《蛋白质和氨基酸的呈色反应-》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白质和氨基酸的呈色反应-（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验一实验一 蛋白质和氨基酸的蛋白质和氨基酸的呈色反应呈色反应 一、实验目的1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理 2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方 法。 3、了解呈色反应在定性和定量分析中的应用 。（一）双缩脲反应 1、原理一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩 脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。2、试剂 （1）尿素 （2）10%氢氧化钠溶液 （3）1%硫酸铜溶液 （4）2%卵清蛋白溶液3、操作 （1） 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加 热使尿素熔化，尿素放出氨 。熔化的尿素开始硬化 时，停止加热，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠 溶液约1ml，振荡混匀，再加1
2、%硫酸铜溶液1滴，再 振荡。观察出现的粉红颜色。添加要避免过量硫酸铜 ，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。（2）向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化 钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加 随摇。观察紫玫瑰色的出现。剂 i （二）茚三酮反应2、试剂 （1）蛋白质溶液 （新鲜蛋清：水=1:9) 100ml（2）0.5%甘氨酸溶液 （3）0.1%茚三酮水溶液 （4）0.1%茚三酮-乙醇溶液3、操作 （1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶 液1ml，再各加0.5ml 0.1%茚三酮水溶液，混匀， 在沸水浴中加热12分钟，观察颜色由粉色变紫 色再变蓝。 （2）在一小块滤
3、纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液， 风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液， 在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。剂 i 剂 i （三）黄色反应1、原理2、试剂 （1）鸡蛋清溶液 （2）头发 （3）指甲 （4 ）0.5%苯酚溶液 （5）浓硝酸 （6）0.3%色氨酸溶液 （7）0.3%酪氨酸溶液（8）10%氢氧化钠溶液 3、操作向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出 现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加 热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10% 氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。剂 i 管 号123456材 料 （滴）蛋白 质 溶液 4指甲少许头发少许0.5% 苯酚 40.3
4、% 色氨 酸 40.3% 酪氨 酸 4 浓硝酸（ 滴）24040444现 象 剂 i （四）乙醛酸反应1、原理紫红色剂 i 2、试剂： (1) 蛋白质溶液鸡蛋清：水1：20 (2）冰醋酸 (3) 浓硫酸(分析纯)3、操作向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约1ml,倾斜 试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(AR)约1ml，使 其重叠，勿使两者混合。静置后，观察在两液界面上 出现的红紫色环，于水浴中微热，可帮助颜色形成。 用20%白明胶作乙醛酸反应。白明胶分子中无色氨酸 ，所以不呈此反应。剂 i (五)考马斯亮蓝反应 1、原理 考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其以 游离存在呈棕
5、红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色 。 它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速度快，约在2分钟左右 时间达到平衡，在室温一小时内稳定。在0.011.0mg蛋白质范围 内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含 量。2、试剂（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水=1：20） 5 ml（2）考马斯亮蓝染液 300 ml 考马斯亮蓝G250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中，加100 ml 85%磷酸 混匀，配成原液。临用前取原液15 ml，加蒸馏水至100 ml，用粗 滤纸过滤后，最终浓度为0.01%。剂 i 3、操作取2支试管，按下表操作试 剂管 号蛋白质溶液 （ml）蒸馏水 （ml） 考马斯亮蓝 液（ml） 101320.10.93
