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1、1.1. 怎样选择合适的手性柱怎样选择合适的手性柱对于在文献中未提及的分析物分离，请参照表 1 选择合适的手性柱。 表 1-手性柱选择指南 外消旋体外消旋体实例实例合适的手性柱合适的手性柱正相反相1简单芳香醇（1-芳香基）醇例如 1-（4-溴苯）乙醇RC-SCDPRC-SCDPRC-MCDP2.-手性类必得安 美托洛尔 烯丙洛尔异丙基肾上腺素RC-SCDPRC-SCDPRC-MCDP3.胺托品碱布比卡因RC-SCDPRC-MCDP4非质子酸和弱酸苄氟噻嗪 三氧甲噻二苯乙醇酮 二氢化苯偶姻RC-MCDP5.不对称中间产物嘧啶 生物碱RC-SCDPRC-MCDP2.2. 选择一点开始你的分析选择一
2、点开始你的分析下面是正相和反相的流动相选择指南:3.3. 流动相操作流动相操作A A 正相色谱正相色谱在正相模式下，流动相通常由正己烷和异丙醇（IPA）组成。图 1 给出了异丙醇比例的改变对保留因子(k)和选择因子（）的影响。图 1 IPA 比例对 k 和 的影响流动相：己烷/异丙醇，检测波长，230NM，流速：1.0 ml/ min结果表明增加 IPA 的比例会导致心得安药物的两种对映异构体的 k明显减少。这可以用氢键的作用力减弱来解释。B B 反相色谱反相色谱 极性有机修饰剂极性有机修饰剂以环糊精为基质的手性柱主要以反相模式为主。因为包结化合物很容易在水相和极性有机相中形成，因此包结化合物
3、通常在水相中有很高的稳定性，加入足够多的有机修饰剂时稳定性会减弱。与只是在水相相比，有机水相中的样品和环糊精的包结强度会减弱。因此，在反相中，增加流动相中水的比例可能会使保留值减少。我们公司的手性柱用甲醇和乙腈作为最普通的有机修饰剂。因为相对于甲醇，乙腈和环糊精的空穴有更大的亲和力，所以乙腈的洗脱能力比甲醇大 4 倍左右。有时，加入两种有机修饰剂，选择性可能不同。目前，很难预测在某一情况下选择哪种修饰剂对分离会有较好的效果。图 2 表明了在 RC-SCDP5，不同含量的乙腈对分离必得安对映体的影响。图 2 乙腈比例对 k和 的影响流动相：水/乙腈，检测波长，230nm，流速：1.0 ml/ m
4、in 缓冲溶液缓冲溶液缓冲溶液在对映体分离过程中起重要作用。在流动相中添加少量盐对保留值和分离度会产生明显的影响。几乎所有盐类都有利于分离，其中的一些效果显著。环糊精手性固定相的缓冲溶液可以是三氟酸、三乙胺醋酸盐(TEAA)和磷酸盐（TEAP）缓冲溶液。由于 TEEA 相对腐蚀小和容易调节 PH 值，它通常作为添加剂。在某些情况下，对映体分离只能在一个 PH 值下有效地进行。三乙胺醋酸盐和三乙胺磷酸盐通常用来提高对映体分离度。它们与延伸在空间中和溶质结构中的胺基基团相互作用而提高分离度。醋酸可以使氨基甲酸盐的一部分羰基基团通过氢键发生作用，那些氨基甲酸盐的孔洞都会有位阻现象 。正常的 TEAA
5、 的浓度范围应在质量分数 0-1.5%，TEAP 为 0-0.3%。图 3 缓冲溶液对 和 Rs 的影响流动相：乙腈/缓冲液（0.2%，pH=5.0）=45/55（v/v） pHpH一般用于环糊精键合固定相的缓冲溶液的 pH 值范围是 3.0-8.0。当 pH 低于 3.0 时，配基与硅胶连接的硅碳键可能断裂；当 pH 大于 8.0 时，硅胶表面将会被损坏。对于本公司的色谱柱，我们在 pH 范围为 3.8-6.5 的不同条件下，研究了 pH 值对对映体分离的影响。（图 4）必须强调的是：每一种物质在分析时都会有最佳的 PH 值。在最佳的 PH 的条件下，将会达到非常好的分离效果。图 4 不同的
6、 pH 对分离效果的影响缓冲溶液的浓度也会影响对映体分离。总体来说是：随着浓度的升高，选择因子（）和分离度（Rs）将会降低。(图 5) 图 5 TEAA 浓度对 k/, Rs 影响 流速流速在正相和反相色谱中，高效液相色谱的柱效和流速有关。然而，在优化分离条件时，却很少考虑到流速。因为人们一般追求短的分析时间。对于环糊精键合手性固定相，流速为 0.5-2.0 ml min-1 时可实现大部分对映体的分离。为了在我们的手性柱上得到光学纯对映体的最佳条件，我们研究了在反相中的最佳流速。一般对于半制备手性色谱柱分析，考虑到降低成本和时间，为了实现基线分离，能否找到一个合适的流速很重要。图 6 说明了
7、流速对我们手性柱分离效果的影响图 6 流速对 t, k/, Rs 的影响流动相：乙腈：三乙胺-醋酸缓冲溶液=45/55，缓冲液 PH 为 5.0；流速：0.1-1.0 ml min-1结果表明：随着流速的增加，保留时间减少。然而，保留因子(k)在流速为 0.5 ml min-1 时达到最大值。流速从 0.1 to 1.0 ml min-1 的变化中，分离度明显减少，但是选择因子（）却没有太大的变化。 柱温柱温在拆分中，柱温对于高效液相色谱手性分离是重要的。在优化分离条件时，柱温是必须研究的参数。对分析或制备色谱分离，只有在很高的 k/值时才能实现较好的分离，改变柱温有利于达到这一目的。有些固定相与对映体存在包结络和作用，例如环糊精键合固定相，柱温对这种固定相的保留溶质，尤其是在反相中，产生很大影响。这是因为柱温对溶质和环糊精键合常数影响很大，例如当柱温升高时，大多数情况下，在温度范围为 60-80 C 时，溶质的键合常数急剧减少至零。图 7 柱温对 k, 的影响样品：1- ( 3-羟基苯基)乙醇 流动相：正己烷/异丙醇=60/40（v/v）
