《艾滋病检测技术规范2009年版hiv抗体检测章节(2010年9月)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《艾滋病检测技术规范2009年版hiv抗体检测章节(2010年9月)（39页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、艾滋病实验室检测技术规范行业标准:艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准 WS298-2008 技术规范:全国艾滋病检测技术规范（2009年修 订版）HIV抗体检测HIV抗体检测的目的nHIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛 查：n以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及 其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般 人群。n以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况， 包括临床检测、自愿咨询检测、术前检测、根据特 殊需要进行的体检等。n以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV， 包括献血员筛查和原料血浆筛查。HIV抗体检测的目的1、根据目的选择检测方法及检测策略。 2、严格遵守实验
2、室SOP。 3、筛查试验阳性，须作确证实验。 4、筛查试验阴性，不应做确证实验。 5、筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。HIV抗体检测的要点以诊断为目的的检测策略n常规HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和 复检）和确证试验筛查试剂n必须是经国家食品药品监督管理局注 册批准、在有效期内的试剂，其中酶 联免疫试剂应批批检合格。推荐使用 临床质量评估敏感性和特异性高的试 剂。筛查样品nHIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干 血斑、唾液和尿液样品。筛查方法n酶联免疫吸附试验（ELISA）n化学发光或免疫荧光试验n快速检测（RT）及其它检测试验明胶颗粒凝集试验(PA)免疫渗滤试验免疫层析试验(1)酶
3、联免疫吸附试验（ELISA）n可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。酶联免疫吸附试验（ELISA）n优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存n用途：流行病学监测及临床大量标本的检测(2)化学发光或免疫荧光试验n采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联 合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相 载体，加入待检样品和酶或
4、荧光标记的HIV抗 原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光 仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须 符合试剂盒规定。 (3)快速检测（RT）及其它检测试验n明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法 。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检 样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集 情况判读结果。PA试剂有两种：同时检测HIV-1和HIV-2抗体以 及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质 控。n免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速 试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加
5、待 检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在 10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。n免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上 ，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上 抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。优点:试验简便快速，不需专门设备和人员 培训,适用于应急检测、门诊急诊检测。 一般可在1030分钟内得出结果。缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不 易保存。全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果硒标法图示筛查程序初筛试验n根据检测目的选用符合要求的筛查试剂 对样品进行初筛检测，n对
6、呈阴性反应的样品，可出具HIV抗 体阴性（-）报告；对呈阳性反应的 样品，需要进一步做复检试验和确证 试验。筛查程序复检试验n对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一 种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理 或不同厂家的试剂进行复检试验。n如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包 括一种抗原抗体联合试剂。n如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂 检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核 酸检测，必要时进行随访。 n艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品， 确证实验室可以直接进行确证试验。样 样 品品初筛试验初筛试验一阴一一阴一阳阳均阳性反应均阳性
7、反应报告阴性报告阴性确证试验确证试验复检试验复检试验报告阴性报告阴性均阴性反应均阴性反应阳性反应阳性反应原有试剂另一原有试剂另一 不同原理（或厂家）不同原理（或厂家） 试剂或另外两种不同试剂或另外两种不同 原理（或厂家）试剂原理（或厂家）试剂选用筛查试剂选用筛查试剂阴性反应阴性反应HIVHIV抗体筛查检测流程图抗体筛查检测流程图筛查程序筛查试验结果的报告nHIV抗体初筛试验用附表1进行报告，阴性反应 报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告 为“HIV抗体待复检”。nHIV抗体复检试验用附表2进行报告，两次检测 均阳性或一阴一阳报告为 “HIV抗体待确证” ；两次检测均阴性报告为“HIV抗
8、体阴性（-） ”。筛查程序筛查试验呈阳性反应样品的转送n如需送上级实验室进行复检，需要核对身份， 补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要 时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送 当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实 验室复检。nHIV抗体复检试验用附表2 进行报告，两次检 测均阳性或一阴一阳报告为 “HIV抗体待确证” ；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）” 。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审 核人员签字。HIV抗体确证试验确证试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、 在有效期内的试剂。确证样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑确证方法：包括免疫印迹试验(WB)、
9、条带免疫试验 (LIATEK HIV)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免 疫荧光试验(IFA)。国内常用的确证试验方法是WB。确证流程 n使用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV 抗体阴性（）；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性（ ）；如果不是阴性反应，但又不满足阳性判断标准，则报告HIV 抗体不确定（）。n结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或 呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳 性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到 8周。n8周后如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳 性诊断标准则报
10、告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否 继续随访。n随访期间可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。n如果出现HIV-2型的特异性指示条带，根据实际情况需用HIV-2型 免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确证试验或HIV-2核酸检测，以进 一步明确HIV-2感染状态，疑难样品送国家艾滋病参比实验室进 一步分析。HIV抗体确证检测流程图确证试剂筛查试验阳性反应样品根据具体情况进一步 检测HIV-2报告阴性出现HIV-2指示条带阴性反应不确定反应报告HIV-1 阳性HIV-1 阳性反应结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应， 则报告阴性；如随访期间出现阳性反
11、应，则报告阳性；如随访期间带型有进展， 但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告 阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况 决定是否继续随访。HIV抗体确证试验结果的判定注：nHIV-1抗体特异带包括：nenv带：gp160/gp120、gp41；ngag带：p55、p24、p17（或p18）；npol带：p66（或p65）、p51、p31。nHIV-2抗体特异条带包括：nenv带：gp140/gp105、gp36；ngag带：p56、p26、p16；npol带：p68、p53、p34。n（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为
12、 gp125/gp80、gp36）。HIVHIV抗体确证实验结果抗体确证实验结果a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应a b c d a b c dgp160gp160 gp120gp120p66 p66 p55p55 p51 p51 gp41gp41 p39p39p31 p31P24P24p17p17血清对照血清对照 HIV-2HIV-2特异带特异带HIV抗体确证试验结果的判定 n（1）HIV-1抗体阳性n同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体 阳性：n至少有2条env带（gp41和 gp160/gp120）出现，或
13、至少1条env带 和p24带同时出现；n符合试剂盒提供的阳性判定标准。n试剂盒提供的阳性判定标准是2条env（ Gp160/gp41gp120）and pol（p66 、p51、p31） or gag（p55、p24、p17）n Gp160 gp120 p66/p51/p31/p55/p24/p17n或 Gp41 gp120 p66/p51/p31/p55/p24/p17Gp160 gp120 p24HIV抗体确证试验结果的判定n（2）HIV-2抗体阳性n出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时 呈HIV-1抗体阳性反应，报告HIV-1抗体阳性， 不推荐进一步做HIV-2抗体确证试验；如果
14、同 时呈HIV-1抗体不确定或阴性反应，需用HIV-2 型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。n同时符合以下二条标准，即出现至少2条env带 （gp36和gp140/ gp105），和试剂盒提供的阳 性判定标准，可判为HIV-2抗体阳性。HIV抗体确证试验结果的判定n3）HIV抗体不确定n出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳 性。n（4）HIV抗体阴性n无HIV抗体特异带出现。HIV抗体确证试验结果的判定HIV抗体确证试验结果报告HIV抗体确证试验结果用附表3报告。n（1）符合HIV-1 /HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV -1/HIV-2抗体阳性（）”，并按规定做好检测后咨询 、保
15、密和疫情报告工作。n（2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性 （）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核 酸检测，尽早明确诊断。n（3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不 确定（）”，在备注中应注明“4周后复检”。n发出确证报告的同时要做好检测后咨询。nHIV抗体确证报告由检测者，复核人员和签发人员签字 后，按原送检程序反馈一式三份（确证实验室一份、 送检单位一份、患者一份）。如确证对象户口不属于 本辖区，确证报告应同时抄送感染者户口所在地的省 艾滋病确证中心实验室。其它系统确证的地方人员， 也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确证中心实 验室报告。n省艾滋
16、病确证中心实验室难以确证的样品，送国家艾 滋病参比实验室确证。同一受检对象的样品在不同实 验室得到不一致的确证结果时，由国家艾滋病参比实 验室予以仲裁。VCT替代检测策略n除上述常规检测程序以外，对HIV高流行地区 高危人群的VCT检测，可采用替代策略。使用要求n使用替代策略，应在确证中心实验室和确证实 验室或以上实验室指定的筛查实验室进行，用 临床试剂质量评估敏感性和特异性高的筛查试 剂检测。使用该策略判断结果，阳性报告须由 确证中心实验室和确证实验室或以上实验室认 可的筛查实验室出具。送检样品阳性反应阴性反应筛查试剂 1（高敏感性 ）阳性反应阴性反应筛查试剂2（高特异性 ）S/CO6.0S/CO 1.0
