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1、Q/DYGFG64005-2010-00 质量检验方法验证管理规定1标准操作规程 标题：药品检验方法验证或确认操作规程 生效日期 年 月 日 页次：1/ 颁发 部门质量管 理部分发 部门质量部、QC编号：SOP-QA-092-01口新订、口修订、原文件号 编 制部门 审核QA 审 核批 准建立一个对新开发的检验方法、药典或客户提供的检验方法（检验方法 仅限于 GC、HPLC），需进行的可行性及适用性的验证的规范程序，确保新开 发的检验方法、转移应用的检验方法有效实施。 1. 范围 适用于对开发和新建立的分析方法、药典方法及客户提供的方法转移应 用进行验证。 2.引用标准根据 GMP2010 年
2、版指南要求、中国药典2010 版及中国制药企业 GMP 指 南要求而制定。 3管理职能 3.1 质量控制部负责本标准的制定与修订。 3.2 质量控制部负责检验方法验证方案、计划模板的制、修订。 4 管理内容 41 新开发的 GC 或 HPLC 方法验证 4.1.1 选择性（或专属性） 选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC 或 HPLC 色谱柱，流动相配 比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体，前体及降 解产物）与成品较好地分开，并确保主成份峰中没有其他干扰物质峰存在， 必要时可采用二极管阵列检测器或质谱对组分的单一性进行评价和确认。 4.1.2 精密度 4.1.2.1 系
3、统精密度 通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡量系统的误差。 对同一均匀的样品溶液或标准品溶液，连续重复进样六次，记录每次进 样后各组分的响应，峰面积或峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差 相对标准偏差 RSD。 4.1.2.2 方法精密度 通过测定样品含量与真值（平均值）的偏差程度来衡量样品制备过程 （包括称量，稀释）中的误差。Q/DYGFG64005-2010-002分别对同一批号的样品称量六次，按含量测定方法测定其含量，计算每 一单一含量与平均含量之间的相对标准偏差 RSD，除另有规定外通常 RSD2.0%。 4.1.2.3 中间精密度 4.1.2.3.1 按验证确定的方法，同一人
4、用同一仪器检测三批样品，每间隔 24 小时以上，测定一次，共测定 3 次。 4.1.2.3.2 由两人使用不同的仪器分别检测同三批样品。 4.1.3 方法的线性范围 4.1.3.1 在含量测定浓度的 80120%选择五个不同的浓度点，每一个浓度需 测定二次，记录各对应浓度下的相应响应值（峰高，峰面积或峰面积的比值） ，以衡量样品量与检测器响应间的线性对应关系。 4.1.3.2 接受标准：相关系数 r0.991.00 4.1.3.3 在 HPLC 法有关物质测定时，测定浓度从总杂质 120%至 LOQ 浓度选 取五个点，每个浓度点测定二次。GC 法残留溶剂测定时，测定浓度从残留溶剂限度的 120
5、%至 LOQ 浓度选 取五个点，每个浓度点测定二次。 4.1.4 方法的准确度 衡量该方法的实测结果与真实值的吻合程度，即方法的回收率。 4.1.4.1 取已知浓度的样品（浓度范围为含量测定浓度的 80%、100%、120%）各三份，每份进样测定三次，计算该方法的百分回收率。4.1.4.2 用 HPLC 法进行有关物质测定准确度试验，取杂质的 LOQ、50%、100%、120%浓度四个点（也可根据产品质量情况选择其他点）， 每个浓度点测定三次。计算百分回收率。 4.1.4.3 GC 法残留溶剂准确度试验，取残留溶剂限度的 LOQ、50%、100%、120%四个浓度点（也可根据产品质量情况选择其
6、他点）溶 液，若样品测定浓度值低于限度值的 10%时，应增加测定限度的 10%的浓度 点溶液。加入样品中，每个浓度点测定三次，计算扣除样品浓度后的百分回 收率。 4.1.5 最小检测限 4.1.5.1 仪器能检测到样品中各组分的最低检测浓度，不需定量。 4.1.5.2 操作 在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定三次空白样品，洗脱时 间需用覆盖整个样品中所有组分的流出。计算平均噪声水平。根据产品检验 规程规定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。当信噪比为 3.01.0，确定 该浓度为待确定的最小检测限。将该浓度溶液重复进样三次，若三次所得图 谱的信噪比均为 3.01.0，则确定该浓度为最小检
7、测限。 4.1.6 最小定量限Q/DYGFG64005-2010-0034.1.6.1 能够重复的、准确的测量峰面积（相当于供分析物）的进样量。峰高 等于噪声高的 10.01.0。 4.1.6.2 操作：按检测限方法测定仪器的平均噪声，按最小检测限操作方法 操作，将按信噪比为 10.01.0 的浓度定为最小定量限。 4.1.7 方法耐用性（仅在新开发的方法的第一次验证时进行）HPLC 法，方法耐用性要求进行改变流动相比例和流动相 PH 值的测试，主 要考察原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料中间体、前体及降解产 物）与成品主峰的分离度达到要求，并确保成品主峰中没有干扰峰存在，同 时观察杂质
8、峰的出峰顺序是否发生变化。 GC 法，方法耐用性要求进行改变柱温和载气流速测试，主要考察所有残 留溶剂峰之间的分离度是否仍达到标准要求。 4.1.8 溶液稳定性HPLC 法，将配制好的溶液每隔半小时进样一次，连续进样 5 次（即放 置两小时），比较含量和有关物质的变化。 4.2 药典、客户提供的检验方法的转移应用确认 4.2.1 方法选择性 选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC 或 HPLC 色谱柱，流动相配 比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体，前体及降 解产物）与成品较好地分开，并确保成品峰中没有其他干扰物质峰存在，必 要时可采用二极管阵列检测器或质谱对组分的单一性
9、进行评价和确认。 4.2.2 系统适应性 按药典方法及客户方法规定操作。 4.2.3 系统精密度、中间精密度、最小检测限、最小定量限、耐用性、溶液 稳定性六项分别按 4.1.2.1、4.1.2.3、4.1.5、4.1.6、4.1.7 及 4.1.8 操作。4.3 中间体分析（面积归一化法）的方法验证 4.3.1 选择性 选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC 或 HPLC 色谱柱，流动相配 比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体，前体及降 解产物）与成品较好地 分开，并确保成品峰中没有其他干扰物质峰存在，必要时可采用二极管 阵列检测器或质谱对组分的单一性进行评价和确认。 4
10、.3.2 系统精密度 通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡量系统的误差。 对同一均匀的样品溶液连续重复进样六次，记录每次进样后各组分的响 应，峰面积或峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差相对标准偏差 RSD。 4.3.3 最小检测限Q/DYGFG64005-2010-004在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定三次空白样品，洗脱时 间需用覆盖整个样品中所有组分的流出。计算平均噪声水平。根据产品检验 规程规定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。当信噪比为 3.01.0，确定 该浓度为待确定的最小检测限。将该浓度溶液重复进样三次，若三次所得图 谱的信噪比均为 3.01.0，则确定该浓度为最
11、小检测限。 4.3.4 最小定量限 按检测限测定方法测定仪器平均噪音，然后按信噪比等于 10.01.0 配 制中间体前一步主原料的样品溶液。连续进样三次，计算组分的最小定量限。4.3.5 准确度 取常规检测浓度的 150%、50%，检测所得含量，应与 100%浓度所测含量 SD2.0%。 4.3.6 溶液稳定性HPLC 法，将配制好的溶液每隔 1 进样一次，连续进样 5 次（即放置 5 小时），比较含量和有关物质的变化。 4.4 不同的检验项目在进行分析方法验证或分析方法确认时须进行的验证或 确认内容参考下表： 鉴别含量有关物质（定量）有关物质（限度）性能 参数 验证确认验证确认验证确认验证确
12、认 准确 度NoNoYesNoYes可能NoNo精密 度NoNoYes可能YesYesNoNo专属 性Yes可能Yes可能YesYesYesYesLODNoNoNoNoNoNoYesYes LOQNoNoNoNoYesYesNoNo 线性NoNoYesNoYesNoNoNo 范围NoNoYesNoYesNoNoNo 耐用 性YesYesYesYesYesYesYesYes注：验证或确认时除参考上表外，还应根据产品的实物质量水平确定须进行 验证或确认的项目内容。 5.模板进行检验方法验证或确认时，可参考下列模版形成验证或确认的方案和 报告，也可根据客户的要求在下列模版的基础上进行修改。 5.1
13、含量测试方法验证或确认模版（见附件 1） 5.2 有关物质测试方法验证或确认模版（见附件 2）Q/DYGFG64005-2010-0055.3 残留溶剂检测方法验证或确认模版（见附件 3） 5.4 检验方法验证或确认计划模板（见附件 4） 6注意事项 6.1 在分析方法验证前，应确保分析仪器设备经过确认并处于其校验有效期 内。 6.2 试验过程应详细记录, 包括色谱条件，样品、对照品、所用试剂的来源， 含量，称量值, 稀释过程, 简要操作方法, 仪器型号，计算公式及结果，必 要的数据统计等。 6.3 已验证过的分析方法的任何修改都应当保存完整的记录，其包括修改的 原因和相关数据说明，用来证明该
14、修改后的方法和规定的方法同样准确可靠。Q/DYGFG64005-2010-006附件 1： 含量测试方法验证或确认模版 1、目的： 2、方法来源： 3、验证所用仪器设备及色谱条件 3.1 仪器设备 名称型号序列号供应商 进样器泵检测器高效液相 色谱色谱工作站色谱柱3.2 测试条件检测波长：柱温：流速：进样量：3.3 溶液制备3.3.1 流动相的配制：3.3.2 空白（或稀释剂）：3.3.3 样品溶液的制备：3.3.4 标准品溶液的制备：3.4 验证所使用的试剂与标准品名称规格批号供应商4、验证过程4.1 系统适用性待仪器稳定后，进规定量的标准溶液，注入色谱仪，平行进样 6 次，记录色谱图。进样
15、次数保留时间（min）峰面积12Q/DYGFG64005-2010-0073 456平均值RSD% 计算 N= T= （除另有规定外RSD2.0%,T2.0）4.2 专属性进空白溶液、标准溶液、如有必要配制含生产产品所用主原料、中间、副产物的测试溶液，并进样。应证明以上物质不干扰被测物的测定个。除另有规定外，其相邻组分分离度应不小于 1.5.名称保留时间分离度4.3 系统精密度(同系统适用性)4.4 方法精密度用被测物质标准品定量称样并配制成相对浓度为 80%、100%、120%三种测试溶液，每种溶液制备 3 份，每份溶液进样三次。计算每个样品三次进样的平均峰面积及 RSD；计算每个浓度点的
16、3 份溶液的含量及相应的 RSD；计算每个浓度点的平均含量及 3 个点间相应的 RSD。除另有规定外 RSD 应2.0%。数据填入下表中：相对浓度80%100%120%称样测试 1测试 2测试 3平均值峰面积RSD%含量RSD%平均含量RSD%4.5 线性Q/DYGFG64005-2010-008用被测物质标准品定量称样并配制成相对浓度为 80%，90%，100%，110%，120%五种测试溶液。每个样品进样 2 次，计算平均峰面积。以样品平均浓度对相应平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数。相关系数应 0.999-1.00。线性结果浓度相对浓度峰面积 1峰面积 2平均峰面积平均值回归方程相关系数4.6 准确度同方法精密度。计算每个样品溶液的平均含量，并计算 3 个浓度点的 9 个溶液的总平均含量值与大于 95
