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1、 2 4 肿瘤研究与临床 2 0 1 4年 1月第 2 6卷第 1 期C a n c e r R esear c h a n d C l i n i ! ， 盟 ! ! ： ! s i R N A 沉默结肠癌转移相关基因 1 表达对 人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响 李祯 生秀杰 孙曼 汪志辉 刘启才 【 摘要 】 目的检测结肠癌转移相关基因 1 ( M A C C 1 ) 在卵巢癌细胞株中的表达， 并探讨用 s i R N A 技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法应用实时荧光定量 P C R ( R T q P C R) 及 We s t e r n b l 0 t 法检测 O V
2、 C A R 3 、 E S 一 2 、 S K O V3 、 HO 一 8 9 1 0卵巢癌细胞株中 M A C C 1的表达 ， 合成 MA C C1 特异 性 s i R N A并转染 O VC A R 3细胞 ，利用 R T q P C R筛选并鉴定 MA C C 1 基因有效沉默后，应用体外黏附实 验、 T r a n s w e u迁移及侵袭实验、 体外血管拟态实验检测 MA C C 1 基因沉默后 O V C A R 3细胞的体外黏附 、 迁 移、 侵袭及血管生成能力的变化。 结果O V C A R 3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达 MA C C 1 。 M A C C 1 基因
3、沉默后 ， O V C A R 3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制 ； T r a n s w e l l 迁移实验中， MA C C1 s i R N A干扰 的O V C A R 3细胞 ( 干扰组 ) 转入底层膜的细胞数为f 2 4 5 51 2 8) 个 ， 低于阴性对照组和空白对照组【 分 别为( 5 0 0 31 6 5) 、 ( 4 9 6 3 1 3 1 ) 个 ， 均 P0 0 5) ； 细胞培养 9 0 mi n后 ， 干扰组 的 A值 为 0 4 00 0 3 ， 而阴性对照组及空 白对照组分别 为 0 5 40 0 3 、 0 5 30 0 5 。干扰组与 阴性对照
4、组 、 空 白对照组问差异具有统计学意 义 ( t =9 5 8 ， t =1 0 3 3 ， 均 P0 0 5) 。 2 4 s i RNA 转 染后 OV CA R _ 3细胞 侵 袭及 迁 移 能力的改 变 T r a n s w e l 侵袭实验中， 空白对照组、 阴性对照组、 干 扰 组 迁 移 的 细 胞 数 分 别 为( 4 1 6 31 1 5) 、 ( 4 0 5 79 1 ) 、 ( 1 8 5 31 4 1 ) 个 ， 干扰组 与阴性对照 组 、空 白对照组 比较 ，差 异具有统计学意 义( t = 2 8 2 4 ， t =2 6 2 3 ， 均 P 0 0 5 ) (
5、 图 3 ) 。 T r a n s w e 1 迁移实验 中， 空白对照组 、 阴性对照组 、 干扰 组穿 透基 底膜 的细胞数 分别为( 4 9 6 -31 3 1 ) 、 2 8 。 肿瘤研究与临床 2 0 1 4年 1 月第 2 6卷第 1 期C a n c e r R e s e a r c h a n d C l i n i c ， J anu a r y 2 0 1 4 ， Yo 1 2 6 ， N o 1 段 ，建立 M A C C 1 表达下调的卵巢癌细胞株模型， 从 而分析卵巢癌细胞体外黏附、 侵袭 、 迁移及体外血管 形成能力 的变化 ，以揭示 M A C C 1在卵巢癌
6、发生 、 发 展 中的作用。本实验成功筛选 出 1对沉默效率高 的 M A C C 1 s i R N A， 应用脂质体转染法将其转染卵巢癌细 胞株 O V C A R 3 ，通过 R T q P C R证实此小分子干扰片 段能够有效地阻断 MA C C 1的表达。然后 ， 通过体外 黏附实验 、 T r a n s w e l l 侵袭及迁移实验 、体外血管形成 实验发现 ， 卵巢 癌细胞 中 MA C C 1沉默后 ， 其体外黏 附、 侵袭、 迁移、 血管生成能力均不同程度地减弱。上 述结果说 明 MAC C 1基 因在卵巢癌 中的高表达可能 是肿瘤细胞侵袭转移能力显著增加的重要原 因之一
7、 ， 与在其他肿瘤 中的报道一致 。S t e i n等 3 1 研究发 现 M AC C 1是 HG F C ME T信号转导通路 的重要调节 因 子 ， H G F可诱导 MA C C 1由细胞质转移 至细胞核 ， 从 转 录水平 上增强 C ME T的表达 ，进而激 活 HG F C M E T信号转导通路，而研究发现此信号通路广泛存 在于多种肿瘤细胞 中。当 H G F与 C M E T特异性结合 后 ， 诱导 C M E T蛋白构象发生改变 ， 从而激活酪氨酸 蛋白激酶，被激活的酪氨酸蛋白激酶除使 C M E T自 身磷酸化外， 还可经过瀑布式的连锁磷酸化反应把信 号逐级放大 ， 从
8、而促进肿瘤新生血管形成 、 抑制细胞 凋亡 、 提高肿瘤细胞 的侵袭转移力口 3 1 。C ME T下游信 号通 路 包括 N o t c h通 路 、 H y p o x i a通 路 、 Wn t 通 路及 MA P K等 ， 目前研究发现只有 MA P K通路抑制剂可 以 抑 制 MA C C 1协 同 H G F诱 导 的 细胞 播 散 。 同时 ， M AC C 1 本身可以通过此通路上调其表达。由此说明， M A C C 1 可通过激活 C M E T ，从而使 M A P K下游信号 通路活化 ， 发挥生物学作用。但 M A C C 1 如何调节 C ME T的具体机制尚未清楚。
9、 结合目前研究成果， M A C C 1 可能成为肿瘤转移 及复发 的一个临床指标 ，是肿瘤治疗 的一个 良好靶 点 ， 为卵巢癌的基 因治疗提供 可能 ， 但其相关生物学 机制及在卵巢癌治疗中的应用价值尚待进一步探讨。 参 考 文 献 1 T ang L ， Ya n g J ， N g S K ， e t a 1 A u t o a n t i b o d y p r o fi l i n g t o i d e n t i f y b i o ma r k e r s o f k e y p a t h o g e n ic p a t h w a y s i n mu e i n o
10、u s o v a r i an c a n c e J Eu r J Ca n c e r ， 2 01 0 ， 4 6 ：1 7 O 一 1 79 2 Z h a n g J ， T ang L ， S h e n L ， e t a 1 H i g h l e v e l o f WA VE 1 e x p r e s s i o n i s a s s o c i a t e d wi t h t u mo r a g g r e s s i v e n e s s a n d u n f a v o r a b l e p r o g n o s i s o f e p i t h
11、e l i a l o v a r i a n c a n c e r J G y n e c o l O n c o l ， 2 0 1 2 ， 1 2 7 ： 2 2 3 2 3 0 3 S t e i n U， Wa h h e r W，A r h F ，e l a 1 MAC C1 ，a n e w l y i d e n t i fi e d k e y r e g u l a t o r o f H G F - ME T s i g n a l i n g ， p r e d i c t s c o l o n c anc e r me t a s t a s i s J Na t
12、 Me d 2 0 0 9 1 5 ： 5 9 6 7 4 K o k o s z y fi s k a K ， K r y fi s k i J ， Ry c h l e w s k i L e t a 1 U n e x p e c t e d d o m a i n c o m p o s i t i o n o f MA C C 1 l i n k s ME T s i gna l i n g a n d a p o p t o s i s J A c t a Bi o c h i m Po l ， 2 0 0 9 ， 5 6 ： 3 1 7 3 2 3 5 S h i r a h a
13、 t a A ，S a k a t a M，K i t a m u r a Y ，e t a1MA C C 1 a s a ma r k e r o r p e r i t o n e a l d i s s e m i n a t e d g a s t r i c c a r c i n o m a J An t i c ane e r R e s ， 2 0 1 0 ， 3 0 ： 3 44 1 3 4 4 4 6 S h i r a h a t a A，F a nW，S a k u r a b a K，e t a 1 MA C C 1 a s am ark e r f o r v a
14、s c u l arh e p a t o c e l l u t a r e are i n o n m J A n t i c a n c e r R e s 2 0 1 1 3 1 ： 7 7 7 - 7 8 0 7 Q i u J ， H u a n g P ，L i u Q ，e t a 1 I d e n t i fi c a t i o n o f MAC C 1 a s a n o v e l p r o g n o s t i c m a r k e r i n h e p a t o e e l l u l ar c a r c i n o m a J J T r a n
15、s l Me d ， 2 0 1 1 ， 9 ：l 6 6 8 Z h a n g R T ， S h i H R， H u a n g H L e t a 1 E x p r e s s i o n s o f MA C C1 ，H GF ， a n d C me t p r o t e i n i n e p i t h e l i al o v a r i a n c a n c e r a n d t h e i r s i gn ific a n c e 咖 N an F a n g Y i K eD a Xu e X u eB an， 2 0 1 1 ， 3 1 ： 1 5 5 1 l 5 5 5 9 Z h a n g R，S h i H ，C h e n Z ，e t a 1 E f f e c t s o f m e t a s t a s i s a s s o c i a t
