黄连中黄连素的提取

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1、1黄连中黄连素的提取黄连中黄连素的提取摘要：工艺生产黄连素的提取方法有硫酸法、石灰水法、乙醇法等。本实验采用 乙醇法。讨论了不同浓度、温度对黄连素提取的影响。通过比较，确定90%的乙 醇浓度和80提取温度比其它的提取率要高，重结晶溶液的pH值为12。关键词：黄连；黄连素；醇提法Abstract: There were several ways to extract berberine in production, such as Vitriol, limewater, ethanol and so on. In this article, we use the ethanol to extra

2、ct, with different concentration and temperature. And we get the conclusion that, when using 90% concentration of the ethanol, at temperature 80, the rate of the extraction is the highest. The pH of recrystallized liquor is between 12.Key words : Rhizoma Coptidis, Berberine, Alcohol reference 前言黄连是多

3、年生草本药材，一般以移栽后的第五年秋季收获为佳1。黄连喜冷凉、潮湿的气候，忌炎热、干旱、强光的环境，宜荫凉环境栽培，生长于海拔 8002200 米的山地生态区，黄连喜气温低、空气湿度大的自然环境，黄连最怕高温和干旱。喜荫蔽条件，忌强烈阳光，在强光直射下，植株很快就枯萎；但在过于荫蔽的环境下，黄连生长纤细柔弱，易罹病害。因此，人工栽培需搭棚遮荫，随着苗龄的增长，不断调节其所需的荫蔽度或透光度。对土壤要求较严，以表土疏松肥沃、土层深厚、排水和透气性良好的、富含腐殖质的中壤土和轻壤土为好。土壤反应以 ph 值 5.57 为宜。过酸或过碱、过砂或过粘的土壤均不宜种植。黄连分“味连”、“雅连”和“云连”

4、但总称黄连2。黄连主产于四川，长江以南大部地区均有分布，经过采集加工，晒干备用，根、茎、叶均可入药。我国产小檗科植物约200余种， 其中大多数均含黄连素。在原料的粉碎处理中， 根据不同原料可以采取剪、切、锯或水浸泡后石辊辗压等不同形式，其方法也可结合使用。目的在于粉碎得较细， 其试剂浸出物就多。黄连素(俗称小蘖碱)是中药黄连等的主要有效成分，抗菌能力很强，黄连素是一种具有多种功效的常用中药对急性结膜炎，口疮，急性细菌性痢疾，急性肠胃炎等均有很好的疗效3黄连素分子式与分子量：C20H18ClNO4.2H2O；407.85,别名小檗碱4。是从中药黄檗、2黄连、三棵针、唐松草等植物药材中提取出来的生

5、物碱成份。黄色结晶性粉末；无臭，极苦。在热水中溶解，在水或乙醇中微溶，在氯仿中极微溶解，在乙醚中不溶。黄连素是黄色的针状结晶,含有5.5分子结晶水,在100干燥后,失去分子结晶水而转为棕红色。黄连素微溶于水和乙醇,较易溶于热水和热乙醇中,几乎不溶于乙醚,盐酸盐难溶于水,但易溶于热水,而硫酸盐则易溶于水。黄连的化学成分包括黄连素、小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱等，此外，尚含木兰碱、表小檗碱等。本实验就是利用这些性质提取黄连素的。随着野生和栽培及产地的不同，黄连中黄连素的含量约为410 ，含黄连素的植物很多，如黄柏，三棵针，伏牛化，白屈菜，南天竹等均可作为提取黄连素的原料，但以黄连含量为高。又

6、由于黄连素的药用价值，所以开发利用较早，目前比较成熟的工艺为硫酸法，石灰水法，但该法的时间长，代价高，产品纯度低，产率低。本实验找出了时间短，代价低，产品纯度高，产率高的乙醇提取法。据资料报道5-6：黄连中已分离出了20种以上的生物碱，主要为小蘖碱，其次是巴马厅(又称掌叶防己碱Palmatirne)，药根碱(Jatrorrhizine)，小蘖胺(Berbamine)，非洲防己胺碱(columbamine)，氧化小蘖碱(Oxyberberine)，刺蘖碱(Oxyacanthine)，木兰碱(Magnoflorine)，异粉防己碱(Isotetrandrine)等。从黄连中提取黄连素的方法有硫酸法

7、、石灰水法、乙醇法7等。硫酸法、石灰水法提取时间长，提取效率低，且对环境污染大，酸水的处理成本较高。醇提取法缩短提取时间，方法简单，提取率高，回收容易，适合工业化生产。2 材料2.1 原料、药品黄连（朝熙诊所购买），黄连素标准品（购买），95%乙醇，丙酮(A. R) ，37%HCl, 冰醋酸。2.2 仪器粉碎机（天津市泰斯仪器有限公司）、电热恒温浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）、SHB-3行循环水式多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）、旋转蒸发器RE-52A（上海亚荣生化仪器厂）、氏漏斗、紫外可见分光光度计、滴定管、移液器、圆底烧瓶、三角瓶、电子天3平等。3 方法及含量的测定3.1 方法3.3.1 粉碎

8、 取25g 中药黄连切碎, 研磨成粉状。3.3.2 回流提取 将原料加入250ml 圆底烧瓶中,按固液比为1：15分别加入175ml、125ml、75ml的90%乙醇,装上回流冷凝管,重复提取三次，每次的时间2h、2h 、1h。3.3.3 浓缩 合并三次所得滤液,抽滤，在80恒温下用真空泵减压下蒸出乙醇(回收)直到棕红色糖浆状。3.3.4 结晶 加入1醋酸(100ml) 加热溶解,抽滤以除去不溶物,然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止,放置过夜,有黄色针状体的黄连素析出,抽滤,结晶用蒸馏水洗涤两次，再用丙酮洗涤两次得粗品。 3.3.5 重结晶 粗品加入100ml90热水中刚好溶解，趁热抽滤，用

9、30HCl调pH为12，静置12h,抽滤得精品，在60的烘箱中烘干称量。 3.2 黄连素的鉴定8（1）取样品50mg，加蒸馏水5ml，缓慢加热使之溶解，加NaOH试液2滴，显橙色，溶液经放冷后，过滤，滤液中加丙酮数滴，即产生黄色的浑浊液或沉淀，与标准品一致。（2）取样品少许，加H2S04 2ml温热至溶解，再加漂白粉少许，振荡后即产生樱桃红色，与标准品一致。（3）于样品的水溶液中，滴加浓硝酸数滴，溶液产生黄绿色硝酸小蘖碱沉淀，与标准品一致。4经上述方法鉴定最后得到的提取物为黄连素。3.3 黄连素含量的测定3.3.1 黄连素标准溶液的配制精密称取黄连素对照品10.00mg于10Oml容量瓶中，加

10、量无水乙醇在水浴上加热溶解。放冷至室温，用无水乙醇定容至刻度。再精密吸取1.OOmL上述溶液加入10mL容量瓶中用无水乙醇定容至刻度。摇匀，备用。其溶液浓度为0.010mg/mL。3.3.2 标准曲线的绘制分别精密量取浓度为0.010mg/mL的黄连素标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置于5个10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，混匀。标准溶液的浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.010-3mg/mL，以乙醇为空白，用紫外可见分光光度计进行扫描，测得在350nm为最大吸光度9。以吸光度对浓度进行回归计算，得回归方程(y=0.0559x+0.0096

11、，r=0.9987)。测定结果见表,黄连素标准曲线图如图1示10。表 黄连素对照品浓度 吸光度对照表编号 浓度（110-3mg/mL）（n=2） 吸光度1 0 0.0002 1 0.1283 2 0.2274 3 0.3415 4 0.4586 5 0.571500.10.20.30.40.50.612345 浓度(1*10-3mg/ml)吸光度图 1 黄连素的标准曲线3.3.3 样品溶液的配制每份样品溶液的浓度配制同标准溶液的配制一样，浓度为0.010mg/ml，再分别稀释浓度为310-3mg/mL。测得样品的吸光度见表。根据样品的吸光度和直线回归方程得出样品的含量。表 四个样品的吸光度样品

12、 吸光度 含量1 0.316 91.35%2 0.328 94.93%3 0.334 96.72%4 0.339 98.21%3.4 流程回流提取黄连粉末抽滤减压蒸馏洗涤滤渣结晶黄连素 （精品）滤液抽滤重结晶回收乙醇烘干（60 ）样品 鉴定含量 测定64 分析与讨论在乙醇提取过程中，影响提取率及产品质量的主要因素是乙醇的浓度、提取温度，本论文是采用同一种方法在不同的浓度和温度进行黄连素的提取分离，现分别进行讨论。4.1 乙醇浓度 对黄连进行回流提取11，第一次按照固液比为1：15的比例分别对样品进行三次（7：5：3）加入90%乙醇溶液为：175ml、125ml、75ml,合并三次滤液；第二次按

13、第一次的固液比加入70%的乙醇溶液合并三次滤液。结果见表。表 乙醇浓度与提取率的关系 乙醇浓度 70% 90% 粗 品(g) 1.5978 1.7678精 品(g) 1.4356 1.5145粗品收率（%） 6.39 7.07 精品收率（%） 5.74 6.06精品 外观 黄色结晶 金黄色结晶由表可以看出,乙醇的浓度对精品收率及精品中黄连素的含量均有影响。乙醇浓度低，精品收率低；乙醇浓度高，虽然精品收率高,但生成的沉淀中含杂质较多，最终影响产品的质量。4.2 温度温度的变化对黄连素的提取的影响，见表。表 温度与提取率的关系乙醇浓度 70% 90%提取温度（） 50 80 50 80 粗 品(g

14、) 1.4829 1.5978 1.5260 1.7678精 品(g) 1.3598 1.4356 1.3752 1.5145 粗品收率（%） 5.93 6.39 6.10 7.07 精品收率(%) 5.44 5.74 5.51 6.06由表得知，在同一浓度不同的温度和同一温度不同的浓度下对黄连素的提取率不同，浓度为 90%和温度为 80提取的精品收率最高，而 70%和 50提取的精品收率较低。7由此可见，同一种提取方法在不同的温度条件下进行，所得的提取物收率不同。4.3 pH 值的影响在结晶时需要 HCl 对提取液调节 pH 值，如果 pH 值过高使溶液中产生气泡同时影响结晶，如果 pH 值过低，又不能使结晶物完全达到饱和。因此，本实验的 HClpH 值为12。4.4 最佳浓度、温度的确定由表可以看出，样品 4 的含量最高。从而，确定最佳提取浓度为 90%、温度为80,其含量为 98.21%。5 结论乙醇的浓度大小直接影响产品的质量。因为，浓度过高，则在生成的沉淀中含杂质较多，最终影响产品的质量。相反，浓度太低又不能完全提取到想得的物质。根据实验数据分析，70%的乙醇浓度比90%所得的黄连素低。同时，在