朝鲜蓟组培快繁技术规程

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1、-182-朝鲜蓟组培快繁技术规程吴亚飞1，王中美1,2，张平喜1，王 桢1，李树举1，周 娟1，刘小兵1，刘会桃1(1. 常德市农林科学研究院，湖南 常德 415000；2. 湖南农业大学，湖南 长沙 410038)摘 要：规程规定朝鲜蓟组培快繁的主要仪器设备、生产环境及设备消毒灭菌、组培育苗和档案管理等。 关键词：朝鲜蓟；组织培养；繁殖；技术规程朝鲜蓟 (Cynara scolymus L.) 是菊科 (Comopsite) 菜蓟属中 1 种多年生草本宿根植物1，起源于地中海沿岸国家2，栽培历史悠久3。因其营养丰富且植株内含有可观的洋蓟素和绿原酸等功能性成分4，而被人们当作 1 种药食同源的

2、蔬菜，在全世界享有 “蔬菜 之王”的美称5,6。在生产上，朝鲜蓟主要以宿根留兜、分株、扦插 等无性繁殖为主，但长期的无性繁殖导致病毒病发生 严重7。而且，在亚热带季风气候的国家，植株无法越夏，不能留兜也无法生产出种子8。因此，利用组织培养技术繁殖朝鲜蓟，不仅可以大量生产无病毒 苗，而且成本较低9。本规程利用朝鲜蓟易分蘖的特点，直接通过茎尖产生不定芽，对外植体消毒方式、 基本培养基筛选和不定芽的初代培养、继代增殖以及 生根等进行研究，于 2012 年获得成功。通过近几年 的优化试验结合大田的试验示范，总结出一套可行的 技术方案。为了大力推广应用朝鲜蓟组培快繁技术， 进一步规范朝鲜蓟组培育苗技术，

3、起草了该规程，并 通过湖南省质量技术监督局发布实施。 该规程的制订与发布实施，有利于提升朝鲜蓟组 织培养技术水平，为广大蓟农提供优质实惠的组培 苗，减少生产成本，切实增加农民收入，有利于发展 现代农业，建设社会主义新农村及推进朝鲜蓟组培快 繁技术的规范化、标准化。 1 主要内容与适用范围1.1 主要内容 本标准规定了朝鲜蓟组培快繁的主要仪器设备、 生产环境及设备消毒灭菌、组培育苗和档案管理等 内容。1.2 适用范围 本标准适用于朝鲜蓟的组培快繁技术标准管理的 全过程。第一作者简介：吴亚飞 (1967-)，女，农艺师；主要从事朝鲜蓟、马铃薯等作物的组织培养研究。2 规范性引用文件下列文件对于本文

4、件的应用是必不可少的。凡是 注日期的版本适用本文件。 凡是不注日期的引用文件， 其最新版本 ( 包括所有的修改单 ) 适用于本文件。 GB4285 农药安全使用标准。 GB/T8321 农药合理使用准则 ( 所有部分 )。 NY/T496 肥料合理使用准则 通则。 3 主要仪器设备3.1 灭菌设备 高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外灯、烘干 箱等。3.2 接种设备 超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、钢丝架、酒 精灯等。3.3 培养设备 250ml 培养容器瓶 ( 罐头瓶 )、培养架、空调、 照明灯管。3.4 试验设备 电子天平 (0.01mg)、冰箱、pH5.0 7.0 精 密试纸或酸度计、温湿度

5、表、照度计、烧杯、试剂 瓶、量筒、容量瓶、移液枪或移液管等。 4 生产环境及设备消毒灭菌4.1 接种室消毒灭菌 每月用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸。薰蒸时，房间 关闭紧密，用甲醛 (10ml/m3) 和高锰酸钾 (5g/m3) 熏蒸 2 3d，通风无味后 2 3d 人员方可进入。 接种前用紫外灯照射 30min。4.2 培养室消毒灭菌 每月用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸，方法同 4.1。4.3 超净工作台的消毒灭菌 接种前用紫外灯照射 30min，并用 75% 酒精擦 拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。4.4 接种器具的消毒灭菌 使用前将镊子、解剖剪、接种纸、解剖刀进行高 温蒸汽消毒，接种过程中采用酒精灯

6、灼烧消毒。-183-中国园艺文摘 2018 年第 1 期5 组培育苗5.1 培养基制备5.1.1 母液配制及保存 选用化学纯或分析纯的 化学药品，根据 MS 培养基配方，分别配制大量元素 (20 倍 )、微量元素 (100 倍 )、铁盐 (100 倍 )、有机物 (100 倍 )、植物生长调节物质 (0.1 0.5mg/ml) 等 化合物的母液 ( 参见附录 A 和附录 B)，将母液保存 在 4的冰箱里。5.1.2 培养基配制 根据培养基配方需求，每 1L 培养基中分别加入琼脂粉 (5.5g)、白糖 (40g) 和各 类母液，依次溶解于蒸馏水，定容后用 0.1moL/L HCl 或 0.1mo

7、L/LNaOH 溶液调节 pH 值 5.6，定 量分装至培养瓶中并封口，制备成培养基，备用。5.1.3 培养基灭菌 瓶装培养基在10h内完成灭菌， 灭菌方式采用高压蒸汽灭菌，在压力 0.105MPa、 温度 121条件下灭菌 20 30min。锅内的灭菌物 以不超过锅的容量 3/4 为宜，高压灭菌时锅内使用蒸 馏水。5.1.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室， 常温条件下 7d 内使用， 2 4条件下 14d 内使用。 培养基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘。5.2 外植体接种5.2.1 外植体的选择 选择农艺性状好、无病毒的 朝鲜蓟分蘖芽。采样时间选择晴天或露水干后采集。5.2.2

8、外植体消毒 将外植体用流水冲洗干净，用 刀片削去茎尖周围的叶片和组织，留取 3 4cm 的 芽备用。将备用芽用 75% 酒精消毒 10s，再用 0.1% HgCl2(每1000ml该溶液加2滴吐温80)浸泡8min， 最后用无菌水冲洗 5 6次。5.2.3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割， 留取 0.5cm，接入培养基中。茎在接种前用手术剪 刀剪去两端，长 1.0 2.0cm。5.2.4 外植体接种 操作时，先将培养瓶的封口膜 取下，放在一边，将培养瓶口在酒精灯外焰上旋转灼 烧消毒。将枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后， 将外植体接种到培养基中，每个培养瓶放 3 个外植 体，接种后盖上封

9、口膜，并标注日期。5.3 组培苗培养条件 培养室的温度为 23 27，相对空气湿度为 70% 75%，光照强度为 2000 3000Lx，光照 时间为 16h/d。5.4 诱导分化与增殖5.4.1 丛生芽的诱导 备用芽段上下两端各去掉 少许部分，留取 0.5cm 左右的茎尖，按照正常生长方向接入在 EM1 培养基 ( 参见附录 C) 中诱导丛生芽。培养过程中培养基消耗过多或褐化严重可以转接1 次，培养基不变。外植体接种 3 5d 后，切口处膨大，茎尖开始变绿、伸长；10 15d 后，腋芽开始萌发、伸长；30d 后，形成至少 8 个叶片的幼苗。5.4.2 丛生芽的增殖 将 5.4.1 诱导出的

10、2cm 长 的丛生芽从基部切割成带 2 3 片叶的芽块，剔除褐化的组织，并转入增殖培养基 EM2( 参见附录 C) 培养基中扩繁。接种 7d 左右，腋芽开始分化；15d 左右，既可以形成丛生芽，平均 20d 继代 1 次，增殖系数为4.5 左右。5.5 壮苗生根将朝鲜蓟丛生芽块中 1.5cm 以上芽切割下来，转入生根培养基 EM3( 参见附录 C) 中进行壮苗生根培养。接种7d左右，茎段基部根原基突起；15d左右，从根原基长出不定根，平均每株 3 5 条，平均长度1.5cm，生根率 80% 左右。5.6 炼苗5.6.1 炼苗标准 当幼苗发育到 2 3 片叶、 3 5 条根，叶片长约 1 2cm

11、、根长 0.5 1cm 时，即可进行炼苗处理。5.6.2 组培苗驯化 将装组培苗的培养瓶从培养架 上取下，转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在 23 27，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，以保湿降温，封口炼苗 1 2d。5.6.3 开瓶锻炼 封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注 入超过培养基表面 0.5cm 高的自来水，温度控制在23 27，2 4d 后即可移栽。5.7 移栽5.7.1 基质准备 栽培基质采用蛭石珍珠岩细 沙按 1 1 1 的混合物，新基质不需要消毒，使用过的基质用 2000 倍高锰酸钾溶液浸泡 12h。使用 128孔盘种植幼苗。5.7.2 移栽种植 移栽前，用自来水把根系上的

12、培 养基冲洗干净，用 1000 倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再栽入已准备好的基质中。 栽后将基质浇透水，随即拱膜保湿，7 l0d 后揭膜通风炼苗。5.8 病虫害防治苗期立枯病育苗前使用 0.05% 炭疽福美作药土防治，或 50% 多菌灵、70% 甲基硫菌灵等作药土防-184-治，每 1m2用药 8 9g；幼苗发病前期喷药防治， 选用 70% 土菌消 ( 恶霉灵 ) 可湿性粉 1000 倍液，或 70% 甲基硫菌灵可湿性粉剂 800 倍液喷雾防治，隔 周喷施，共喷 2 次。蚂蚁防治在育苗床周边撒 1 圈 百虫灵等驱蚁药即可。农药使用应符合 GB42

13、85 和 GB/T8321( 所有部分 ) 的规定。5.9 大田移栽标准 当苗高 8 10cm、叶片数 3 4片时，带基质 移栽到大田。肥料使用应符合 NY/T496 的规定。参考文献：1 韩嘉义,袁唯,韩曙.名优西菜朝鲜蓟的引种栽培与开发 J.云南农业科技,1995,(5):11-13. 2 张学才,施立聪,张作焕等.朝鲜蓟引种栽培初报J.中 国蔬菜,1994,(1):45-46. 3 张红梅.朝鲜蓟及其栽培技术J.吉林蔬菜,1997, (2):23-24. 4 Gebhardt,R.Inhibition of cholesterol biosynthesis in HepG2 cells

14、by artichoke extracts is reinforced by glucosidase pretreatmentJ. Phytother.Res.2002,16(4):368-372. 5 白雪,张建丽,何洪巨.朝鲜蓟的营养与保健功能J.中 国食物与营养,2005,(11):47-49. 6 樊伟芳,唐忠厚,陆国权.高营养保健蔬菜朝鲜蓟 J.中国种业,2006(8):56-57. 7 Giovanni L. Micropropagation of globe artichoke(Cynara scolymus)from underground dormant buds (“OVOLI”) J.In Vitro Cellular landscape; satisfaction; horticultural healing