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1、实验方法原实验方法原理理质粒 DNA 或重组 DNA 粘附在细菌细胞表面，经过 42C 短时间的热击处理，促进吸收 DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗 菌素的培养基中生长。实验材料实验材料质粒 DNA，重组 DNA试剂、试剂试剂、试剂盒盒LB 培养基，蒸馏水，IPTG，X-gal，氨苄青霉素仪器、耗材仪器、耗材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴，恒温水浴锅，制冰机，恒温摇床，培养皿，超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱实验步骤实验步骤一、实验材料准备一、实验材料准备 1. 器材旋涡混合器，微量移液取样
2、器，移液器吸头，1.5 ml 微量离心管，双面微量离心管架， 干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体 LB-Amp）， 超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。2. 试剂培养基（不加抗菌素），LB 培养基（加抗菌素），无菌 ddH2O，IPTG，X-gal。3. 材料处理无菌 ddH2O，1.5 ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒 （灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用 N,N-二甲基甲酰胺配）。二、操作步骤二、操作步骤1. 事先将恒温水浴的温度调到 42。2. 从-70 超低温冰柜中取出一管（100 l）感受态
3、菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴 510 min。3. 加入 5 l 连接好的质粒混合液（DNA 含量不超过 100 ng），轻轻震荡后放置冰上 20 min。4. 轻轻摇匀后插入 42水浴中 12 min 进行热休克，然后迅速放回冰中，静置 35 min。5. 在超净工作台中向上述各管中分别加入 500 l LB 培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上 37震荡 1 h。6. 在超净工作台中取上述转化混合液 100-300 l，分别滴到含合适抗菌素的固体 LB 平 板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加 40 l 2% X- gal，8 l 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。8. 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在 37恒温培养箱中 3060 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入 37恒温培养箱过夜。9. 在被细菌污染的桌面上喷洒 70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。10. 观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。收起 注意事项注意事项1. 玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。
