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1、植物组织中可溶性糖含量的测定植物组织中可溶性糖含量的测定一实验目的一实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二实验原理二实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的 OD 值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三实验用品三实验用品721 型分光光度计 分析天平 研钵 恒温水浴锅 烧杯 刻度试
2、管 大试管 活性炭 移液管 漏斗 酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在 80烘箱中烘至恒重葡萄糖 100mg,配制成500mL 溶液，即得每 mL 含糖为 200g 的标准溶液。蒽酮试剂：称取 1g 经过纯化的蒽酮，溶解于 1000mL 稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由 760mL 浓硫酸（比重 1.84）稀释成 1000mL 而成。四实验步骤四实验步骤1.可溶性糖的提取 称取 0.5g 的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加 80%酒精 4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于 80水浴中不断搅拌 30min，离心 10 分钟(5000 转/min)，收集上清液于 10ml 的刻度试管中，其残渣
3、加 2ml80%酒精重复提 1 次，合并上清液。在上清液中加 0.5g 活性炭，80水浴脱色 30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释 10 倍或 20 倍后)测定。2.显色及比色吸取上述糖提取液 1mL， 放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂 5mL 混合之，于沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为 625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算） ，然后再行计算样品中含糖百分数。3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL 含糖 0、5、10、20、40、60、80g。按上述方法分别测得其吸光
4、度，然后绘制 A625糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.480%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ug/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量设 V 为植物样品稀释后的体积（m L）C 为提取液的含糖量(g/ m L)W 为植物组织鲜重(g)则得计算式如下：可溶性糖含量可溶性糖含量( CV)/(W106) 100%五注意事项五注意事项1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心2.离心时要平衡3.在蒽酮反应
5、前稀释样品 10-20 倍六实验结果及分析六实验结果及分析实验测得吸光度值为 0.175，而标准曲线如图 1，标准曲线方程为y=0.3573x-0.4879,将 y=0.175 代入方程，得 x=1.185，即 C=1.185(g/ m L)。可溶性糖含量=( CV)/(W106) 100%=（1.185*6）/（0.5*106）*100%=13.42%所以，实验测得新鲜青菜叶片可溶性糖含量约为所以，实验测得新鲜青菜叶片可溶性糖含量约为 13.42%。（标准曲线见下表）葡萄糖溶液标准曲线y = 0.3573x - 0.4879 R2 = 0.9721-0.500.511.52123456葡萄糖溶液浓度吸光度值 A625标准曲线 线性 (标准曲线)图 1
