《大肠杆菌的培养》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大肠杆菌的培养（1页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、大肠杆菌种子液的制备大肠杆菌种子液的制备 牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方： 液体培养基液体培养基 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g 氯化钠 5.0g 水 1000ml pH 7.4-7.6 固体培养基在液体培养基的基础上再加入固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.52.0的琼脂的琼脂1 试管斜面与平板的制备试管斜面与平板的制备 （1）称量 按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水 放入烧杯中。 （2）熔化 在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石 棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。将称量好 的 1.8琼脂
2、放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。 （3）调 PH 在未调 PH 前，先用精密 PH 试纸测量培养基的原始 PH，如果偏酸， 用滴管向培养基中逐滴加入 1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用 PH 试纸测 基 PH 直到 PH 达到 7.4-7.6。反之用 1mol/L HCl 进行调节。 （4）分装 将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的 1/5，三角烧瓶的量不超过 1/2 加塞 培养基分装完毕后，在试管口和三角烧 瓶口上塞上棉塞。 （5）包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再 用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、
3、配制日期。 （6）灭菌 将上述培养基以 0.1Mpa,121,25min 高压蒸气灭菌。 （7）倒平板 ，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基 倒制三个平板培养基，冷却。 （8）搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷却至 50左右，将试管口端搁在玻璃棒上， 搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 2 接种大肠杆菌斜面种子接种大肠杆菌斜面种子 (1) 取实验室储备的大肠杆菌 DH-5 种子， 在洒精灯附近，用接种环在已制 备好的斜面上接种上大肠杆菌。(2) 将接种好的斜面放入 37的恒温培养箱子中培养 24h。 3 制备平板种子制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆
4、菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗 下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为 1 倍，10 倍，100 倍和 1000 倍，用 移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶 液 100ul)，然后在 37培养箱中过夜。 （12） 次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的牛肉膏蛋白 胨液体培养基中 37，170r/min 恒温振荡培养 18h 作种子培养液。 其后的实验中，其后的实验中，每次实验前从种子培养液中吸取每次实验前从种子培养液中吸取 2ml 菌液菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，接种于新鲜灭菌的液体培养基中，37，170r/min 恒温振荡培养恒温振荡培养
