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1、w w w . y u e q i k a n . c o m 中国月期刊咨询网环境保护与防治污染论文分光光度法测定葛根叶中总黄酮 的含量摘 要：目的：建立葛根叶中总黄酮含量的测定方法。方法：以芦丁为对照品，选择510 n m 为测定波长，采用分光光度 法测定葛根叶中总黄酮的含量。结果：芦丁在0 . 0 12 0 8 m g / m L-0 . 0 7 2 48 m g / m L范围内线性关系良好( r = 0 . 9996 ) ，平均回收 率为98 . 7 2 %，RSD 为2 . 6 %。结论：分光光度法精密度高，重复性好，可用于葛根叶中总黄酮含量的测定。关键词：环境保护与防治污染论文,
2、 葛根叶, 总黄酮, 含量测定, 分光光度法中药葛根为豆科植物野葛Pu e r a r i a l o b a t a ( W i l l d ) O h w i 或甘葛藤Pu e r a r i a t h o m s o n i i Be n t h 的干燥根。在我国具有悠久的历 史，在本经、别录等均有记载。味甘、辛、凉，归脾、胃经，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功效 。由于葛根具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量及降低血压等作用1，2 ，含有多糖及多种微量 元素3，现已被广泛应用于保健食品中，是我国卫生部批准的第一批药食同源的植物4，5。临床上主要用于冠心病 、高血压
3、、心绞痛、高黏血症、脑梗死、椎-基底动脉供血不足等多种疾病的治疗。6 目前，未见有葛根叶的相关研 究报道。为了扩大葛根的药用部位，文章采用分光光度法测定葛根叶中总黄酮含量，为葛根叶的后续研究和开发打下 基础。1 实验材料1. 1 仪器T U -18 18 型紫外-可见分光光度计( 北京普析通用仪器有限责任公司) ; BS12 4S型电子分析天平赛多利斯科学仪器( 北京) 有 限公司; K Q -10 0 B型超声清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) 。1. 2 药材与试剂葛根叶药材购于安徽省亳州市药材市场。芦丁对照品( 中国生物制品检定所，批号：10 0 0 8 0 -2 0 0 7 0 7 )
4、 。所用试剂均为分 析纯。2 方法与结果2 . 1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品15. 1m g ，置于50 m L容量瓶中，加入6 0 %乙醇适量，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2 . 2 供试品溶液的制备。取葛根叶粉末5g ，精密称定，置锥形瓶中，加入6 0 %乙醇50 m L，称重，超声30 m i n ，6 0 %乙醇 补足失重，滤纸过滤，取续滤液，即得。2 . 3 测定波长的选择精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1. 0 m L，置2 5m L容量瓶中，先加入5%的亚硝酸钠溶液1. 0 m L，摇匀，放置5m i n ， 再加入10 %的硝酸铝溶液1. 0 m L，摇匀，放置5m
5、 i n ，再加入4%的氢氧化钠溶液10 . 0 m L，加6 0 %的乙醇至刻度，混匀， 静置l 5m i n 。以上述不加芦丁对照品液的混合液为空白参照，在2 0 0 n m -8 0 0 n m 波长范围内扫描，确定最大吸收波长为51 0 n m 。2 . 4 方法学考察2 . 4. 1 标准曲线的制备。精密吸取对照品溶液1. 0 、2 . 0 、3. 0 、4. 0 、5. 0 、6 . 0 m L，分别置于2 5m L容量瓶中，照“2 . 3”项下 方法，自“加入5%亚硝酸钠溶液”起依法测定各个标准品溶液的吸光度，以吸光度A 为纵坐标，浓度C为横坐标，绘 制标准曲线，得回归方程A =
6、 0 . 152 9C-0 . 0 0 2 3，r = 0 . 9996 ，表明芦丁在0 . 0 12 0 8 m g / m L-0 . 0 7 2 48 m g / m L范围内呈良好的线性 关系。2 . 4. 2 精密度试验。精密吸取对照品溶液3. 0 m L，共6 份，分别置于2 5m L容量瓶中，照“2 . 3”项下方法操作，测定吸光 度，结果吸光度的RSD 为0 . 98 %，表明本方法精密度良好。1 / 2w w w . y u e q i k a n . c o m 中国月期刊咨询网2 . 4. 3 重复性试验。取葛根叶粉末6 份，按“2 . 2 ”项的方法制备供试品溶液，精密
7、量取供试品溶液1m L，置2 5m L容量瓶 中，按“2 . 3”项下的方法操作，测定吸光度，计算葛根叶中总黄酮含量的RSD 值为1. 3%，表明本方法重复性良好。2 . 4. 4 稳定性试验。精密吸取葛根叶供试品溶液1. 0 m L，按“2 . 3”项下方法操作，在0 m i n 、5m i n 、10 m i n 、15m i n 、2 0 m i n 、30 m i n 时依法测定吸光度，RSD 值为1. 6 %，表明本法在30 m i n 内测定是稳定的。2 . 4. 5 加样回收率。精密称取已知总黄酮含量的葛根叶，分别精密加入高、中、低浓度芦丁对照品适量，照“2 . 3”项 下方法操
8、作，每个浓度平行三份，测定吸光度，以计算的检测量减去本底，比上加入量算得回收率，结果见表1。2 . 5 样品的测定取葛根叶6 份，按照“2 . 2 ”项下的方法制备供试品溶液，依法测定吸光度，计算得总黄酮含量9. 0 8 m g / g ，RSD = 1. 9%。3 讨论目前关于总黄酮含量的测定方法有比色法、紫外分光光度法、薄层色谱法等，其中以比色法最常用，且多以芦丁为对 照品。该法操作简便，稳定性和重现性好，因此本实验选择以芦丁为对照品的比色法为测定方法。在供试品的提取过程中，比较了回流提取和超声提取两种方法，结果表明回流提取效率高。同时考察了不同比例的乙 醇溶剂，发现6 0 %乙醇提取效率
9、高。葛根因含葛根素，大豆苷及大豆苷元，金雀异黄素和芒柄花黄素等异黄酮类成分，近年来葛根在防治骨质疏松症方面 的作用得到广泛关注。7 ，8 综合国内外数据库检索的结果，未见有葛根叶的相关报道。基于同株植物含有相同化学 成分的原理，对葛根叶的研究开发，有利于扩大葛根的药用部分，有利于葛根的深入开发和研究，有利于推进抗骨质 疏松药物的研究。参考文献1姚丹，丁选胜. 葛根素药理作用机制探讨及临床应用J. 中国临床药理学与治疗学，2 0 0 8 ，13( 4) ：46 8 -47 2 .2 白东义，佟春玲，韩慧，等. 葛根素的药理作用及其临床应用研究进展J. 江苏中医药，2 0 0 9，41( 3) ：
10、7 6 -7 8 .3易红，杨华. 葛根的品种产地和提取工艺研究进展概况J. 中国实验方剂学杂志，2 0 0 6 ( 11) ：6 0 1.4李悦，李艳菊. 国内外葛根功能食品研究进展J. 食品研究与开发，2 0 0 7 ，2 8 ( 12 ) ：17 4-17 7 .5李玉山. 葛根的综合开发和利用J. 林产化学与工业，2 0 0 9，2 9( 6 ) ：10 9-114.6 杨杰忠. 葛根素的临床应用进展J. 中国医药指南，2 0 12 ，10 ( 2 1) ：46 5-46 6 .7 姚红，黄少华，苏子仁. 葛根总黄酮对去卵巢大鼠骨密度及骨钙影响的实验研究J. 新中医，2 0 0 5，37 ( 2 ) ：92 -93.8 W o n g R，Ra b i e B. Ef e c t o f p u e r a r i n o n b o n e f o r m a t i o n J. O s t e o a r t h r i t i s Ca r t i l a g e ，2 0 0 7 ，15( 8 ) ：8 94-8 99.Po w e r e d b y T CPD F ( w w w . t c p d f . o r g )2 / 2
