《羟基红花黄色素A对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及VEGF表达的影响 (论文)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《羟基红花黄色素A对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及VEGF表达的影响 (论文)（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、3 6 广东医学2 0 1 4年 1月 第 3 5巷第 1 期 Gu a n g d o n g Me d i c a l J o u r n a l J a n 2 01 4， V o J 3 5 ，N o 羟基红花黄色素 A对小 鼠 L e w i s 肺癌移植瘤的 抑制作用及 V E G F表达的影响 术 谢军平 ，高亭，李环羽， 段凤英 南 昌大学第二附属 医院呼吸 内科 ( 南 昌 3 3 0 0 0 6 ) 【 摘要】 目的观察羟基红花黄色素A( h y d r o x y s a ffio r y e l l o w A ， H S Y A) 对 C 5 7 B L 6小鼠 L
2、e w i s 肺癌移植瘤的 抑制作用， 并观察其对肿瘤组织血管内皮生长因子( v a s c u l a r e n d o t h e l i a l g r o w t h f a c t o r ， V E G F ) 表达的影响。方法 C 5 7 B L 6近交系小鼠3 0只， 造模后， 分为5组， 每组6只， 分别使用生理盐水、 环磷酰胺( C T X) 及 H S Y A( 分小、 中、 大3个剂量) 作用于动物模型。观察各组肿瘤体积大小， 并在造模第2 2天处死所有小鼠， 无菌条件下剥取瘤组织 并称重， 计算抑瘤率； 应用免疫组化法及图像分析技 术检测瘤组织 V E G F表达
3、的情况 结果H S Y A中、 小剂量 组， 在瘤株接种第 l O 、 l 6 、 2 2天肿瘤体积与生理盐水组比较差异有统计学意义( P9 8 4 ； V E G F兔抗鼠单克隆抗体( 一抗) 购 白 广 东医学2 0 1 4年 1月 第 3 5卷第 1期 Gu a n g d o n g Me d i c a l J o u r n a l J a n 2 0 1 4 ，V o l 3 5 ，N o 1 美国 R & D公司； 兔两步法 s P免疫组化试剂盒及 D A B 显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 1 3 方 法 1 3 1 肺癌细胞准备将小鼠L e w i s 肺癌细胞
4、置于含 1 0 胎牛血清及 D ME M的完全培养液中， 在 3 7 、 5 C O ， 培养箱中培养 ， 2 d更换 1 次培养液， 0 2 5 胰蛋 白酶消化传代。 1 3 2 药物配置H S Y A标准品， 用生理盐水配制 2 8 、 5 6及 1 1 2 m g L溶液， 0 2 2 m微孔滤膜过滤除菌 ， 无菌分装 ， 一 2 0 ( 2 冷冻保存 ( H S Y A遇热易分解 ) 。阳 性药 C T X用生理盐水 配成 2 L的溶液 。 1 3 3 造模把瘤细胞株传代至足够数量后， 待贴壁 的细胞处于对数生长期时， 用 0 2 5 胰蛋白酶消化于倒 置显微镜下计数， 并观察细胞活力
5、大于9 5 ， 调整浓度， 配制成 1 X 1 0 m L 单细胞悬液 ， 按 0 2 m L 只接种于 小鼠侧肋腹皮下， 复制小鼠L e w i s 肺癌移植瘤模型。 1 3 4动物分组及给药 瘤株接种 2 4 h后 ， 将小鼠 采用计算机随机数字编排分为 5组， 每组 6只。分为 对 照组 、 C T X组 ( 2 5 m g k g ) 及 H S Y A大 、 中 、 小 剂量 组 ( 1 4 0 、 0 7 0 、 0 3 5 m g k g ) 。 瘤 株 接 种 第 2天 开 始 ， H S Y A大、 中、 小剂量组分别腹腔注射相应浓度药物( 2 次 d ) ； 对照组给予腹腔
6、注射等量灭菌生理盐水( 2次 d ) ； C T X组为瘤株接种第 2天开始腹腔注射 C T X 2 5 m g k g ( 1 次 2 d ) 。 1 4观察项 目 1 4 1 肿瘤体 积及 瘤 重 c 5 7 B L 6小 鼠皮下 接种 肿 瘤第 1 0天， 用游标卡尺测量移植瘤的最长径 ( a ) 和最 短径( b ) ， 每 6 d 1次， 按公式 V=a b 0 5 2 ( m m ) 计 算肿瘤体积。第 2 2天， 全部小鼠处死后 ， 常规消毒， 完 整剥离小 鼠右肋腹皮下肿瘤 ， 用电子 天平称取瘤 重 ， 计 3 7 算各组的肿瘤生长抑制率。抑瘤率 ( )=( 对照组平 均瘤重
7、 一给药组平均瘤重) 对照组平均瘤重 1 0 0 。 1 4 2 肿 瘤组 织免 疫组化 V E G F的检 测 第 2 2天 ， 处 死全部 小 鼠， 取 肿瘤组 织 ， 1 0 中性 甲醛 固定 、 石蜡 包 理 ， 5 m连续切 片 。采 用 s P免 疫组 化法 检测 肿瘤 组织切片中 V E G F的表达。采用半定量结果判断， 分 别对镜下 阳性细胞 的百分 比和染色强度 给予评分。 V E G F的判定标准： ( 1 ) 阳性着色细胞数评分： 每张切 片上观察 5个高倍视野 ( 2 0 0 ) ， 计数阳性细胞百分 比 ， 阳性细胞数 5 为 0分 ， 5 2 5 为 1 分 ，
8、2 6 5 0 为 2分 ， 5 1 7 5 为 3分 ， 7 6 1 0 0 为 4分 ； ( 2 ) 阳性着色强度评分 ： 无 色为 0分 ， 淡黄色为 1 分 ， 棕 黄色为2分 ， 棕褐色为 3分 ； ( 3 ) 上述 2项得分相乘为 最后评分。 1 5 统计学方法采用 S P S S 1 7 0统计软件 ， 多组间 均数的比较用单 因素方差分析( O n e Wa y A N O V A) ， 组 问两两进行 比较用 S N K q 检验 。 2 结果 2 1 H S Y A对 L e w i s 肺癌移植瘤 生长的影响瘤株 接 种第 6天 ， C 5 7 B L 6小 鼠在 肉眼即
9、 可 见左 侧腹 壁下 有 微小突起 ， 逐 渐明显 ， 均 已出瘤 ， 成瘤率 1 0 0 ； 瘤株 接 种第 1 0天， 各组肿瘤体积逐渐出现差异 ； 在第 1 0 、 1 6 、 2 2天 H S Y A中剂量组及小剂量组肿瘤体积与对照组 相比， 差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ， 在第 2 2天 H S Y A 中剂 量组及 小剂量 组肿瘤 瘤重与对 照组相 比， 差异 有 统计学意义( P 0 0 5 ) 。 见表 1 。而 H S Y A大剂量组肿 瘤体积及 瘤重 与对 照组相 比， 差异无 统计学意 义。 H S Y A高、 中、 小剂量及 C T X组的抑瘤率见表 1
10、； 实验 中3 0只小鼠活动 自如， 反应尚可 ， 未发生意外死亡。 表 1 HS Y A对小鼠 L e wi s 肺癌移植瘤的抑制作用 i 与对照组 比较 P 0 0 5 ， P0 0 1 2 2 H S Y A对 L e w i s 肺癌 移植 瘤 V E G F水 平的影 响 H S Y A中 、 小剂 量组 及 C T X组 V E G F表 达较 对 照组 显 著下调 ， 差异有 统计学 意义 ( P0 0 5 ， P0 0 1 ) ； H S Y A大剂量组 V E G F表达的抑制作用与对照组相 比 差异无统计学意义 ， 见表 2及图 1 。 3 讨论 肿瘤属中医学的瘾瘕积聚、 痞癖等范畴， 实体肿瘤 患者多表现血瘀证型， 现代医学研究证实肿瘤患者存 表 2各组小鼠肿瘤组织 V E G F的表达 与对照组 比较 P0 0 5 ， P 0 0 1
