《烟草及烟草制品二烯烟碱联吡啶可替宁的测定气相色谱氮化学发光检测法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《烟草及烟草制品二烯烟碱联吡啶可替宁的测定气相色谱氮化学发光检测法（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、ICS 65.160B 35 备案号：DB52贵州省 地方标准DB 52/ T 2017XXXX烟草及烟草制品 二烯烟碱、2,3-联吡啶、 可替宁的测定 气相色谱-氮化学发光检测 法Tobacco and tobacco productsDetermination of Nicotyrine,2, 3- dipyridyl,Cotininegas chromatography-nitrogen chemiluminescence detector（征求意见稿）2017 - XX - XX 发布2017 - XX - XX 实施贵州省质量技术监督局 发 布DBXX/ XXXXXXXXXI目 次前
2、 言.II1 1 范围.12 2 规范性引用文件.13 3 原理.14 4 试剂.15 5 仪器及材料.26 6 样品制备.27 7 分析步骤.28 8 精密度和回收率.39 9 检测报告.4附录 A（资料性附录） 色谱图 .5DBXX/ XXXXXXXXXII前 言本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国烟草总公司贵州省公司提出并归口。 本标准起草单位：贵州省烟草科学研究院。 本标准主要起草人：向章敏、雷波、蔡凯、耿召良、周淑平、张婕、葛永辉、杨
3、慧、赵会纳、 许冬青、赵瑞娟、刘文霖、程贵敏、李卫红。DBXX/ XXXXXXXXX1烟草及烟草制品烟草及烟草制品 二烯烟碱、二烯烟碱、2,32,3- -联吡啶、可替宁的测定联吡啶、可替宁的测定 气相色气相色 谱谱- -氮化学发光检测法氮化学发光检测法1 1 范围本标准规定了烟草和烟草制品中二烯烟碱、2,3-联吡啶、可替宁的测定方法。 本标准适用于烟草和烟草制品。2 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 Y
4、C/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法3 3 原理本标准采用5%氢氧化钠碱溶液提取烟草或烟草制品中微量生物碱，提取液经过二氯甲烷与甲醇混 合溶剂进行萃取，然后直接采用气相色谱氮化学发光检测器进行检测，以喹啉为内标采用内标标准曲 线法进行定量分析。4 4 试剂除特殊要求外，均应使用分析纯试剂。 4.1 二烯烟碱，含量98%（质量分数）。 4.2 2,3-联吡啶，含量98%（质量分数）。 4.3 可替宁，含量98%（质量分数）。 4.4 喹啉，含量98%（质量分数）。 4.5 甲醇，色谱纯。 4.6 二氯甲烷，色谱纯。 4.7 氢氧化钠，分析纯。 4.8 提取溶液：5%氢氧化钠
5、（W/W）。 4.9 萃取溶液：二氯甲烷：甲醇=3：1（V/V）。 4.10 尼龙针式滤头（0. 22 m）。 4.11 实验室用水参照GB/T 6682-2008规定。 4.12 标准溶液 4.12.1 微量生物碱标准储备液 分别称取二烯烟碱（4.1）50.0 mg、2,3-联吡啶（4.2）50.00 mg、可替宁（4.3）50.0 mg于50 mL烧 杯中，用20 mL甲醇（4.5）完全溶解，再分别转移至50 mL容量瓶中用甲醇（4.5）定容至刻度。然后DBXX/ XXXXXXXXX2分别取二烯烟碱、2,3-联吡啶、可替宁各5.0 mL 于50.0 mL容量瓶中，用甲醇（4.5）定容至刻度
6、，作 为三种微量生物碱的一级混合标准溶液。冷藏于4 保存，有效期3个月。取用时，放置于常温下，达 到常温后方可使用。 4.12.2 内标标准储备液 准确称取内标喹啉 （4.4）50.0 mg于10 mL烧杯中，用5 mL甲醇（4.5）完全溶解，用甲醇（4.5） 定容至刻度。作为内标储备液。冷藏于4 保存，有效期3个月。取用时，放置于常温下，达到常温后 方可使用。 4.12.3 微量生物碱标准系列溶液 取三种微量生物碱的一级混合标准溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.5）定容至刻度，作 为三种微量生物碱的二级混合标准溶液。分别取二级混合标准溶液0.3、0.5、1.0 mL和一级混合
7、标准溶 液0.2、0.4、0.6 mL于6个10 mL容量瓶中，分别加入0.05 mL内标标准储备液（4.12.2），用二氯甲烷： 甲醇=3：1（V/V）（4.5）溶液定容至刻度，得到各级微量生物碱系列标准溶液。5 5 仪器及材料5.1 旋风式样品磨，40目筛。 5.2 分析天平，精确至 0.1 mg。 5.3 回旋式振荡器。 5.4 离心机。 5.5 气相色谱仪，配置氮化学发光检测器。6 6 样品制备6.1 按照YC/T 31 制备试样并测定水分含量。7 7 分析步骤7.1 样品处理准确称取0.2000 g（精确至0.1 mg）样品于置于50mL离心管中，准确加入0.05 mL内标标准储备
8、液（4.12.2）和5 mL提取溶液（4.8）混合均匀，并置于回旋式振荡器中振荡30 min，然后用4000 rpm/min离心5 min，取下层清夜过滤后，用0.22 m微孔滤膜（4.10）过滤后待分析。 7.2 气相色谱-氮化学发光检测器条件以下气相色谱-氮化学发光检测器条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性： 色谱柱：DB-17（50%苯基-50%二甲基聚硅氧烷毛细管柱）；规格：30 m0.25 mm i.d0.25 m； 进样口温度：230 ； 分流进样：分流比10：1； 进样量：2 L； 载气：氦气； 流量：恒流模式，1.5 mL/min； 程序升温：初始温度为110 保持1 mi
9、n，以4 /min升至180 保持1 min，再以20 /min升 至250 保持1 min，共运行24 min； 氮化学发光检测器裂解器温度：900 ；DBXX/ XXXXXXXXX3氮化学发光检测器氧气流量：12 mL/min； 氮化学发光检测器氢气流量： 6 mL/min； 氮化学发光检测器数据采集频率：25 Hz。 7.3 标准工作曲线 用微量生物碱标准系列溶液（4.12.3）制作标准工作曲线。根据化合物峰面积与内标峰面积的比值 作为纵坐标（Y），化合物浓度与内标浓度比值作为横坐标（X），分别建立三种微量生物碱的校正曲 线，线性相关系数（R2）应不小于0.99。 标准工作溶液的定量参数
10、见表1。表 1 微量生物碱标准工作溶液的定量参数生物碱名称线性范围 / g/mL线性回归方程线性相关系数 （R2）最低检出限 (LOD)/ng最低检出浓度 (LOQ) / g/g二烯烟碱0.3-6.0Y=1.416X+0.000010.99990.180.030 2,3-联吡啶0.3-6.0Y=1.514X-0.000040.99910.180.030 可替宁0.3-6.0Y=1.396X-0.000040.99990.200.0357.4 样品测定 按照色谱分析条件（7.2）测定样品（7.1）中微量生物碱的含量。根据保留时间定性，同时，根据 样品色谱图中化合物峰面积和内标峰面积计算得出样品溶
11、液中的微量生物碱的浓度（g/mL）。 混合标准溶液和样品溶液色谱图参见附录A。 7.5 结果的计算与表述 7.5.1 样品中微量生物碱含量的计算 以干基计的微量生物碱含量，由式（1）得出：c Vw= A A m m (1-(1-w w1 1) )（1 ）式中： w样品中各种微量生物碱的含量，单位为微克每克（g/g）； c样品溶液中各种微量生物碱的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V萃取溶液的体积，单位为毫升（mL）； A稀释倍数； m样品质量，单位为克（g）； w1样品水分的质量分数。 7.5.2 结果的表达 以两次平行测定值的平均值作为样品的测定结果，结果精确至0.01 g/g。平行测定
12、结果之间的相 对平均偏差不应大于5%。8 8 精密度和回收率本方法的精密度测定结果和回收率见表2。表2 方法的回收率和精密度浓度/g/g生物碱名称原含量添加值测量值添加回收率 (R) /%相对标准偏差 (RSD)/%二烯烟碱12.05.017.6103.51.2DBXX/ XXXXXXXXX410.021.899.11.0 5.016.898.83.22,3-联吡啶12.010.021.999.52.2 5.015.999.43.6可替宁11.010.021.2100.91.99 9 检测报告检验报告应包括以下内容： 识别被测样品需要的所有信息； 参照本标准所使用的试验方法； 检测结果，包括各单次测定结果及其平均值； 与本标准规定的分析步骤的差异； 在检测中观察到的异常现象； 检测日期； 检测人员。DBXX/ XXXXXXXXX5A A附 录 A （资料性附录） 色谱图下图1为烟草中三种微量生物碱的混合标样（A）和实际烟草样品（B）色谱图。05101520250100200300400500600uA保保留留时时间间/minA123IS0510152025050100150200250300uA保保留留时时间间/minB1 23IS图1 A为三种烟草微量生物碱标样色谱图；B为样品色谱图（图中：IS为内标喹啉；1为二烯烟碱； 2为2,3-联吡啶； 3为可替宁）
