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1、河北农业大学硕士学位论文草莓重茬病菌拮抗细菌筛选鉴定及其抑菌机理初步研究姓名：宋玉红申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：曹克强20060612摘要本研究从药用植物材料混配的腐解物和经上述植物材料混合处理3 个月后的草莓重茬土壤中共分离纯化得到4 0 株不同形态的细菌。经平板对峙培养法测定4 0 株待测细菌的拮抗作用，结果表明：只有菌株B s 2 1 对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌这三种病原菌的抑菌带宽度都达到5 m m 以上，且病原菌与拮抗菌之间形成抑菌带的宽度不随时间的推移而显著改变。对B s 2 1 进行鉴定，其形态特征、培养性状以及生理生化特征均与伯杰氏细菌鉴定手册r 第八
2、版) 中描述的枯草芽孢杆菌的特征相符合，因此确定其为枯草芽孢杆菌( 踟c f z 妇fs “6 “如) 。通过对B s 一2 1 的抑菌机制研究表明，B s 2 1 的菌体和代谢产物均有一定的抑菌作用。采用对峙培养法测定了B s 一2 1 的菌体对三种病原菌菌丝的抑制作用，通过显微镜观察，三种病原菌的菌丝的生长均受到抑制，并引起菌丝不同形态的畸形、原生质凝结、内含物外溢等现象：说明B s 一2 1 可能产生多肽类和水解酶类物质。测定了B s 一2 1 不同处理对尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌的分生孢子萌发的影响，结果表明，B s 一2 1 的发酵液滤液、高温杀死菌体的发酵液和发酵液原液对尖孢镰刀菌分生
3、孢子萌发的抑制率分别为3 7 2 7 、4 5 6 9 和6 9 5 6 ，对大丽轮枝菌的分生孢子萌发的抑制率分别为6 2 1 1 、6 1 5 6 和7 2 2 7 ；同时B s 。2 1 发酵液的不同处理都能不同程度地引起尖孢镰刀菌孢予的畸形和萌发形成的芽管产生泡状物；引起大丽轮枝菌的分生孢子的膨大畸形。芽管长度明显低于P D 培养液对照；此外，B s 一2 1 的高温灭菌液对尖孢镰刀菌分生孢子萌发的抑制作用在P _ 0 0 1 水平上高于发酵液滤液，说明B s 一2 1 的代谢产物可能由多种物质组成，且受热后活性有可能增强。通过含药介质法测定了B s 2 1 代谢产物的抑菌活性，结果表明
4、：B s 2 1 的发酵滤液和发酵高温灭菌液的不同稀释比例对三种病原菌菌丝的生长均表现出了一定的抑制作用，且浓度愈高，抑制作用愈强。但对不同病原菌抑制作用差别明显，对立枯丝核菌菌丝生长抑制作用较弱，在稀释比例为1 ：5 时，B s 2 1 发酵滤液和发酵高温灭菌液对其的抑制率分别为2 7 4 9 和1 7 7 8 ；而对尖孢镰刀菌和大丽轮枝菌的菌丝生长抑制作用较强，在稀释比例为1 ：5 时，B s 2 1 发酵滤液对两者的抑制率分别为4 8 5 3 和4 8 9 2 ，B s 一2 1 发酵高温灭菌液对两者的抑制率分别为3 7 3 3 和3 3 9 7 ；同时，B s 2 1 发酵滤液对三种病
5、原菌的抑制效果在总体水平上高于B s 2 1 发酵高温灭菌液，但高温灭菌液仍有较强的活性，说明B s 2 1 的代谢产物中含有具热稳定性的物质。由于拮抗菌B s 2 1 对草莓重茬三种病原菌都具有很好的拮抗作用，具有作为生防制剂的潜力，故对其研制为生防菌剂并加以推广应用做出了初步的研究。本研究初步筛选了B s 2 1 固体发酵适宜的温度、初始含水慧和p H 值条件。研究寝明，三种中药粉末( 重激比1 ：1 ：1 ) 的混合物与嵇杆粉按3 ：2 0 的比例混合作为固体基质，B s 2 1 阻1 0 的接种量接入固体基质，3 4 、8 0 含水量、初始p H l 童7 5 时，枯草芽獭杆菌B s
6、一2 l 的繁殖铯力焱强盛滔蓥数都毫予焚继发酵条辞，同时戆着调查融闯戆不骥嫌长，活菌数也不断增熬。关键谰；拈抗细菌；草莓藤褴病菌；筛选和鉴定；抑制机理；固体发酵S t u d yo n A n t a g o n i s t i cB a c t e n u ma n dI t sI n h i b i t i n gM e c h a n i s m sa g a i l I s tP a t h g e n so f & 耀w b e r 翟歉印掇拄lD l s 穗s eC a n d i d a t e ：S o n gY u h o n gA d v i s o r ：P m C a
7、oK e q i a n gS p e c i a l t y ：P l 赫P a t h o l o g yA b s n 麓c t翔u f t yb a e t e 矗as t f 越n sw e f ei s o 圭a t e df m md e c o m p o s e dm e d i d 玎矗lp l a n tm a t G r 主a l s 柚d娃s a m p l e s 拄e a t e db ym i x e dm e d i c 纽8 lp l 赫m a t e f i a l s O 砖yls 妇i 珏董l 越法珏海溅e 攫e c t的t h r e es t m
8、w b e e r yr c p l a n tp a 山。妒ns t r o n g I y T h ei I l h j b i t i o nz o n et o 肋c 幻，l 船肠捍l ，魏s 口一“掰耐卿D r H 矾a n d 确r “d 嘏“棚妇矗露口ea ns u r p a s s e d5m A n dt h ei I l h 主b i t i o nz o n ew 撼t l ld 撼n O 曲强鬟ea l o 矩w i 睡攮珏e ， n er c s u I t s0 ft h ei d e n t i f j c a t i o nd e m o n s t r a
9、t e dt h a tt h em o I p h o l o 西c a lc h a f a c t c 蠢z a t i o n ，c 1 1 h u r i f l gp a t t e m ，p h y s i o l o g ya n db i o c h e m i c a lc h a r a c t e r i s C i c sw e ma c c 时r d a n 乇w i t ht l l o s oo f 铂e 掇淞艇酾殛d e s 姗姆B e g e 如M 辐8 畦o fD 畦g 黜觚量v eB 溅赫l o g y 簿龋魄E d i t i o n l T h e
10、r e f o r c ，B s 一2 1w a si d o n t i t ! i e da s 舶西舭s 翩扛砸函1 撕0 u 曲s t u d y i l l go nt h ea n t a 9 0 n i s t i cm e c h a I l ：i 锄，t h er e s u l t ss h o w e dl h a tb o mB s 2 1s 耋f a 拯黼di 捻氆e l 糖O l 主z 箍_ 如p r o d u c i o nc a l li 涵濒t 出ep 蕊O g c n s M h 神s p eo b s e r v a t i 衄s h ) w e dt
11、l l a tt l l em y c e l i u mo ft h e 妇e ep a 也o g e 砖c n 瘿神妒a 辩dd i s t o n i 姻，辆撬p r o t 叩l a s ma g 西0 I l l e r a t e da I l dl e 撕n go fc e 吐c o n t e n t sa 靓e r a t e d b ya n t a g o n i s t i cb a d e f i a 鞋s e e m 疆氆皱B s 露l u l ds e e r e t ep o l y p e p t i d ea n dh y d r o l y t i ce
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13、 妊e f e n tt f ；e a m e n t s A n dt h es p o f e sw e r ed e f o n n e d A H t o c l a v e df e 强e n t B s 一2 ls i 辨进c a 辩蛀yi 媳逊i | 翻t 埝n i 蠢越擀嘲攮a l i 嬲o f 懿瑚嘲掰们m 妒D 删胁i nm a r k e dl e v e lc o m p a r e dw i t hf c 撇e n to fB s - 2 1s t e r i l i z e db yf i l 妊a t e I 证d i c a t e dm a t 丑s 一2 1
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15、fs t r a 、v b e r r yr e p l a n td i s e a s ea td i f f b r o n td i I u t i O n s R e s 珏l l s 照o w e d 壤挝b o t 魏f 螽m e 珏th a di n h 鳓i t o r ve f 班sa 主d i f r e n 主1 e v e l st od i 靠研e tp a t h g e n s T 1 l ej h i b i t i o ne 妊毫c tt o 鼬啪托掘s o 融艇i sf e e b l e ，w 撼bi ss 螬o n g 幻鼢靠鼯掰n 均惯芦口州册a n
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