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1、食用菌学报201017(2)：80章编号：10059873(2010)02008005 两种桑黄发酵产物的抗肿瘤活性对比 郭佳 ，宋荣 ，包海鹰“，崔宝凯 ( 吉林农业大学中药材学院，吉林长春130118；。北京林业大学微生物研究所，北京100083) 摘 要：选用瓦尼木层孔菌(酵产物进 行抗肿瘤体内试验，测定其对H 荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指数、免疫因子含量和生存率的影响。结果表明， 火木层孔菌和瓦尼木层孔菌发酵产物高、低剂量组(1 000 mg00 mg对肿瘤具有一定抑制作用，其 中瓦尼木层孔菌发酵产物低剂量组(500 mg瘤效果最佳，其抑瘤率为587。火木层孔菌和瓦尼木层 孔菌发酵产物高
2、、低剂量组均可提高小鼠血清中自细胞介素2(含量、延长小鼠的生存 期，但是对血清中肿瘤坏死因子(a，a)含量的影响作用不显著。 关键词：火木层孑尼木层孔菌；抗肿瘤 桑黄，俗称桑黄菇、桑臣、桑耳等，属于多孔 菌科木层孔菌属真菌，是一种珍贵的大型药用真 菌桑黄作为药用真菌最早记载于本草纲 目，传统中医认为桑黄性甘、平，味苦、辛，归肝、 膀胱经，用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭 经、脾虚泄泻等 。现代药理学研究表明，桑黄 在抗癌、增强免疫 以及抗肝纤维化等方面效 果显著 j。尤其是抗肿瘤方面，桑黄对肿瘤生 长具有显著的抑制作用，并可增强荷瘤小鼠 的细胞免疫功能1 。是目前国际公认的抗肿瘤 最好的
3、大型真菌之一，无任何毒性作用，是一种 极具开发价值的珍贵药用真菌 。目前我国桑 黄所涉及的种类大约有20种，本研究选择的是 生长在东北地区长白山的两个种，即火木层孑瓦尼木层孔菌(笔者对这两种桑黄发酵产物的抗肿瘤 活性进行了研究，并对其抑瘤机理做了初步探 讨，旨在为桑黄的进一步开发利用奠定基础。 1材料与方法 11菌种与培养基 火木层孑瓦尼木层孑P实体采自吉林省长白山，经吉林 农业大学图力古尔教授鉴定，由本实验室分离、 纯化菌种并保存，菌种编号分别为液体培养基：蔗糖3、蛋白胨03、酵母粉 03、硫酸铵02、磷酸二氢钾01、硫酸镁 005。 12实验动物 清洁级昆明种小鼠120只，雌性，体重18
4、22 g，购自吉林大学实验动物中心(合格证编号： 20030001)；腹水型H 。荷瘤小鼠购自吉林省肿 瘤医院。 13主要试剂与仪器 5一氟尿嘧啶(5自吉林省肿瘤医院； 试剂盒购自上海锐聪实验 室设备有限公司；酶标仪(美国 14桑黄菌丝培养和发酵产物制备 向装有50 250 人4块05 小的活化后的斜面 母种块，25，120 r养5 d，培养物作为 液体菌种用于下步实验。 500 按20的量分别接人不同桑黄的液体菌种，于 30、130 rd，然后将菌丝体连同发 酵液一起放入恒温烘箱内35加热24 所得干燥物用研钵磨成粉末，即得火木层孔菌发 收稿日期：20091230原稿；20100412修改稿
5、 基金项目：国家自然科学基金项目“药用木腐真菌桑黄资源及其抗肿瘤活性的研究”(编号：30870013)的部分研 究内容 作者简介：郭佳(1982一)，女，吉林农业大学中药材学院在读硕士，主要从事火木层孔菌化学成分和抗肿瘤作用的研究。 本文通讯作者E262期 郭佳，等：两种桑黄发酵产物的抗肿瘤活性对比 81 酵物和瓦尼木层孔菌发酵产物。 分别取两种发酵产物粉末，用生理盐水配成 1 000 mg00 mg25 mg度的5理盐水为溶剂)为阳性对照。 15桑黄发酵产物体内抑瘤实验 151荷瘤小鼠模型制备 取接种7 d、生长良好的腹水型H 荷瘤小 鼠，颈椎脱臼处死，无菌抽提腹水，用生理盐水稀 释至浓度为
6、110 个每鼠 01 常饲 喂24 152实验动物分组及给药方式 120只小鼠被随机分成不同的12个组，每组 10只。阴性对照组以生理盐水灌胃，阳性对照组 以5有4组分别以两种不同 浓度的两种桑黄发酵物灌胃给药，各组给药体积 均为02 0 g。连续给药7 d，每天1次。 将12组小鼠平均分为两批，第一批用于对 抑瘤率、免疫器官指数和免疫因子含量的检测， 第二批用于观察小鼠生存期，计算生存率。 153抑瘤率、脾指数和胸腺指数检测 第一批小鼠末次给药(即第8天)24 称重，之后摘眼球取血、处死小鼠，摘取瘤块、 脾脏和胸腺，分别称重，计算抑瘤率、脾指数、胸 腺指数。 肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重一给
7、药组平 均瘤重)对照组平均瘤重X 100 脾指数=脾的重量(体重(g) 胸腺指数=胸腺的重量(体重(g) 154 、含量和白细胞数检测 第8天小鼠摘眼球取血051 抽取 20肚3的冰醋酸稀释20倍，轻轻摇匀 后使用细胞计数器进行白细胞计数。将剩余血 液离心(2 000 g，20 取血清测NFa 含量。，测法，操作步骤按试剂盒说明进行。加入终止 液后，轻轻混匀，在酶标仪上450 标准品曲线，计算样品的和155生存时间检测 将第二批小鼠连续给药30 d，观察每组小鼠 生存期，计算生存率。 16统计数据的处理 所有数据采用统计软件进行处 理，实验数据均采用均数加减标准差(xs)表示。 2结果与分析
8、21桑黄发酵产物对H：荷瘤小鼠的抑瘤作用 两种桑黄发酵产物体内抑瘤结果如表1所 示，两种桑黄发酵产物高、低剂量组对肿瘤均具 有一定抑制作用，抑瘤率均大于30，其中瓦尼 木层孔菌发酵产物低剂量组的抑瘤效果最佳，其 抑瘤率为587，与588) 相近。 表1 火木层孔菌和瓦尼木层子荷瘤小鼠的抑瘤率 22 据代表10只小鼠平均值S生理盐水；与对照组相比： p005，“p001 0 D；p005，一pO01 22桑黄发酵产物对瘤小鼠免疫器官的影响 从表2可以看出，与对照组相比，两种发酵 产物高、低剂量组的脾指数均有不同程度的增 加，其中火木层孔菌发酵产物低剂量组具有显著 差异(pO05)，瓦尼木层孔菌发
9、酵产物高剂量 组具有极显著差异；两种发酵产物高、低剂量组 82 食用菌学报 第17卷 的胸腺指数均有所增加，其中瓦尼木层孔菌发酵 产物高、低剂量组均具有显著差异；两种发酵产 物高、低剂量组的白细胞数均有明显增加，且除 瓦尼木层孔菌发酵产物低剂量组外均具有极显 著差异(p001)。而5 指数、胸腺指数和白细胞数均低于对照组。 与5木层孔菌和瓦尼木层孔菌 发酵产物高、低剂量组的脾指数、胸腺指数和白 细胞数均具有显著性差异，其中个别组具有极显 著差异。该结果表明，火木层孔菌和瓦尼木层孔 菌发酵产物对H。 荷瘤小鼠免疫器官有一定的刺 激作用。 表2 生理盐水、5木层孔菌和瓦尼木层孔菌的发酵产物对免疫器
10、官的影响 on 22 据代表10只小鼠平均值对照组相比： p0p(001；与5一p005，p001 0 D；PSP005， P001； p005， p001 23桑黄发酵产物对H：荷瘤小鼠细胞因子的 影响 结果如表3所示，与对照组和5两种发酵产物高、低剂量组均能增加H。荷瘤小 鼠血清中的含量，其中瓦尼木层孔菌发酵产 物高剂量组能显著提高的含量；而各组对 H。 荷瘤小鼠血清中o【的含量没有明显 影响。 表3 生理盐水、5一木层孔菌和瓦尼木层孔菌的发酵产物对细胞因子的影响 11 22 据代表1D；对照组相比： p005；与5p005 0 D；p005；pO05 24桑黄发酵产物对H ：荷瘤小鼠生存
11、时间的 影响 两种发酵产物对H。荷瘤小鼠生存时间的影 响如表4所示，5一，而与5种发酵产物高、低剂量组 的生存率均高于对照组，其中火木层孔菌发酵产 物低剂量组能明显提高小鼠的生存率，其30 率高达90。 第2期 郭佳，等：两种桑黄发酵产物的抗肿瘤活性对比 83 3讨论 表4不同处理对小鼠生存率的影响 22 每组包括10只小鼠；0 S黄的抗肿瘤功能最早被日本学者研究表 明，桑黄野生子实体的提取物对小鼠肉瘤s 。的 抑制率为967，对小鼠艾氏癌的抑制率为 87，其具有抗肿瘤作用的主要成分是桑黄子实 体中的多糖DI,发现桑黄中含有 的多糖对肿瘤的生长和转移均有抑制作用。其 主要是通过增强机体的免疫功能来杀伤肿瘤细 胞，从而达到抗肿瘤的目的，而且无毒副作用口 。 本实验对桑黄发酵产物抗H 肿瘤活性进行了研 究，结果表明桑黄发酵产物具有和子实体提取物 相同的药理活性，桑黄的发酵产物对H。肿瘤有 较强的抑制作用。 目前，大多数学者将桑黄归为火木
