗脱极性（0.2 0.3 稀释一倍）。2、变花是由于柱子中气泡的存在，放置过夜和过快更换洗

6、脱极性都会产生气泡。装柱子时一定要搅拌使 得硅胶中的气体尽量拍干净。更换极性时， 我一般从 50:1 到20:1 是逐渐更换的， 就是先到 40:1，30:1在到 20:1 。这样更换，放热就不明显。 1. 根据柱层析洗脱的要求，最好是先从低极性溶剂，如石油醚或正己烷开始，逐步加大洗脱剂极性，进 行梯度洗脱，这样的效果比单一洗脱剂要好。 过常压柱子时，为什么过柱过程中柱子内会有气泡，怎样避免，遇到这种情况应该怎样处理？若是硅胶柱，还没有上样的话，可以搅一搅，让其自然沉降就可以；若是已经上了样品，就只好加压赶赶 气泡试试。 一般过硅胶柱如何避免产生气泡： 1. 装柱之前应搅拌均匀， 然后装柱；

7、2. 装柱尽可能一次性的装完， 3.过柱的时候， 你是否干过柱， 这也会产生气泡； 4. 还有你在装完柱后， 最好在硅胶上方加一片圆形滤纸， 加上后再加一块棉花， 这样加溶剂冲洗时， 可以避免冲起硅胶， 产生气泡； 如果气泡已经产生， 可以： 1.加压驱赶气泡； 2. 我自己也发现了一个方法，你试试，就是先不要冲洗，放置过夜，第二天早上气泡就 会到了上面，不过有的时候不行。 3. 如果还不行，就用高极性的溶剂冲下样品，收集，重新装柱。 湿法装柱要点： 1. 估算柱子硅胶用量 2. 估算溶剂与硅胶混合量 3. 将溶剂与硅胶于烧杯中搅拌均匀，应 搅至无气泡 4. 用漏斗装柱，尽可能一次性加完. 5

8、.反复加溶剂平衡柱子，至柱床不再下降为止。 6. 加 样有两种方法， 可溶于以上溶剂的样品，可用适量溶剂溶解后， 将溶剂放平柱床后直接加样；还可用适宜溶剂溶解样品，用适量硅胶拌样，硅胶量以能分散样品即可，尽量少，以减小初始色带，加样时，柱床上 留少量溶剂，加样后，应轻敲柱子样品带的四周，使气泡上移，样品带上加棉花或盖少量硅胶，防止加溶 剂时冲动样品层，加好样后连续冲柱时间尽量长些，至少10小时以上，可基本消除气泡的产生。【求助】如何改变 TLC 展开剂以达到硅胶柱最佳分离？ 最近在研究 TLC 条件， 以达到活性组分在硅胶柱上的较好分离。直接将 TLC 条件用于硅胶柱分离不是很理想。网上朋友建

9、议我讲 TLC 展开剂的溶剂强度降低3050然后上柱。我的问题是：如何才能达到将溶剂强度 降低？是采用加入强度更低的溶剂来调整吗？还是有其他办法？请大家帮忙！ 首先， TLC 的一个重要的作用就是为层析时选择合适的洗脱体系，和合适的洗脱比例。一般来讲，如果要 将TLC 中合适的洗脱比例用于柱层析时，一般应该适当减小洗脱强度，所以所谓降低3050，是有道理 的。如何降低了，当然一般是调节洗脱液的比例，在使用TLC 时，一般来讲，是很少用一元体系来展开，特别是对于成分较为复杂的化合物，几乎是不可能。 通常来讲一个展开体系， 包括由两部分组成， 一部分： 基本展开体系（包括极性大的试剂，极性较小的试

10、剂。其中，极性较小的部分一般起到分离的作用，极性 较大的试剂一般起到帮助化合物在薄层上移动，对分离物质的洗脱能力较强，可以提高比移植， 但不能提高分辨率。二部分：展开剂中加入酸或碱，主要是抑止某些酸或碱性物质而产生斑点的拖尾。（至于如何 产生的拖尾 , 如有兴趣，下次可以在将）。讲到这里，我想你应该明白就是调节基本展开体系的溶剂的比例即可，换言之，增大小的比例，或减小大的比例，这都是相对的。 柱层析时还是以配制后用TLC 验证 Rf值为好，分离斑点之间 Rf值相差较大时， 将Rf值调节在 0.2左右，梯度 洗脱；斑点相距较近或呈念珠状相连时，将主要斑点Rf值调至 0.15 至0.2之间为好。

11、Rf值太小，柱上洗脱 时间较长，谱带扩散较严重；Rf值太大，洗脱平衡不充分，也难于分开。感觉斑点的洗脱体积与其Rf值有 近似倒数的关系，Rf为0.1 时，需 10个保留体积来洗脱；Rf为0.3 时，需 3个保留体积洗脱；一般斑点在7或8个保留体积洗脱时，效果最好。 一般萃取，可以用石油醚、EtOAc、n-BuOH 。石油醚和 EtOAc部分可用硅胶分段， n-BuOH 可用硅胶、大孔树 脂或ODS 分段（视化合物的种类来定，如果不肯定的话可以先用大孔树脂分段）。重结晶相关问题【求助】重结晶高手请进:低熔点固体的结晶 我的产品粗品为油状物,用乙醚 石油醚结晶 ,产品的熔点大概 50-60度.析出

12、的老是油状物 ,焦急万分 ,请有经 验的朋友帮忙解决 ,谢谢 首先通过 TLC或HPLC确定产品的纯度，如果产品纯度不高，获得结晶的难度较大。可通过适当方法（如 柱层析）先提高产品纯度，再尝试获得晶体。在产品达到较高纯度后，先用少量热溶剂（产品易溶溶剂，一般为乙醚）将油状物溶解，将烧瓶放在冰浴/冰盐浴中，搅拌下缓慢滴加产品不易溶溶剂（一般为石油 醚），在此过程中应注意滴加速度，一旦溶液出现浑浊，应减慢滴加速度，并停止搅拌，静置冷却并补加 适量产品不易溶溶剂。 此法一般可以获得该低熔点固体，该固体可用于下次混合溶剂热溶冷却后的诱导结晶。 乙醚一般可用乙酸乙酯代替；石油醚则可尝试30-60或60-

13、90 度沸程，亦可尝试用正己烷代替。 【求助】水溶性物质重结晶! 我以前从没做过重结晶,而且听说水溶性物质重结晶很麻烦,请高手指点一下 ,水溶性物质重结晶的时候选 用那些溶剂和混合溶剂比较好那?应该注意那些事项,具体的操作应该怎么做?清有经验的高手指点一下, 谢谢! 如果你的样品时水溶性的，那么将你的样品用甲醇或者水制成浓溶液，向溶液中逐滴加入10倍量的亲脂性溶剂（如石油醚、氯仿等），静置，或许会有晶体析出。将此晶体或者混浊抽滤或者用滴管吸出，再用 合适的溶剂洗涤，重结晶即可。 水溶物用反萃的多。如果产品冷热溶解度差大的话，在水中直接热溶解然后冷冻析出就可以；如果没有冷热溶解度差或者差异很小，

14、往你的产品水溶解中加4到10倍与水混溶的溶剂。另外醇、酮与水的混合 溶剂也是个好办法。 求助 如何把 TLC 板上两个很近的点分开？ 这两个点是非对映异构体，rf 值只差 0.04，hex:EA=10:1, rf值0.5 左右， 装了20cm 的column, 用hex:EA=20:1 的洗脱剂，只分开一半。 求教这里的各位大侠，我到底应该用极性小的洗脱剂冲还是就用10:1冲， 感觉用极性小的扩散蛮厉害的。不知道你说的 20cm 的柱子是什么状况，比如柱径比和硅胶/ 样品比，因此只能泛泛而谈： 1、既然能分开一半，说明对柱层析的条件加以改善还是有望分开的。hex:EA=10:1, rf值0.5

15、左右，你选 择hex:EA=20:1 做洗脱剂。 我的建议是先找到 rf 值0.2 左右的系统 （估计就是 20:1或者 30:1），再对此系统稀释一倍后（如 20:1 稀释成 40:1）做洗脱剂。 2、对于 rf 值只差 0.04 ，建议硅胶 / 样品比例应大于 50，且在满足柱径比大于10的前提下， 尽量选择直径比较大的柱子，以减少边缘效应。 3、可以考虑选择硅胶H作为柱填料。硅胶 H比一般粗硅胶的粒度细且更均匀，因此分离效率要高些，但是 也因此阻力大些。所以通常需要加压。 4、扩散厉害，可能是你的柱子走的太慢的缘故，可以尝试加快些速度。 5、柱子一定要装得比较好。多花费些时间，把柱子敲打

16、瓷实吧。2. 如何防止冲料 冲料是由于温度急速上升, 使产生的气体不能及时的排出而造成的. 冲料之前的主要现象 : 刚开始的时候 , 烧瓶上端内侧会产生少量的液珠( 这证明反应体系已经有局部回流), 温度变化开始加大 ;搅拌的旋涡中慢慢充满气泡 . 这时注意要做好降温和排气工作, 降温的方法 : 停止加热或者关小加热, 如果气泡还继续增加 , 先减小搅拌 (注意如果你停止了搅拌后, 要等温度降了以后才能慢慢开, 不然一开搅拌就会有冲料的危险),用湿布再降温 , 然后用水浴降温 . 排气的方法 : 撒去干燥管 , 条件可以的话可以在烧瓶上面多加一支回流管, 还可以用泵的把气体带走. 冲料主要出现在刚开始加热的时候, 所以反应和蒸溶剂的时候 要缓慢加热 . 正因为这样 , 在瓶里装料的 时候 一般不能超过反应瓶的2/3. 【原创】天然药化实验经验交流天然药物或者是中药， 在我国临床上有者广泛的应用。特别是一些民间的特效药用植物，发挥着甚至是西 药无法比拟的功效。 近年来，国家加大了中医中药的研究投入和研究力度，这正是我们中医药工