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1、1反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中 甘草酸的含量【摘要】 目的采用反相高效液相色谱（RP HPLC）法测定竺黄复方片中甘草酸的含量。方法采用 kromasil C18 柱（200 mm4.6 mm,5 m），以甲醇-0.2 molL-1 乙酸铵-冰乙酸（65351）为流动相，流速 1 mlmin-1，柱温 30 ，检测波长 250 nm。结果在 0.4022.010 g 之间，峰面积与进样量的线性关系为 A= 673 028.287 8C -67 302.707 6（r=0.999 8），平均回收率为 99.66。测得 3 批样品中甘草酸的含量（以甘草酸铵计）分别为 1.034，1.103
2、和 1.008 mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。 【关键词】 竺黄复方片； 甘草酸； 反相高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method to determine glycyrrhizic acid from prescription of Zhuhuang Tablet.MethodsThe column was kromasil C18 (200 mm4.6 mm,5 m), the mobile phase consisted of Methanol0.2 molL-1Ammonium ac
3、etate- Glacial acrtic acid (65:35:1), with the flow rate of 1 mlmin-1 and the UV detector was set at 250 nm.ResultsThe method showed a good range of 0.4022.010 g (r=0.999 8).The average recovery was 99.66%.The glycyrrhizic acid contents of three batch samples were 1.034, 1.103，1.008 mg, respectively
4、.ConclusionThis method is simple, accurate, repeatable and suitable for the determination of glycyrrhizic acid in prescription of Zhuhuang Tablet.Key words：Prescription of Zhuhuang Tablet； Glycyrrhizic acid; RPHPLC竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎（唐古特乌头）等九味药材组成，具有利肺、消炎、止痛的功效，用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等1。该方标准收载于中华人民共和国卫
5、生部药品标准藏药第一册，标准未收载鉴别项和含量测定项，不利于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法，增加含量测定项，提高其质量标准。21 材料Waters2695/2690 分离系统，2996（2487）检测器，Empower 色谱管理系统，岛津UV-2100 型紫外分光光度计，Atuto Science AS5150 超声波清洗仪，Sartorius 公司BP211D 电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 甘草酸的含量测定2.1.1 色谱条件和系统适用性实验用 kromasil 色谱柱（200 mm4.6 mm,5 m），流
6、动相为甲醇-0.2 molL-1 乙酸铵-冰乙酸（65351），流速 1 mlmin-1，柱温：30 ，检测波长 250 nm2，按甘草酸铵峰计，色谱柱理论塔板数不低于 2000，甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离，峰形对称，色谱图见图 1。2.1.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取甘草酸铵对照品适量，置 10 ml量瓶中，加甲醇-0.2 molL-1 乙酸铵-冰乙酸（65351）溶解并稀释至刻度，摇匀,使成为每毫升中含对照品 0.201 mg 的溶液即得。样品溶液的制备：取竺黄复方片适量，研细，取 1.5 g，精密称定，置 100 ml 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2 molL-1 乙
7、酸铵-冰乙酸（65351）溶液 45 ml，称定重量，超声处理 30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用 0.45 m 滤膜滤过即得。阴性样品溶液的制备：取缺甘草的阴性样品，照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。 2.2 方法学考察32.2.1 线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液 2，4，6，8，10 l 注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积 A 为纵坐标，进样量 C（g）为横坐标，进行回归，得回归方程：A= 673 028.287 8C - 67 302.707 6，甘草酸铵在0.4022.010 g 之间，进样量与
8、峰面积线性关系良好（r=0.999 8）。2.2.2 精密度实验精密吸取对照品溶液 10 l，连续进样 5 次，甘草酸铵峰面积的 RSD 为 0.97，表明仪器精密度良好。2.2.3 重复性实验取竺黄复方片品（批号 20040301）研细，取 1.5 g，5 份，精密称定，置 100 ml 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2 molL-1 乙酸铵-冰乙酸（65351）溶液 45 ml，称定重量，超声处理 30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，结果甘草酸含量（以甘草酸铵计）平均含量为 2.75 mgg-
9、1,RSD 为 1.81。上述实验表明，该方法的精密度较好。2.2.4 稳定性实验取样品供试液（批号 20040301）与甘草酸铵对照品分别于0，2，4，6，8 h，分别进样 10 l 注入色谱仪，记录峰面积，平均峰面积为 533 271 ，RSD 为 1.97 %,说明样品溶液 8 h 内稳定。2.2.5 加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液（0.2010 mg/ml）10 ml，5份，分别置 100 ml 具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇，取已知含量的样品（批号20040301）约 0.8 g，5 份，精密称定，置上述锥形瓶中，加入甲醇-0.2 molL-1 乙酸铵-冰乙酸（65351）溶
10、液 45 ml，称定重量，超声处理 30 min，放冷，称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取上清液，用 0.45 m 过滤膜过滤，作为4供试品溶液。按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表 1。表 1 加样回收率实验结果（略）2.2.6 专属性考察精密吸取阴性样品溶液 10 l，注入色谱仪，结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。2.2.7 样品测定样品按 2.1.2 项下方法制备样品溶液后，再按上述重复性试验项下方法测定含量。3 批样品中甘草酸铵含量分别为 1.034，1.103 和 1.008 mg/片。3 讨论在甘草酸的含量测定中，提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取，结果表明用流动相提取效果更佳。本实验用 RPHPLC 法测定竺黄复方片中甘草酸的含量，所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。【参考文献】1国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准藏药，第一册S.1995:251.2国家药典委员会中国药典,部S.北京：化学工业出版社，2005：59.
