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1、海带粉碎成粉， 过筛称取 250g 的海带粉装入 500ml 的大圆底烧 瓶，加入石油醚（乙醇、乙醚）用微波萃 取法提取脂肪酸，500ml 大圆底烧瓶称重固液比分别为 1：6，1：7，1：8，1：9，1：10 微波功率 500W，提取时间 5min，温度 50抽滤滤液浓缩60滤渣继续提取，提取 3 次固液比分别为 1：6，1：7，1：8，1：9，1：10 微波功率 500W，提取时间 5：00，温度 50称重集中收集，一起 浓缩称 100ml 的空锥形瓶，称取 5g 的样品加入到 100ml 的锥形瓶 中加 10mL0.5mol/L 氢氧化钠 乙醇溶液，在瓶口上插一小漏 斗，漏斗上再盖一块玻璃
2、沸水加热 1 小 时反应完成后移去漏斗，继续加热除 去乙醇。再加人 10mL 蒸馏水，加 热，使皂化物溶解成混合液。加浓盐酸(约 5mL)使之 呈酸性加热，可见脂肪 酸呈油状浮于上层时， 用分液漏斗分开上下层上层用热水重复洗涤三次，每次 用水 100m1，除去混杂于脂肪中 的无机盐、甘油、盐酸等，静置 澄清，上清液即为脂肪酸加入 10ml，0.5mol/L 的硫酸，在瓶 口上插一小漏斗，漏斗上再盖一块 玻璃加热 1 小时加人 10mL 蒸馏水油状物分层，用分液漏斗分开上下 层，上次用热水重复洗涤三次，洗 去甘油、硫酸等，静置澄清，上清 液即为脂肪酸称量两个 100ml 圆底烧 瓶中加入 2g
3、经预 处理的样品 1加入 25ml,0.5mol/l 的 KOH-CH3OH,25ml 石油 醚加热 60， 处理 30min冷却 加入甲醇 7ml 和3-4 滴 BF3-乙醚冷却后加入 25ml 饱和 NaCl 溶液至 中性，取上层清 夜，称重加入为处理的 2g 未经预处理的样品加入 25ml,10：1 的浓硫酸-CH3OH加热 60， 处理 30min加入 2ml 石油 醚再加蒸馏水至瓶颈，取出上清，再用 2ml石油醚洗多次，合并上清，放入 小瓶中待测，称重参考文献：1寇秀颖，于国萍. 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究. 食品研究与开发,2005, 26(2),起止页码2 闰玉霞, 李平林,
4、蔡扬鹏, 李八方. 利用 G C 一 M S 测定不同甲醋化条件下沙蜚脂肪酸组成. 中国海洋药物杂志 ，2010，第 29 卷第 6 期3 何勇，彭莺，黎军. 硫酸催化甲酯化气相色谱法测肥皂产品中的脂肪酸分布及总脂肪物含量. 顺德职业技术学院学报,2011,7: 第9 卷第 3 期4 曾虹燕,李昌珠,蒋丽娟. 用 GC-MS 分析不同方法提取的茶油脂肪酸.热带亚热带植物学报 ，2005,13(3):271-2745 蔡心尧, 尹建军. 海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法.无锡轻工大学学报 ，1999，9：第 18 卷第 5 期6 罗盛旭，梁振益，陈佩. 海带脂肪酸的提取及其成分分析.海南大学学报自
5、然科学 ，2005，9：第 23 卷第 3 期7 冯小峻，邓舟，陆慧宁等.GN 海带新品系脂肪酸的气相色谱一质谱联用分析. 中山大学学报 ，2010，11：第 49 卷第 6 期8 纪丽丽，宋文东，刘建秀. 红树林植物露兜中挥发油和脂肪酸的测定. 现代食品科技, 2008:V0124，No69 朱晓楠,魏士刚等. 微波辅助提取一气相色谱质谱联用测定肉桂中的挥发油. 高等学校化学学报 ，2009，7：V0130，No7，1300一 13041.脂肪化学名甘油三酯，脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸
6、、多不饱和脂肪酸。 脂肪在多数有机溶剂中溶解，但不溶解于水。2.多不饱和脂肪酸指含有两个或两个以上双键且碳链长度为 1822个碳原子的直链脂肪酸。通常分为 omega3 和 omega6，在多不饱合脂肪酸分子中，距羧基最远端的双键在倒数第 3 个碳原子上的称为 omega3；在第六个碳原子上的，则称为 omega63.单不饱和脂肪酸,在分子结构中仅有一个双键；多不饱和脂肪酸,在分子结构中含两个或两个以上双键脂肪转化为脂肪酸的方法：1.脂肪在碱性溶液底下水解生成脂肪酸钠，然后加入硫酸，溶于水，不溶于乙醇。无水物是白色晶体或粉末，浓缩把乙醇蒸出，得到脂肪酸脂肪酸提取：称 200g 的海带粉，加入固
7、液比为 1:5 的乙醇在 50,500W 的条件下用微波法提取，抽滤，取滤液静置，滤渣再加入 1:4 的乙醇溶剂进行二次提取，提取条件为 50,500W 的条件下进行,提取后抽滤，静置至一段时候后,充分析出白色固体后抽滤进行浓缩,在浓缩前可适当加入甲醇,再经行浓缩现象:甲酯化：酸化甲酯化1.加入正己烷 4 ml，浓度 2 mol 的氢氧化钾一甲醇溶液 2 ml，剧烈振摇 12 min，30 度水浴反应 20 min。加入三氟化硼-甲醇溶液，3 000 rmin 离心 10min。取上清液待测。其中三氟化硼法能利用快速皂化使脂肪酸盐直接转化成脂肪酸甲酯，减少酸化提取手续2.取 13 g 浸膏，加
8、 05molLKOH-CH3OH 溶液 25 mL，苯一正己烷(体积比为 1：1)溶液 25 mL，室温下振荡 5min 后，加热至 60，处理 20 min，冷却后，加入饱和 NaCI 溶液 25 mL，静置分层后取上层清液进行 GCMS 分析。3.样品 5 g ，于小烧杯中，加入乙醚 16.7mL，正己烷 8.3mL，使脂肪完全溶解后转入 250mL 容量瓶，加入甲醇 25mL，再加入0.8mol/L 甲醇-KOH 溶液 25mL，摇匀后静置 10min。加蒸馏水至刻度，吸取上层溶液，待作 GC-MS 分析。气相条件：进样口温度 270，温 100，以 10/min 升到 170保持 1m
9、in 后，以 3/min 升到 250，保持 4min；流速：恒流模式 2.4mL/min，分流进样分流比为 50:1。测定方法：将沙棘油进行氢氧化钾- 甲醇室温酯化法处理后进样分析，进样量 0 . 2L。按气相条件，用 GC-MS 测定样品后得到色谱图。利用气质联用仪所带的标准图谱库的质谱数据进行自动检索，同时根据质谱图及相关文献鉴定出主要色谱峰对应的物质名称，并使用数据处理系统对色谱峰进行面积归一化处理，从而计算出各物质相对含量。加入 3-4 滴 BF3-乙醚溶液，将混合物放置在 70的水浴中加热 3 分钟，冷却后，加入 1ml 正己烷，振摇使甲酯转入正己烷层4.称取 20 mg 提取出的
10、茶籽油于小样品瓶中，加入 15 mL 正己烷溶解油样，摇匀，加入 60“L 乙酸甲酯，摇匀静置 10 min。用移液枪往每个小瓶中加入 100“L 27 mgmL 甲醇钠甲醇溶液，在振荡器上振荡 2 min，然后静置 20 min 以上使甲酯化完全，加入饱和草酸 60L 使甲酯化终止，摇匀静置于一 24冰箱内 20 min。取出，将样液通过无水硫酸钠微柱脱水，用小瓶收集滤液约 12 mL 上机测定。5.取 1ml 样品,加 2N 的甲醇氢氧化钾溶液 0.5ml,然后加 10ml 正庚烷在 120 度的温度下加热半小时就可以直接进样了.也可以用比较复杂的方法进行,样品大约 20 克,无水甲醇 5
11、0ml 左右,加浓硫酸 5ml,在不低于 95 度的水浴中回流六小时以上,然后萃取甲酯.萃取后甲酯用无水乙醇以 1:3 或 1;5 比列稀释后进样即可.6.加入 3ml 的 KOH 甲醇溶液，70水浴加热回流 5min；取出冷却至室温（可用水冷） ，加入 5ml 三氟化硼溶液，70水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入 3ml 正己烷，70水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止 35min，取上层油样 1ml 于试样瓶中，进 GC 分析脂肪酸甲酯化方法的选择。在对食物样品中的反式脂肪酸含量进行分析测定前，需对其甲酯化处理。甲酯化的方法很多，常用的有氢氧化钾一甲醇
12、法、浓硫酸一甲醇法、三氟化硼一甲醇法。氢氧化钾-甲醇法是一种在常温下进行的碱处理方法，其原理是将油脂降解为甘油和脂肪酸，脂肪酸与甲醇结合生成瞻肪酸甲酯。该方法无需冷凝回流，常温下酯化效果好，组分完全分离，适用范围广。可用于分析动植物油脂、食品中油脂、藻类、微生物类脂肪酸，目操作简单。省时省力。加入 5ml 的甲醇,摇 匀,稍微加热至溶解配取 0.5ml 浓硫酸和 2.5ml 的,加入到上述样品中摇匀, 组装回流装置称取 1g 样品加入到 50ml 的圆底烧瓶内,在 60下水浴加热回流,回流时 间为 30min 回流时加入搅拌子充 分搅拌,避光回流冷却后,加入 15ml 的石油醚萃 取,提出上层
13、,下层重复前萃取 步骤称量 100ml 空瓶子重量,合并 上层溶液到 100ml 的圆底烧 瓶内,在 50下水浴浓缩至干, 称重样品点板酸化体积比 1:15 浓硫酸-甲醇溶液0.碱化取样品 1g 加入到 100ml 的圆底烧瓶加入 5ml 的甲醇,摇匀,微 热溶解加入 0.4g 的 KOH 固体 2.5ml 的甲醇 内,搅拌,直至 KOH 固体完全溶解后加 入到 100ml 的圆底烧瓶内,摇匀1mol/L 的 KOH-CH3OH组装回流装置,在 60下水浴回流, 回流 30min,加入搅拌子搅拌,避光回 流冷却至室温,加入 15ml 的石油醚 萃取,提取上层,下层重复前萃取 步骤两次称量 100ml 圆底烧瓶,合并上层液到 100ml 圆底烧瓶,在 50下水浴加热浓 缩至干,称量点板
