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1、ATP 荧光仪原理、使用和注意事项荧光仪原理、使用和注意事项一一 ATP荧光仪荧光仪原理：原理：1 ATP（三磷酸腺苷）是活细胞能够直接利用的能量物质，它是一种有机分子，存在于所有的有机物中，（三磷酸腺苷）是活细胞能够直接利用的能量物质，它是一种有机分子，存在于所有的有机物中， 多数食品本身也都含有一定量的多数食品本身也都含有一定量的 ATP，因此检测，因此检测 ATP 可以作为判断是否洁净的指标。可以作为判断是否洁净的指标。 2 ATP 荧光仪与荧光仪与 Ultrasnap 配合使用，采用生物发光技术检测残留的配合使用，采用生物发光技术检测残留的 ATP 以作为表面清洁度的指标。表以作为表面
2、清洁度的指标。表 面面 ATP 的存在表明表面没有充分清洗，有滋生细菌的可能。的存在表明表面没有充分清洗，有滋生细菌的可能。 3 ATP 荧光仪只能检测表面存在的总荧光仪只能检测表面存在的总 ATP，但它不能区分，但它不能区分 ATP 是来自于微生物产生的亦或是因未充分清是来自于微生物产生的亦或是因未充分清 洗而残留在表面上的，所以不能直接将洗而残留在表面上的，所以不能直接将 systemSURE II ATP 荧光仪测定的荧光仪测定的 RLU 读数与标准平板计数相读数与标准平板计数相 对比。但是，对比。但是，ATP 水平与微生物数目有着密切的相关性：水平与微生物数目有着密切的相关性： 与平板
3、计数的相关性为与平板计数的相关性为 8090，但不会达到，但不会达到 100； 没有统计上的显著差异；没有统计上的显著差异；ATP 与与 CFUs 间的相关性表明间的相关性表明 ATP 的监控可对表面的监控可对表面/机器是否达到运转所要求的洁净度做出快速判机器是否达到运转所要求的洁净度做出快速判 断；断； 使用者一旦确定了与之采用的使用者一旦确定了与之采用的 CFUs 水平相对应的水平相对应的 RLU 起始数值，就无需在以后的工作中再进行起始数值，就无需在以后的工作中再进行 大量的微生物检测；大量的微生物检测； 4 ATP 荧光仪采用化学反应检测荧光仪采用化学反应检测 ATP，用，用 ATP
4、拭子采集标本。拭子采集标本。ATP 拭子被缓冲液浸湿，这样有助于从拭子被缓冲液浸湿，这样有助于从 干燥或湿润的表面提取生物物质（干燥或湿润的表面提取生物物质（ATP） 。拭子也含有一种可以冲破生物膜的试剂，使其下可能存在的生。拭子也含有一种可以冲破生物膜的试剂，使其下可能存在的生 物体暴露出来。标本采集后，拭子应浸泡在能将细胞内物体暴露出来。标本采集后，拭子应浸泡在能将细胞内 ATP 释放出来的容剂中。而后细胞内部释放出的释放出来的容剂中。而后细胞内部释放出的 ATP、以及拭子从设备表面抹取的、以及拭子从设备表面抹取的 ATP 再和再和 ATP 拭子独特的液体试剂一起反应。拭子独特的液体试剂一
5、起反应。 5 ATP 拭子独特的液体试剂含有两种萤火虫酶拭子独特的液体试剂含有两种萤火虫酶-荧光素和荧光素酶，虫荧光素和虫荧光素酶在荧光素和荧光素酶，虫荧光素和虫荧光素酶在 ATP 存在存在 的条件下会发光。发出的光可由的条件下会发光。发出的光可由 ATP 荧光仪进行检测。检测的发光量与荧光仪进行检测。检测的发光量与 ATP 的总量成正比。数值越高，的总量成正比。数值越高， 表明表明 ATP 的量越多，也就意味着表面的残留物越多。荧光仪以的量越多，也就意味着表面的残留物越多。荧光仪以 RLU（相对光单位）数值显示结果。在（相对光单位）数值显示结果。在 ATP 拭子中发生的拭子中发生的 ATP
6、反应所产生的光以光子的形式发散出来。光子是微小的能量束，也是光的基本单反应所产生的光以光子的形式发散出来。光子是微小的能量束，也是光的基本单 位。位。ATP 荧光仪对这些光子进行检测后直接以荧光仪对这些光子进行检测后直接以 RLU 数值的形式显示出来。数值的形式显示出来。SystemSURE II 检测的光子数检测的光子数 量越多，量越多，RLU 的数值就越大。因此这种线性比例使得人们很容易在洁净与不洁表面之间做出判断。的数值就越大。因此这种线性比例使得人们很容易在洁净与不洁表面之间做出判断。 （备注： 荧光仪检测的是总的ATP量，这些ATP来自细菌、酵母菌和霉菌体内以及食品加工设备表面的食物
7、残渣 中。所以RLU读数与微生物菌落形成单位（CFU）并不相同。由于荧光仪检测总ATP，它不能分辨其显 示的RLU读数是微生物体内的ATP检测值还是残留物中的ATP检测值，或者是两者的结合。因此不能 在ATP/RLU数值和标准平板计数之间进行比较。 ）二二ATP荧光仪使用：荧光仪使用：ATP 含有独特的高灵敏度液态稳定一体化试剂。检测物体表面上的细菌或其它微生物以及食物残留物含有独特的高灵敏度液态稳定一体化试剂。检测物体表面上的细菌或其它微生物以及食物残留物 中所含的总中所含的总 ATPATP 活性，给出快速全面的洁净检测结果。活性，给出快速全面的洁净检测结果。 1 1 检测仪器检测仪器：（：
8、（备注：备注：试剂为公司研发的试剂为公司研发的，测试时以测试时以 HygienaHygiena 仪器为基准，来确定试剂活性，没仪器为基准，来确定试剂活性，没 有任何问题后，才可以使用本公司仪器来进行检测有任何问题后，才可以使用本公司仪器来进行检测ATPATP 的配制：母液浓度的配制：母液浓度1010-9-9mol/mLmol/mL 逐渐向下稀释逐渐向下稀释 6 6 个梯度个梯度 1010-10-10mol/mLmol/mL、1010-11-11mol/mLmol/mL、1010-12-12mol/mLmol/mL、1010-13-13mol/mLmol/mL、1010-14-14mol/mLm
9、ol/mL、1010-15-15mol/mLmol/mL，ATPATP 稀释液为稀释液为 无菌去离子水无菌去离子水）第一步：第一步：仪器最低灵敏度的测试（试剂反应体系为（试剂反应体系为 300uL300uL 发光物质：发光物质：50uL1050uL10-15-15mol/mLmol/mL ATPATP 标准溶标准溶液）液）方法：取一只检测试剂棒，将方法：取一只检测试剂棒，将 300uL300uL 发光试剂注入检测管底部，使用微量移液器吸取发光试剂注入检测管底部，使用微量移液器吸取 50uL1050uL10- -1515mol/mLmol/mL ATPATP 标准溶液注入试管，轻晃试剂棒标准溶液
10、注入试管，轻晃试剂棒 3 3 次，以便混匀溶液，将试剂棒放入仪器进行检测。次，以便混匀溶液，将试剂棒放入仪器进行检测。 备注：备注：ATP10ATP10-15-15mol/mLmol/mL 浓度的发光值是仪器和试剂质量最重要的指标之一，直接反应出仪器和试剂浓度的发光值是仪器和试剂质量最重要的指标之一，直接反应出仪器和试剂 的精确性及产品是否可以使用。的精确性及产品是否可以使用。测试时以测试时以 HygienaHygiena 仪器为基准，仪器为基准，HygienaHygiena 光值一般在光值一般在 40-60RLU40-60RLU 之间，我之间，我 公司仪器为公司仪器为 HygienaHygi
11、ena 光值上下浮动光值上下浮动 1515 左右。左右。第二步：第二步：仪器重复性的测试（试剂反应体系为（试剂反应体系为 300uL300uL 发光物质：发光物质：50uL1050uL10-14-14mol/mLmol/mL ATPATP 标准溶液）标准溶液）方法：同第一步，重复操作三次。方法：同第一步，重复操作三次。测试时以测试时以 HygienaHygiena 仪器为基准，仪器为基准，HygienaHygiena 及我公司仪器光值一般及我公司仪器光值一般 在在 350-550RLU350-550RLU 左右。左右。 备注：备注：对任何仪器和试剂来说重复性都是最重要的指标。对任何仪器和试剂来
12、说重复性都是最重要的指标。第三步：第三步：仪器相关线性的测试2 2 实际检测实际检测：（试剂为：（试剂为 UltrasnapUltrasnap ATPATP 拭子拭子） 第一步：取标本第一步：取标本 （拭抹表面以获取标本。如需获得清洗水溶液标本，则将棉拭子浸入水中（拭抹表面以获取标本。如需获得清洗水溶液标本，则将棉拭子浸入水中 3 3 到到 4 4 秒钟。秒钟。 第二步：进行检测第二步：进行检测( (将拭子插入检测管，用将拭子插入检测管，用拇指和中指捏住球管，从吸阀处折断。轻挤球管两次，拇指和中指捏住球管，从吸阀处折断。轻挤球管两次， 挤出球管内液体。挤出球管内液体。) ) 第三步：测量结果第
13、三步：测量结果( (将检测管放入发光仪中，盖上盖子，开始检测。将检测管放入发光仪中，盖上盖子，开始检测。) ) 概括的说：概括的说： 拭抹、崩断、挤压拭抹、崩断、挤压 ！三三 注意事项：注意事项：1 1 反复冻融反复冻融：反应体系中有酶的存在，所以反复冻融后活性有所降低。反应体系中有酶的存在，所以反复冻融后活性有所降低。 （以（以 1010-14-14mol/mLmol/mL 浓度的浓度的ATPATP 为标准，试剂为本公司试剂）为标准，试剂为本公司试剂） 方法：取方法：取 5mL5mL 发光试剂，融化后，取发光试剂，融化后，取 300uL300uL 测试，将剩余试剂放回测试，将剩余试剂放回-2
14、0-20，彻底冷冻后再次融化，彻底冷冻后再次融化 测试，反复测试，反复 1010 次。次。次数次数1 12 23 34 45 56 67 78 89 91010 RLURLU 值值480480442442394394376376344344320320300300258258159159140140结论：试剂的保存条件在结论：试剂的保存条件在-20-20，但运输途中难免会使试剂发生冻融现象，冻融会使所有酶制剂，但运输途中难免会使试剂发生冻融现象，冻融会使所有酶制剂 发生活性的降低，我们所做的是尽量使其在合理冻融次数内，活性可以保持在一定范围内，考虑到实际发生活性的降低，我们所做的是尽量使其在合理冻融次数内，活性可以保持在一定范围内，考虑到实际 运输及使用情况，试剂在反复冻融条件下进行测试，确定失效期限（试剂失效标准：测试数值降低运输及使用情况，试剂在反复冻融条件下进行测试，确定失效期限（试剂失效标准：测试数值降低 ） 为反复冻融不超过为反复冻融不超过 次。次。 2 2 44保存期：保存期：
