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1、执行标准号: YZB/JAP 028-2005产品注册号:1005871001-034C 2004 年 3 月修订体外诊断试剂 2003 年 3 月修订2001 年 12 月制成许可号（02E）第 0052 号STE-test（TOSOH）（IRI）免疫反应试剂EIA 法检测血清及肝素血浆中胰岛素（IRI）浓度所需的检测试剂胰岛素（Insulin）是由胰脏 细胞分泌的一种多肽类激素，其是由 51 个氨基酸组成的，分子量为 5700；结构上是由 A 链和 B 链通过-S-S-链间二硫键结合而成，并且 A 链内存在一个链内二硫键。在检查糖代谢异常及糖尿病时，通常都是检测血液中葡萄糖浓度；但是，胰岛
2、素是与糖代谢相关的重要激素，因此检测血液中的胰岛素浓度对由糖尿病及糖代谢异常引起的疾病的诊断、病态分析、二次性糖尿病的鉴别和低血糖症的诊断都是有效的。特征特征1、 应用 AIA 全自动免疫分析装置（AIA-1200 系列以及 AIA-600 除外） ，短时间内能够实现自动检测。 （抗原抗体反应时间约为 10 分钟） 。2、 检测中使用的是高亲合性抗胰岛素（IRI）抗体，并采用一步 EIA 夹心法。3、 抗 IRI 的单克隆抗体和酶标记的抗 IRI 单克隆抗体均以冻结干燥状态密封贮存于试剂Cup 中，使用时不需要配制。4、 从抗原抗体反应到荧光检测均在专用的试剂 Cup 中进行，污染的可能性很小
3、。5、 不使用放射性同位素，因此不需要特殊的设备。成分成分E-test（TOSOH）（IRI）免疫反应试剂每 20 个试剂并排放于一个试剂板上，并保存在铝制的防湿袋中。每次检测所用试剂主要包括以下几种：抗 IRI 鼠单克隆抗体固定化微球 8 个抗 IRI 鼠单克隆抗体碱性磷酸酶联标记结合物 100ul 作用作用血清或血浆中胰岛素（IRI）浓度的检测检测原理检测原理该方法是使用两种特异性抗体的一步 EIA 夹心法。固定在磁性微球上的抗 IRI 抗体和碱性磷酸酶联标记的抗 IRI 单克隆抗体都是以冰冻干燥状态密封在试剂 Cup 中的。在该试剂 Cup 添加缓冲液和样品后，冰冻干燥的试剂开始溶解，抗
4、原抗体反应随即发生。在一定温度下孵育一段时间后，用洗脱液将游离的酶联标记抗体和样品成分除去（BF 分离） 。之后，为了检测结合在磁性微球上的酶活性，添加酶底物磷酸-4-甲基伞形酮；通过检测酶反应产物荧光物质的生成速度确定血清或肝素血浆中的 IRI 的浓度。使用方法使用方法在使用本品检测血清或肝素血浆中 IRI 浓度时，请与下列试剂组合使用。另外，除本 使用说明书外请参照其它相关说明。 E-test（TOSOH）（IRI）标准品试剂盒E-test（TOSOH）（IRI）样品稀释液 E-test（TOSOH）基质试剂盒 （标签上有粉红色“SUBII”标志）E-test（TOSOH）洗脱液E-tes
5、t（TOSOH）缓冲液在使用 AIA 全自动酶联免疫分析装置的时候请参考装置的使用说明书。1、 试剂的配制方法及配制后的贮存方法、使用期限1） 免疫反应试剂请将 E-test（TOSOH）（IRI）免疫反应试剂从密封的防湿袋中取出，开封后在 15-25下放置可以保存一天，在 2-8下放置可保存七天。2） 样品稀释液E-test（TOSOH）（IRI）样品稀释液是液体，开封后即可使用。开封后密封放置在2-8下可以保存七天。 3）标准液E-test（TOSOH）（IRI）标准品（1）是液体，开封后请吸取适当量添加到样本 Cup中。E-test（TOSOH）（IRI）标准品（2）-（6）都是冰冻干燥
6、品，使用前各自用 1.0 毫升蒸馏水溶解。配制后如果密封保存于 2-8下可以保存 1 天。E-test（TOSOH）（IRI）标准品的浓度以 WHO 规定的胰岛素国际标准品（WHO 2nd IRP 66/304）为标准。4） 基质液每瓶 E-test（TOSOH）基质液用 100 毫升 E-test（TOSOH）基质溶解液配制。配制后避光放置在 15-25下放置可以保存三天，在 2-8下放置可保存七天。注意避免日光及紫外线直射。5）洗脱液每瓶 E-test（TOSOH）洗脱液用适量的蒸馏水稀释到 2.5 升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在 15-25下可以保存 30 天。6） 缓冲液每
7、瓶 E-test（TOSOH）缓冲液用适量的蒸馏水稀释到 5 升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在 15-25下可以保存 30 天。2、检测操作方法1） 从铝片保护层中取出 E-test（TOSOH）（IRI）免疫反应试剂 Cup。2） 在试剂 Cup 中加入 100 微升缓冲液和 50 微升标准品或稀释后的样品溶液，在磁石磁珠振动器上搅拌，在 37下使抗原抗体反应进行 10 分钟。3） 用洗脱液冲洗试剂 Cup，除去其中游离的酶联标记抗体和样品成分（BF 分离） 。4） 加入基质液后，在磁石磁珠振动器上搅拌同时用荧光检测器检测荧光物质的荧光强度，激发波长 363nm，荧光吸收波长 44
8、7nm，并计算出荧光物质的生成速度。5） 根据标准液检测绘制的荧光物质生成速度标准曲线，计算出样品中 IRI 的浓度。6） 如果检测结果超过 320U/mL 时，要用样品稀释液提高稀释倍数重新稀释，并按照（1-5）步骤检测。操作上的注意事项操作上的注意事项1、样品必须使用新鲜的血清或肝素血浆，且请不要使用除肝素血浆以外的血浆。取血清及肝素血浆样品时请注意操作以免发生溶血。样品要避光保存在 2-8，或在-20冰冻保存。2、 当样品中含有 EDTA 或柠檬酸存在时检测结果会偏低。3、 避免多次进行冰冻样品冰冻溶解操作。4、 在使用 E-test（TOSOH）（IRI）样品稀释液稀释样品时请充分混匀
9、。检测结果的判定方法检测结果的判定方法应用 E-test（TOSOH）（IRI）标准品试剂盒绘制标准曲线，从曲线中计算出样品中IRI 的浓度。对于检测结果的判定，其标准值由各单位各自设定。在进行临床诊断时，要考虑到其他检测结果及临床症状并给予一个综合的判断。为了提高检测结果的精确度，在检测样品时请同时测定市售管理血清的 Control。使用全自动酶联免疫分析装置 AIA-21 检测所得的标准曲线如下(见原稿说明书)所示。性能及相关性性能及相关性1、灵敏度1）E-test（TOSOH）（IRI）标准品（1）的荧光单位（FU，Rate）在 8nmol/（L.s）以下。2）测定 E-test（TOS
10、OH）（IRI）标准品（1）和 E-test（TOSOH）（IRI）标准品（6）的 FU，并计算 IRI 浓度，FU 差值与 IRI 浓度之比是 0.2-1.8nmol/（L.s）/U/mL。注释：FU 之比由以下公式计算：FU 之比=（A-B）/CA：标准品（6）的 FU nmol/（L.s）B：标准品（1）的 FU nmol/（L.s）C：标准品（6）的 IRI 浓度 U/mL2、特异性检测已知 IRI 浓度在 10-260U/mL 范围的 Control 时，其检测结果在 10020%以内。注释：Control 是以 TOSOH IRI 标准品做对照，用 E-test（TOSOH）（IR
11、I）检测，从而得到检测结果。3、重复性同时检测胰岛素浓度在 10-260U/mL 范围的同一 Control 10 次，其检测结果的变动系数在 15%以下。4、检测范围：1.0-320U/mL以标准品（1-6）的检测结果绘制成标准曲线，从标准曲线中推测出标准品（1）的 FU平均值（Y 轴截距） ，以该平均值+2SD（10 次检测结果的标准偏差）作为检测下限，即1.0U/mL。抗原浓度过高会影响检测结果，但当其浓度在 20000U/mL 以下时不会发生上述情况。 5、干扰物质在检体标本中如游离胆红素、饱和胆红素、脂质、白蛋白、抗坏血酸以及肝素的浓度分别低于 17mg/dl、18mg/dl、166
12、0mg/dl、50 mg/ml、20mg/dl、100U/ml 时上述物质几乎不会影响检测结果。其中，血红蛋白对浓度特低样本的检测是有影响的。对于溶血样本，因为红血球内存在胰岛素分解酶，在该酶的影响下使检测结果偏低，因此请避免使用溶血样本。 6、 相关性本方法（y）与本公司 EIA 法（x）的相关性如下所示：y=0.961x-0.141r=0.996n=47其中，用本方法检测讨论肝素血浆（y）和血清（x）的相关性，其结果如下：y=0.975x-0.704r=0.999n=917、参考标准范围分析 200 例健康者血清中 IRI 浓度的检测结果，所得的参考标准范围是小于 1.1-17.0U/mL
13、。其中，参考标准范围因为很容易受其他各种因素影响，所以希望各单位自行设定。SI 单位的变换单位的变换本说明书中 IRI 的浓度是以 U/mL 表示的，变换到 SI 单位的 mU/L 要用以下关系式：mU IRI/ L =U IRI/mL1.0注意事项注意事项1. 本品是一种体外诊断用试剂，禁止以其他目的使用。2. 试剂超过有效期限请勿使用。3. 试验仪器的污染对检测结果的判断有一定影响，所以请洗净试验仪器后再进行检测。4. 因为本品中含有的作为保存试剂的叠氮化钠，因此试验中如不慎进入眼睛、口中或沾到皮肤上的时候，请采取应急措施用流水充分冲洗；必要时请求助医生处理。另外，叠氮化钠与铅和铜可发生反
14、应生成有爆炸性的金属叠氮化物，因此，检测结束后请将试剂用大量水稀释后废弃。5. 已经确认该试剂盒对 HBS抗原、HIV 抗体及 HCV 抗体呈阴性，但仍请使用者注意使用以免意外。6. 沾有标准品和样品溶液的手套等试验器具及检测结束后的试剂 Cup 要用高压灭菌锅在120下处理 15 分钟灭菌后废弃。7. 本产品是血清或肝素血浆中 IRIl 的检测用剂，请不要用于其它样品的检测。其中，血浆请用肝素血浆。8. 如果样本中有 HAMA（Human Anti-mouse Antibody）时，在使用鼠单克隆抗体的检测系统中不能得到正确的结果。9. 对于含有胰岛素自身抗体的患者样本，检测中不能得到正确的
15、检测结果。10. 本产品不能用于 AIA 全自动免疫分析装置 AIA-1200 系列及 AIA-600。贮存及有效期限贮存及有效期限请避光保存于 2-8。有效日期见试剂盒、防潮袋或 Cup 板的标签。包装规格包装规格100 次检测用量（20 试剂 Cup/板5） 。主要文献主要文献、 丰田隆谦、石塚仁、小野利夫、佐佐木雅佳：胰岛素，日本临床（增刊） ， ，（） 、 松田文子、葛谷健：胰岛素、胰岛素原、C 肽、激素与临床（夏季增刊） ，63，152- 163（1980）、 中川昌一：胰岛素、如何读解其数值，日本临床（增刊） ，31，1636-164491973). 、 葛谷健：血液中胰岛素测定法和其动态，糖尿病学的进步，第一集（诊断和治疗社）, 17-33(1967). 、 赤沼安夫、山东博之：血浆胰岛素，临床检查,Mook No.18 70-88(1984).（文献申请单位）105-8623 东京都港区芝 3-8-2东曹株式会社 科学计量事业部电话：（03）5427-5181传真：（03）5427-5220制造商东曹 AIA 有限公司富山县富山市岩濑古志町番
