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1、第九章 免疫学应用温州医学院微生物学和免疫学教研室 陈庆新 免疫学防治： 免疫学预防免疫学治疗 免疫学诊断： 体外免疫检测体内免疫检测一、免疫学预防（一）人工自动免疫法（ 概念：给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫力的方法。抗原物质：1）疫苗（ 2）类毒素：3）新型疫苗：1） 疫苗 （ 苗：用细菌、螺旋体制成的生物制品（菌苗）或病毒、立克次体制成的生物制品（疫苗）。种类：死疫苗：选用免疫原性好的标准微生物人工培养后，用物理或化学方法杀死或灭活后制成的生物制品。伤寒、霍乱、百日咳、流脑斑疹伤寒、 钩端螺旋体等疫苗优点：易保存缺点：接种量大，接种次数多（ 2 3次）免疫效果较差
2、。活疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或无毒的活的病原微生物制成的生物制品。卡介苗（ 麻疹、脊髓灰质炎疫苗等优点：接种量小，一次接种免疫效果较好。缺点：不易保存死疫苗与活疫苗的比较区别点 死疫苗 活疫苗制剂特点 死，强毒株 活，无毒或弱毒株接种量及次数 量较大， 2 3次 量较小， 1次保存及有效期 易保存，有效期 1年 不易保存， 4 冰箱内数周免疫效果 较低，维持数月至 2年 较高，维持 3至 5年甚至更长2）类毒素细菌外毒素经甲醛处理，消除其毒性，保留其免疫原性，这一制剂即为类毒素。常用的类毒素：白喉、破伤风类毒素3）新型疫苗（ 1）亚单位疫苗：提取病原微生物有效免疫原成份制成的疫
3、苗。 流感、乙肝血源性疫苗（ 2）合成疫苗：用人工合成多肽抗原连接适当载体与佐剂制成的疫苗。 3）基因工程疫苗：用基因工程技术将编码病原微生物抗原的基因插入另一生物体基因组中，使之表达病原微生物抗原，所制成的疫苗 。 ）数、疫学治疗 概念：给机体输入抗体，使机体获得特异性免疫力的方法。 人工被动免疫制剂（一）人工被动免疫（ 人工被动免疫制剂（ 1）抗毒素：类毒素 马 血清 抗毒素纯化常用抗毒素：白喉抗毒素、破伤风抗毒素、气性坏疽抗毒素（ 2）正常人丙种球蛋白（丙球）：由健康产妇胎盘血或正常人血浆中提取制成用于急性传染病的紧急预防，分别称为 人血浆丙种球蛋白和胎盘丙种球蛋白可用于麻疹、脊灰、甲肝
4、等传染病的紧急预防和治疗。（ 3）人特异性免疫球蛋白：含有高效价的特异性抗体来源：恢复期病人血清含高效价特异性抗体的供血者血浆。优点：在体内留存时间长，不易发生超敏反应。）免疫增强剂概念：种类：细胞因子（ 生物制剂（卡介苗）化学药物（左旋咪唑）多糖类制剂（人参多糖）用途：（三）过继免疫概念：将供者的淋巴细胞转移给受者，以增强其细胞免疫功能的一种疗法。骨髓细胞 周淋巴细胞（ 体外用高浓度的 产生具有广泛杀伤肿瘤细胞的能力、而对正常细胞无毒性的免疫效应细胞。人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自动免疫 人工被动免疫输入物质 抗原 抗体免疫力出现时间 1 4周后生效 注入后立即生效免疫力维持时间 数
5、月数年 2 3周用途 多用于预防 多用于治疗或紧急预防三、免疫学诊断体外免疫检测体液免疫检测：原理血清学反应及其常见类型细胞免疫检测： 液免疫检测、细胞免疫检测 原理：利用抗原与抗体特异性结合后在一定的条件下可出现肉眼可见现象（如凝集、沉淀等）。（一）体外免疫检测血清学反应：在进行抗原抗体反应时，往往采用人或动物的血清作为抗体来源，故体外的抗原抗体反应也称血清学反应。（ 1）特异性（ 2）可逆性（ 3）可见性：比例合适，出现可见反应（ 4）阶段性：分为两个阶段特异性结合，快（几 秒到几分），无可见反应；出现可见反应，慢（几分到几小时）1、血清学反应的特点：2、血清学反应类型（ 1）凝集反应颗粒
6、性抗原 与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集物。1）直接凝集反应 玻片法：定性，已知抗体测未知抗原细菌的鉴定和分型人类 试管法：定量，用已知抗原测未知抗体的量肥达氏试验 在血清学反应中，抗原抗体结合出现明显反应的最大血清（或抗原制剂）稀释度。又称滴度。2）间接凝集反应可溶性抗原 载体颗粒 免疫微球（致敏载体） 抗体 凝集可溶性抗原先吸附在一与免疫反应无关的颗粒载体上，成为致敏颗粒，再与相应抗体结合，出现的凝集现象称为： 间接凝集反应可溶性抗原先与抗体混合，再加入致敏颗粒，因抗体已与抗原结合，不再出现凝集现象，这种反应称为： 间接凝集抑制试验常用的载体颗粒 乳胶颗粒 人 羊 抗体 接血凝试验 抗原
7、 向间接血凝试验： 敏感性高、快速、简便2）沉淀反应可溶性抗原 与相应抗体结合，出现肉眼可见的沉淀物。可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌滤液等1）单向琼脂扩散试验定量，临床上常用于 3的测定。单向琼脂扩散实验2）双向琼脂扩散试验用于分析和鉴定抗原、抗体浓度的测定。双向琼脂扩散实验（ 3）补体结合反应补体结合反应左：反应阴性（溶血）；右：反应阳性（不溶血）利用荧光素、酶、放射性同位素等标记抗体或抗原，进行的抗原抗体反应。三大标记技术：免疫荧光技术酶联免疫吸附试验（ 射免疫测定3、免疫标记技术（ 1）免疫荧光技术以荧光素标记抗体或抗原，检测相应抗原或抗体。常用的荧光素有：异硫氰荧光素、
8、罗丹明。1）直接法简便、特异性高，但要制备相应的荧光抗体。带抗原的细胞 荧光抗体 细胞被荧光抗体结合2）间接法敏感，方便，但特异性较差。荧光标记的抗 2）免疫酶技术用酶标记抗体来检测抗原的方法。1)免疫酶组织化学染色（免疫组化）：酶标抗体与抗原结合加入底物底物被氧化显色2）酶联免疫吸附试验（ ： 间接法：测抗原抗体与抗原结合包被已知抗原加被检血清加酶标记抗球蛋白加底物显色酶标记抗球蛋白与抗体结合 双抗体夹心法：检测抗原包被已知抗体加被检抗原加酶标记抗体加底物显色抗原与抗体结合（ 3）放射免疫测定标记物为同位素优点：敏感性高，可自动化。缺点：需特殊的仪器；有放射性危害。（ 4）金标记技术胶体金：
9、免疫电镜、斑点金、层析金标技术目前应用广泛，快速检测技术（二） 1） 2）荧光抗体染色2、 外周血单个核细胞小鼠抗人 荧光素标记的 兔抗鼠 有相应 细胞着色计数并计算百分率正常值： 60 80%55 60%20 30% 培养 3天 增殖反应3内免疫检测（一）体液免疫检测1、 和反应皮肤试验（二）细胞免疫检测1、特异性抗原皮肤试验（结核菌素试验）2、植物血凝素皮肤试验结核菌素试验结核菌素 注射受试者前臂内侧皮内红肿硬结 48小时后无红肿硬结或 理： 型超敏反应步骤：A TB is on a is 结核菌素试验结果分析阳性： 对结核杆菌有特异性细胞免疫力；机体细胞免疫功能良好。阴性： 对结核杆菌无
10、特异性细胞免疫力；排除后，机体细胞免疫功能低下。本章小结 疫苗、类毒素 凝集反应 沉淀反应 免疫标记技术人工主动免疫 人工被动免疫 酶联免疫吸附试验（ 结核菌素试验自测题 颗粒性抗原与相应抗体特异性结合形成的可见反应称为 反应；可溶性抗原与相应抗体特异性结合出现的可见反应称为 反应。 类毒素是细菌的 经 处理后制成的。答案：凝集反应、沉淀反应；外毒素、甲醛自测题 抗原和抗体结合是否出现可见反应，主要与下列何者相关A、气体 B、电解质C、抗原和抗体的数量比例D、酸碱度 E、温度答案： 用于 胞因子检测B 胞毒试验D抗体形成细胞试验E 化）试验答案： 胞结合D可与 人淋巴细胞结合答案： 琼脂扩散试验属于A间接血凝试验B补体结合试验C沉淀反应D免疫荧光试验E 下列那种抗原不是颗粒性抗原A金黄色葡萄球菌B伤寒杆菌C红细胞D抗原包被的乳胶微粒E细菌外毒素答案： 可用于人工被动免疫的生物制剂是A白喉类毒素B破伤风抗毒素C卡介苗D百日咳疫苗E脊髓灰质炎疫苗答案： 可用于人工主动免疫的生物制剂是A破伤风抗毒素B白喉类毒素C干扰素D白细胞介素E静脉注射用免疫球蛋白答案： 用于紧急预防和治疗的制品应除外A胎盘丙种球蛋白B白喉抗毒素C类毒素D单链抗体E高效价乙肝免疫血清答案： OU!
