《维生素d受体基因多态性与慢性牙周炎的相关性》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素d受体基因多态性与慢性牙周炎的相关性（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、北京大学学报( 医学版) J O UR N A L O F P E K I N G U NI V E R S I T Y( H E A L T H S C I E N C E S ) V o 1 4 7 N o 4 A u g 2 0 1 5 6 9 7 维生素 D受体基 因多态性与慢性牙周炎的 相关性 曹晓静 ， 和璐 ， 孟焕新 ， 李蓬 ， 陈智滨 ( 北 京大学 口腔医学院 口腔医院牙周科 ， 北京1 0 0 0 8 1 ) 论 著 摘要目的： 探讨中国汉族维生素 D受体( v i t a m i n D r e c e p t o r ， V D R) 基因多态性与慢性牙周炎的关系。
2、方法： 选 取 1 0 5例轻 中度慢性牙周炎和 8 5例重度慢性牙周炎患者， 采集口腔颊黏膜拭子， 提取 D N A， 应用基质辅助激光解 吸电离飞行时间质谱技术( ma t r i x a s s i s t e d l a s e r d e s o r p t i o n i o n i z a t i o n t i me o f - fl i g h t ，M A L D I T O F ) 检测 V D R基因的多 态性。结果： 在受检总人群及女性患者中， r s 1 5 4 4 4 1 0的 A等位基因及 A A+A G基因型在重度牙周炎组检出率高于 轻 中度组( 总人群 ：
3、P= 0 0 0 6， 0 0 0 7 ； 女性患者 ： P= 0 0 0 1 ， 0 0 0 1 ) ； r s 7 3 1 2 3 6的 C等位基因及 C C+c T基因型在重 度牙周 炎组 检 出率 高 于轻 中度 组 ( 总人 群 ： P=0 0 0 3 ， 0 0 0 4 ； 女 性 患者 ： P 14 0岁。共纳入 1 9 0人为研究对象 。 排除标准 ： ( 1 ) 拒绝牙科检查者或者不能配合 完成数据采集者 ； ( 2 ) 口内有多数不 良修复体影 响 检查者 ； ( 3 ) 半年内有过活动性心绞痛 、 心梗或脑血 管病者 ； ( 4 ) 做过牙周系统治疗者 ； ( 5 ) 3
4、个月 内连 续服用抗生素一周者 ； ( 6 ) 伴有其他 全身病 ( 如 肾 炎、 外周血管血栓等) 者 。 本研究开始前获得北京大学生物医学伦理委员 会审查批 准 ( I R B 0 0 0 0 1 0 5 2 - () 5 1 0 6 ) ，所有研究对象 包括患者和健康人均签署知情同意书。 1 2 检查内容及分组 所有受检者接受 问卷调查 ， 内容 包括 ： 一 般情 况、 全身疾病情况、 牙周病症状及 口腔卫生 习惯 ， 生 活习惯 以及服用药物情况等； 检查身高、 体重、 腰臀 围、 血压 ， 以及心电图、 超声 、 血液生化等。 牙周检查 由一名检查者完成 ， 检查者不知道患 者的全
5、身情况， 所有数据由助手记录。在此之前检 查者已完成 了牙周指标的 自身一致性检验以及与标 准检查者的一致性检验 。 使用 Wi l l i a ms 刻度探针检查每颗牙齿的颊侧近 中和舌侧远 中两个 位点 ， 第三磨牙及有大块牙石无 法检 查 的牙 齿 除外 。检 查 指 标 包 括 ： 菌 斑 指 数 ( p l a q u e i n d e x ， P L I ， S i l n e s s& L o e ， 1 9 6 4) 、 出血 指数 b l e e d i n g i n d e x ， B I ， M a z z a ， 1 9 8 1 ， B I 2的位点均记 为 B O
6、 P ( +) ( b l e e d i n g o n p r o b i n g ) ； 探诊深度 ( p r o b i n g d e p t h ， P D) 、 附着丧失( a t t a c h m e n t l o s s ， A L ) 和全 口缺失牙数 ， 然后采集颊黏膜拭子。 牙周炎程度分类标准参考美国牙周病学会与疾 病控制与预 防中心 ( C e n t e r s f o r D i s e a s e C o n t r o l a n d P r e v e n t i o n ， C D C) 牙周病调查工作组制定的标准l l ： ( 1 ) 重度牙周炎 ：
7、 至少不 同牙上的不相邻 的 2个邻 面位 点 A L6 m m， 且至少 1个 邻 面位点 P D5 m m； ( 2 ) 中度牙周炎 ： 至少不 同牙上 的不 相邻的 2 个邻面位点 A L 4 m m， 或至少不 同牙上不相邻的 2 个邻面位点 P DI5 m m； ( 3 ) 无或轻度牙周炎 ： 除外 以上两种情况。本研究人群分为两 组 ： 重度牙周炎 组和轻 中度牙周炎组 。 1 3 样本采集和 D N A提取 颊黏膜拭子采集方法 ： 用消毒棉签在单侧颊黏 膜同方 向旋转涂擦 约 1 01 5 S ， 于紫外线 消毒 3 0 m i n的超净台内室温 自然干燥过夜 ， 密闭后 一 2
8、 o o C 保存 。 D N A的提取 ： 采用 口腔拭子基 因组 D N A提取 试剂盒( T I A N G E N) 按 照说 明书从颊拭子 中提取 总 基因组 D N A， 采用 紫外分光 光度计测 定浓度 和纯 度 ， D 2 6 0 D 2 8 0 在 1 51 7， 4 o C保存 。 1 4 V D R基因型检测 相关 S N P s 基因型鉴定是 由上海邃志生物科技 有限公 司利用美 国 S e q u e n o m公 司 的 M a s s A R R A Y 系统完成 ， 所有需要分型的 D N A进行 P C R扩增 ， 反 应条件 ： 9 4 1 5 m i n
9、； 9 4 2 0 S ， 5 6 o C 3 0 S ， 7 2 l m i n ， 共 4 5个循环 ； 最终 7 2 3 ra i n 。P C R扩增后 ， 针对 单 核 苷 酸 多 态 性 ( s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m s ， S N P ) 进行单碱基延伸反应 ， 9 4。 【 =3 0 S ； 9 4 5 S ， 5 2 5 S ， 8 0 c I =5 S 5个循环 ， 共 4 O个循环 ； 最 后 7 2 q C 3 m i n 。利用基质辅助激光解 吸电离 飞行 时间质谱 ( m a t
10、r i x a s s i s t e d l a s e r d e s o r p t i o n i o n i z a t i o n t i m e o f - fl i g h t ， MA L D I T O F ) 对最终 的分型产物进行 分析 。r s 7 3 1 2 3 6上 游 引物 A C G T T G G A T G T F C T T C T C T A T C C C C G T G C C ， 下游 引物 A C G 1 T I 、 G G A T G T r G G A C A G G C G G T C C T G G A T ， 单碱基延伸 引物 t G
11、 G T C C T G G A T G G C C T C； r s 1 5 4 4 4 1 0 上 游 引 物 A C G TF G G A T G T A G A T A A G C A G G G T r C C T G G， 下游引物 A C G T T G G A T G A G C c c A G 1 _ r c A c G C A A G AG， 单碱基延伸引 物 A G C c T G A G T A T T G G G A A T G 。 1 5 统计学分析 曹 晓静 ， 等维生素 D受体基 因多态性与慢性牙周炎的相关性 6 9 9 使用 E p i l n f o 6进行
12、双平行数据录入并核对 ， 用 S P S S 1 6 0统计软件进行分析。计量资料 ( 年龄等 ) 采用均数 4 - 标准差表示 ， 两两 比较采用两组样本的 t 检验。对不符合正态分布的计量资料 ， 采用 中位数 ( 最大值 ， 最小值) ， 两两 比较采用秩 和检验。计数 资料( 性别 、 吸烟、 等位基 因及基 因型分布频率等 ) 采用百分 比表示 ， 用成组设计 四格表资料的卡方检 验进行比较。关联强度采用 比值 比( o d d s r a t i o ， O R) 和 9 5 可信 区间( 9 5 c o n fi d e n c e i n t e r v a l s ， 9 5
13、 c I ) 表示 。连锁不平衡分析 ： 采 用拟 和优度卡方检验分 析群体的基 因型， 观察筛选 的 S N P s位点 的基 因型 分布 是 否符 合 H a r d y - We i n b e r g平衡 ( H a r d y We i n b e r g e q u i l i b r i u m， H WE ) 。 2结 果 2 1 人 口学资料 、 血清生化指标和牙周指标的比较 共纳入接受 口腔 检查 者 1 9 0例 ， 其 中男 性 9 0 例 ， 女性 1 0 0例 ， 平均年龄 6 2 ( 4 1 7 8 ) 岁 ， 全部为范 围与程度不 同的慢性牙周炎 患者。牙周炎轻
14、 中度 组 1 0 5例 ， 男 4 2例 ， 女 6 3例 ， 平均年龄 6 1 ( 4 17 8 ) 岁 ； 重度组 8 5例 ， 男 4 8例 ， 女 3 7例 ， 平 均年 龄 6 2 ( 4 2 7 8 ) 岁 。轻 中度组 和重度组在年龄 、 是 否吸 烟、 高 血压 、 2型糖 尿病 ( t y p e 2 d i a b e t e s me l l i t u s ， T 2 D M) 、 腰臀比、 体重指数 ( b o d y m a s s i n d e x ，B MI ) 、 空腹 血 糖 ( f a s t i n g b l o o d g l u c o s e
15、 ， F B G) 、 餐 后 血 糖 ( p o s t p r a n d i a l b l o o d g l u c o s e ，P B G) 、 C反应 蛋 白( C r e a c t i v e p r o t e i n ，C R P ) 、 甘油三酯( t r i g l u c e r i d e ， T G) 、 低密度脂蛋 白( 1 o w d e n s i t i y l i p o p r o t e i n ， L D L ) 和 B O P 方面差异均无统计学意义 ( P0 0 5 ) 。轻 中度组 女性患者 比例显著高于重度组 ( P= 0 0 2 4 ) ， 总胆 固 醇 ( t o t a l c h o l e s t e r o l ， T C， P= 0 0 1 2 ) 和高密度脂蛋 白( h i g h d e n s i t y l i p o p r o t e i n ，H D L ) 也显 著高于重度 组( P= 0 0 1 8 ) ， P L I 、 P D、 B I 和 A L均显著低于重度 组 ( P 0 0 5 ) 。 V D R r s 1 5 4 4 4 1 0的基因型 A A+A G和 G G检出 分别为 1 9例( A A 1例 、 A
