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1、色谱柱的日常维护色谱柱的日常维护色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外，最主要的是与日 常的维护密切相关。为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或 柱压太高，通常被认为该色谱柱的使用寿命已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键 是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法：一、流动相的一、流动相的 pH 应在使用范围内应在使用范围内Welch 公司的色谱柱除反相氰基柱除反相基柱 pH 范围均为 1.59.0，其它反相色谱的 pH 范围均为 1.510，由于填料中
2、存在 SiC 和 SiO 键，流动相超过其 pH 范围将会 导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的 pH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难使色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格严格 控制流动相的控制流动相的 pH 值。值。二、去除样品和流动相中的固体颗粒二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵不仅会引起柱压的 升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰形拖尾、变 宽，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱柱试剂，在分析前对样品进行针筒过样品进行针筒过 滤，流动相过滤，流动相过
3、0.45um 滤膜。滤膜。三、使用维护柱或在线过滤器三、使用维护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路 的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压 升高、柱效下降。维护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱筛板孔径相同，因此 可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故 障占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱 进样端加上保护柱或在线过滤器。进样端加上保护柱或在线过滤器。如果确认色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，可选择一下方式进
4、行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇/水=20/80 1.0ml/min 反向冲洗 色谱柱 180min。2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。四、正确使用缓冲盐四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料 基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时障碍了基质上键合的碳链自 由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正 确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句 话：使用前要过渡，使用
5、后要冲洗使用前要过渡，使用后要冲洗。具体方法如下：1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以 1.0ml/min 流速冲洗 60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以 0.2ml/min 流速冲洗色谱柱过夜。2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流 动相以 1.0ml/mim 流速冲洗 60min；分析完成后，再用该过渡流动相以 1.0ml/min 冲洗色谱 柱 120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。 主意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相 中不含缓冲盐。3、缓
6、冲盐析出的补救方法：方案 1：用甲醇/水=20/80 以 1.0ml/min 流速 35条件下反向冲洗色谱柱 120min.方案 2：用甲醇/水=20/80 以 0.2ml/min 流速反向冲洗色谱柱过夜。五、防止强保留物质在色谱柱中存留五、防止强保留物质在色谱柱中存留强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为， 不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度 时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应， 需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有 强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清 洗色谱柱。洗色谱柱。清洗方法：1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。2、使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后用纯甲醇或乙腈反 向冲洗色谱柱 60min。3、补救方法：水乙腈氯仿（或异丙醇）乙腈水，每一步以 1.0ml/min 流速反 向冲洗色谱柱 60min。
