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1、 北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO.，LTD. Tel：010-56495215; Fax：010-58129612 Web： E-mail： 细胞内抗原染色细胞内抗原染色直接标记直接标记 A. 所需溶液和试剂所需溶液和试剂 1. 磷酸盐缓冲液 (C01-01002)：0.1M PH7.4 1X PBS 2. 固定液：4%多聚甲醛溶液（无甲醇）(C01-06001)；1%多聚甲醛溶液（无甲醇） （C03-02001） 3. 穿膜剂(C01-03001)：0.3% tritonX-100 4. 抗体封闭液（C03-03001）
2、 ：10%山羊血清溶液 5. 孵育缓冲液(C03-03002)：2% BSA 的 0.1M PBS 6. 抗体稀释液(C01-04001)：1% BSA, 0.03% Proclin300 的 0.1M PBS B. 样本处理样本处理固定穿膜 1. 离心收集细胞，弃上清。 2. 将细胞重悬在 1 ml PBS(C01-01002)中。加入等体积甲醛溶液(C01-06001)至终浓度为 2%，37 C 固定 10 分钟。 （或者用 70%的冰乙醇 5-10ML ,4固定 16 小时） 3. 放在冰上降温 1 分钟后加入 1 X PBS ，800rpm 离心 5min 去上清，重复一次。 4. 细
3、胞浆内抗体用 0.3% tritonX-100(C01-03001) 穿膜 5 分钟（若细胞核内的抗体标记，用 90%的冰甲醇穿膜 30 分钟） 。 C. 抗体标记抗体标记 1. 将 0.5-1 x 106个细胞分到各检测管中（依照体积） 。 2. 各管加入 2 ml PBS(C01-01002)，200g 离心 5 分钟, 回收细胞；重复一次。 3. 向每支检测管中加入 100l 孵育缓冲液 (C03-03002)重悬细胞。 4. 再向每支样品管中加入 100l 10%山羊血清的孵育缓冲液（C03-03001） ，室温，封闭 15 分钟。 5. 向每支样品管中加入经抗体稀释液(C01-040
4、01)按合适比例稀释后的荧光一抗，室温孵育 30 分钟。 6. 加入 2 ml 孵育缓冲液，200g 离心 5 分钟，离心回收细胞；重复一次。 北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO.，LTD. Tel：010-56495215; Fax：010-58129612 Web： E-mail： 7. 将细胞重悬在 1%多聚甲醛溶液（C03-02001）中然后用流式细胞仪检测。 注意：注意：1）甲醛溶液加入量为 1X106cells / m L。2）冰乙醇与冰甲醇的加入方法：向细胞中逐滴加入冰乙醇；向细胞中缓慢加入冰甲醇。3）同型对照的设置。 4）标记前细胞计数。 流式技术实验室
