《大学论文 一种脂肪组织来源树突状细胞的鉴定及功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大学论文 一种脂肪组织来源树突状细胞的鉴定及功能研究（79页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号三窆2 ：1 2U D C6 1 6 0 0 2编 ! Q 2 9 9 墨Q 里! 垒Q 2 9江。薄大擎硕士学位论文一种脂肪组织来源树突状细胞的鉴定及功能研究I D E N T I F I C A T I o NA N DR E L A T E DF U N C T I o NO FT H EA D I P S O ET I S S U E D E R I V E DD E N D R I T I CC E L L S作者姓名：陈艳红指导教师：王胜军教授小组成员：许化溪教授申请学位：硕士学科专业：免疫学论文提交日期：2 0 1 2 年4 月2 8 日论文答辩日期：2 0 1 2 年6
2、月7 日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2 0 1 2 年6 月2 0 日答辩委员会主席：邵启祥评阅人：独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：臻轴机 uJ 许6 月I 泊学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊( 光盘版)电子
3、杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入中国学位论文全文数据库并向社会提供查询，授权中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社将本论文编入中国优秀博硕士学位论文全文数据库并向社会提供查询。论文的公布( 包括刊登) 授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密1 ：3 。学位论文作者躲豫糊钆 - 1 , , o ，诈( 月I 弓日指导教师签名：M、1 年b 月、了E t江苏大学硕士学位论文摘要目的：在高脂饮食( h i 曲一f a td i
4、e t ，H F D ) 诱导的肥胖小鼠脂肪组织中，发现一群未成熟的、具有分泌促炎症性细胞因子的树突状细胞，并研究这种脂肪组织来源树突状细胞( a d i p o s et i s s u ed e n d r i t i cc e l l s ，A T D C s )的表型及生物学功能。方法：1 采用F I T C 抗小鼠C D ll c 单克隆抗体( m A b ) 对H F D 和正常饮食( n o r m a ld i e t ，N D ) d , 鼠脂肪组织来源的细胞进行染色；应用免疫磁珠法将H F D 小鼠脂肪组织来源或脾脏来源的C D ll c + 细胞进行分选，电镜观察其形态，
5、并采用P E C y 5 抗小鼠C D 3 和B 2 2 0m A b 对细胞染色，通过流式细胞术( f l o wc y t o m e t r y ，F C M ) 进行分析。2 利用免疫磁珠分选方法将H F D 小鼠脂肪组织或脾脏组织来源的C D ll c + 细胞分选，同时分离N D 小鼠腹腔巨噬细胞，将分离的三组细胞分别与表达红色荧光蛋白H c R e d 的大肠埃希菌( 经3 多聚甲醛固定) 3 7 。C 共培养2 h ，同时设立L P S 刺激组，F C M 分析各组细胞的吞噬能力。3 应用F I T C 抗小鼠C D llcm A b 及P E 抗小鼠C D 4 0 、C D
6、8 0 、C D 8 6 、M H C I 、M H C I Im A b 对H F D 和N D 小鼠脂肪组织细胞及脾脏组织细胞进行染色；F C M 分析H F D 小鼠脂肪组织来源或脾脏来源的C D Ilc + 细胞的表型。一种脂肪组织来源树突状细胞的鉴定及功能研究4 应用实时荧光定量P C R ( R e a l t i m eq u a n t i t a t i v eP o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o n ，q R T - P C R ) 的方法检测H F D 小鼠A T D C s 及脾脏来源D C ( S P D C s ) 的I
7、 L - 6 、T G F p 、I L 2 3 p 1 9 、I L 一1 2 p 4 0 及I L 一1 2 p 3 5 等细胞因子m R N A 的表达水平；酶联免疫吸附试验( E n z y m eL i n k e dI m m u n o s o r b e n tA s s a y ，E L I S A ) 检测A T D C s 和S P D C s 培养上清中I L 一6及I L 2 3 的蛋白表达水平。5 应用免疫磁珠分选方法将H F D 和N D 小鼠脂肪组织中的C D 4 + T 细胞分离，将分离出的C D 4 + T 细胞中加入离子霉素( i o n o m y c
8、i n )和乙酸肉豆蔻佛波醇( p h o r b o lm y r i s t a t ea c e t a t e ，P M A ) 共培养4 h ，q R T P C R 检测I L 一1 7 及R O R y tm R N A 的表达水平。6 应用免疫磁珠法分别分选6 8 w 正常小鼠脾脏来源的C D 4 + T 细胞、H F D 小鼠A T D C s 或S P D C s ，将lx1 0 6 的C D 4 + T 细胞和2 1 0 5的A T D C s 或S P D C s 共培养，同时设置抗小鼠I L 6m A b 组、抗小鼠I L 2 3m A b 组、抗小鼠I L 6m A
9、 b + 抗小鼠I L 2 3m A b 组及对照免疫球蛋白组；应用F I T C 抗小鼠C D 4m A b 及P E 抗小鼠I L 1 7m A b 对不同共培养体系中的细胞进行染色，F C M 分析T h l 7 细胞的比例，E L I S A检测培养上清中I L 1 7 的蛋白水平。7 应用聚合酶链式反应( P o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o n ，R T - P C R ) 方法检测A T D C s 中趋化因子受体C C R 6 、C C R 5 及C X C R 2 的表达，同时应用q R T P C R 的方法检测H F D 及N
10、 D 小鼠脂肪组织中相应趋化因子C C L 2 0 、M I P 1 及I L 8 的表达水平。江苏大学硕士学位论文结果：1 F C M 检测发现，与N D 小鼠相比，H F D 小鼠脂肪组织中C D ll c +细胞的比例明显增高；脂肪组织中C D ll c + 细胞具有很长的突触，富含线粒体并且胞质中极少看到溶酶体；同时脂肪组织来源的C D l1 c +细胞均不表达C D 3 及B 2 2 0 分子；吞噬实验结果显示脂肪组织来源的C D ll c + 细胞的吞噬能力强于C D ll c + S P D C s ，但又低于腹腔巨噬细胞；而脂肪组织来源的C D ll c + 细胞的F 4 8
11、0 分子的表达与C D ll c + S P D C s相近，但低于腹腔巨噬细胞。上述结果提示H F D 小鼠脂肪组织中存在着一群形态典型的C D ll c b C s ；与N D 小鼠相比较，H F D 小鼠脂肪组织中浸润的C D ll c + D C s 细胞的比例明显增高。2 F C M 结果显示A T D C s 的表面分子M H C I 及M H C I I ，共刺激分子C D 4 0 、C D 8 0 、C D 8 6 的表达均低于S P D C s ；L P S 刺激后，A T D C s的M H C 分子或共刺激分子的表达均未有明显变化，并且A T D C s 吞噬功也未发生改
12、变，表明H F D 小鼠脂肪组织的A T D C s 是一群未成熟的、表型稳定的D C 。3 q R T P C R 检测显示，与S P D C s 相比，A T D C s 促炎症性细胞因子I L 一6m R N A ( 8 1 0 3 士1 0 6 7w1 11 5 4 - 2 4 3 9 ，p O 0 1 ) 、T G F - pm R N A( 1 5 4 4 4 - 1 6 4 1w4 3 6 1 = t = 5 4 1 7 ，p O 0 1 ) 、I L 一2 3 p 1 9m R N A ( 0 0 1 4 3 + 0 0 0 9l P $ O 1 8 2 4 - 0 0 4 5
13、 ，p 0 0 1 ) 、I L - 1 2 p 4 0m R N A ( O 4 31 士0 0 4 4w1 6 6 5 + 0 2 0 5 ，p 0 0 1 ) 、I L 一1 2 p 3 5m R N A ( 2 4 2 6 士0 7 6 9V S0 2 2 5 士0 0 7 4 ，p 0 o s ) f f 勺表达水平明显增高；E L I S A 检测发现，A T D C s 分泌细胞因子I L - 6 的能力明显高于S P D C s ( 2 7 6 0 - a = 7 6 1 1p g m ! 坩4 3 5 6 a = 1 8 0 2一种脂肪组织来源树突状细胞的鉴定及功能研究p g
14、 m 1 ) ；同时A T D C s 分泌细胞因子I L 一2 3 的能力也明显高于S P D C s( 4 4 6 0 4 - 6 210p g m lw7 8 3 5 4 - 0 9 0 9 0p g m 1 ) ，结果均具有统计学意义( 萨O 0 5 ) 。上述结果提示A T D C s 为一群具有高分泌促炎症性细胞因子能力的D C 。4 q R T P C R 结果显示，与N D 小鼠相比，H F D 小鼠脂肪组织中C D 4 + T 细胞I L 1 7m R N A ( 8 9 6 0 4 - 1 5 8 1 坩2 6 8 2 4 - 2 2 1 6 ，p O 0 1 ) 及特异性
15、转录因子R O R 丫tm R N A ( 1 6 8 2 - 1 ：0 8 11 7w6 7 5 7 4 - 1 9 8 8 ，p O 0 5 )的表达水平明显增高。5 T h l 7 细胞体外培养分化体系中，S P D C s 和A T D C s 诱导T h l 7细胞分化的比例分别为2 5 5 7 4 - 0 2 5 5 4 w4 6 9 7 4 - 0 2 5 7 ( 西O 0 1 ) ；E L I S A 检测培养上清中I L 1 7 水平，S P D C s 培养孔为0 2 4 4 士0 0 4 8p g m l ，A T D C s 培养孔为0 4 5 6 4 - 0 5 2
16、2p g m l ( p O 0 5 ) ，加入a n t i - I L - 6m A b 的培养孔为0 2 4 1 4 - 0 0 4 7 ，加入a n t i I L 一2 3m A b 的培养孔为0 2 1 5 4 - 0 0 2 8 ，结果提示T h l 7 细胞的分化与A T D C s 分泌的细胞因子I L 一6 和I L 2 3 有关。6 R T P C R 结果显示A T D C s 有趋化因子受体C C R 6 、C C R 5 及C X C R 2 的表达。q R T P C R 结果显示，与N D 小鼠相比，H F D 小鼠脂肪组织中趋化因子C C L 2 0 ( 0 5 4 4 4 - 0 2 2 8 4 7 7 7 4 - 1 3 7 9p O 0 5 ) 的表达明显增高，而
