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1、植物内源性激素对三角叶黄连与峨眉黄连花的发育的影响摘要：1材料与方法 1.1 材料 1.1.1 药材样品。2009 年 3 月在峨眉山市黄湾乡采集三角叶黄连不同时期的新鲜的花，低 温冷冻保存。 1.1.2 药剂与仪器。药剂：赤霉素对照品（Sigma） ；吲哚乙酸对照品（Sigma） ；脱落酸对照品（Aidrich） ；甲醇（分析纯、色谱纯） ；乙酸乙酯（分析纯） 、石油醚（分析纯） 、 乙腈（色谱纯） ；水为超纯水。仪器：高效液相色谱仪（LC-20T 泵，SPD-20A 紫外检测器， N2000 SP1 色谱工作站） ；电子天平（型号：BS224S ，d = 0. 000 1 g ，北京赛多利
2、斯仪器系 统有限公司） 。 1.2 方法 1.2.1 色谱条件色谱柱：Hypersi ODS 18（4.0200mm，5m） ；流动相：甲醇：0.6%乙酸：乙腈 （30：65：5） ；检测波长：254nm；流速：0.800ml/min；柱温：28。 1.2.2 对照品溶液的制备精密称取赤霉素对照品 65.5mg、吲哚乙酸对照品 9.6mg、脱落酸 6.5mg，分别用甲醇 定容在 10ml 的容量瓶中，再依次从上述三个容量瓶中量取 8.8ml、1ml、0.2 定容到 10ml 容量瓶，即得到赤霉素、吲哚乙酸、脱落酸的混合对照品溶液（每 1ml 含赤霉素、吲哚乙 酸、脱落酸分别为 1.76mg、0
3、.96mg、0.13mg） 。 1.2.3 供试品溶液的制备 准确称取 0.500g 三角叶黄连花蕾期、盛花期和末花期的花 3 份，80%的冰冻甲醇 1:10（W:V）加入抗氧剂 、PVPP 低温共同研磨，4低温避光浸提 12h，4 5000r/min 离 心 10min，残渣再用 80%的冰冻甲醇 1:5（W:V）浸提 2 次，每次 3h，离心 10min，残渣用 少许 80%甲醇洗 3 次, 合并滤液和洗液，30减压浓缩至原体积的 1/3，石油醚 2:1 萃取 3 次 ，弃去上层石油醚相，水相用 0.1MNaOH 调 pH8.0，抽滤 3 次，水相用 HAc 调 pH3.0， 乙酸乙酯 2
4、:1 萃取 3 次，合并乙酸乙酯相。减压浓缩至干，用流动相 吸出定容，用于 HPLC 分析。 1.2.4 线性关系考察 精密吸取赤霉素、吲哚乙酸、脱落酸的混合对照品溶液1l、3l、6l、9l、12l、15l 依次进样，测定其峰面积。 1.2.5 精密度试验精密吸取赤霉素、吲哚乙酸、脱落酸的混合对照品溶液 10l，重复进样 6 次，测定其 峰面积。 1.2.6 稳定性试验 取同一样品溶液 10l，于 0、2、4、6、8、10h 进样，测定其峰面积。 1.2.7 重现性试验取同一批样品，按供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液 6 份，按前述高效液相色 谱法重复测定。 1.2.8 加样回收率试验精密
5、吸取已知含量的样品 6 份，每份约 0.5g，分别加入对照品溶液，按样品测定方法 测定，按公式（回收率=（测出总量-对照品含量）/对照品加入量100%）计算回收率。1.2.9样品测定 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 6l ，分别注入液相色谱仪中，依上述色谱条件 测定峰面积，按外标法计算含量。 2结果与分析 2.1 线性关系考察结果赤霉素峰面积测定结果依次为: 69039、214025、467191、711071、954317、1219162；吲哚乙酸峰面积测定结果依次为: 18869、58820、127977、191198、265679、334855；脱落酸峰面积测定结果依次为: 49619
6、、140527、276261、417453、560993、717816。以对照品进样量为横坐标，峰面积 为纵坐标，得赤霉素的标准曲线方程为 Y= 46 722X 24 629，R = 0.999；吲哚乙酸的标准 曲线方程为 Y = 23 606X 7 509，R = 0.999；脱落酸的标准曲线方程为 Y = 36518X - 3518，R = 0.999。 2.2 精密度实验结果赤霉素峰面积测定结果依次为: 512145、501851、524466、517700、505129、524170，平均值为 514243.5，RSD 为 1.86%；吲哚乙酸峰面积测定结果依次为: 140395、13
7、9970、143480、141876、137500、142611，平均值为 140972，RSD 为 1.53%； 脱落酸峰面积测定结果依次为: 304987、297328、303758、306103、299785、310534，平 均值为 303749.17，RSD 为 1.54%。 2.3 稳定性实验结果赤霉素峰面积测定结果依次为: 286039、285583、294790、279415、280713、288014，平均值为 285759，RSD 为 1.93%； 吲哚乙酸峰面积测定结果依次为: 14116、13856、14089、14398、14491、14059，平均值 为 14168
8、.17，RSD 为 1.66%；脱落酸峰面积测定结果依次为: 278269、279524、272243、274347、275420、270477，平均值为 275046.7，RSD 为 1.26%。 2.4 重现性实验结果（雅连盛花期）赤霉素峰面积测定结果依次为: 741733、720711、732803、731019、725344、711693，平均值为 727217.2，RSD 为 1.43%；吲哚乙酸峰面积测定结果依次为: 171764、180087、172532、172804、170865、173173，平均值为 173537.5，RSD 为 1.91%；脱落酸峰面积测定结果依次为:
9、460770、469928、458576、473927、450894、463297，平均值为 462898.7，RSD 为 1.78%。 2.5 加样回收率实验结果（雅连盛花期）表 3-1 赤霉素加样回收率试验结果序号123456赤霉素量（mg）0.2610.2580.2630.2650.2590.264加入赤霉素量（mg）0.260.260.260.260.260.26测得赤霉素量（mg）0.5180.5170.5150.5180.5250.518回收率（%）0.9980.9960.9690.9731.020.977平均值（）0.988RSD（%）2.6 样品含量测定结果赤霉素吲哚乙酸脱落酸
10、味连初花期0.00359065 50.0005973451.86903E- 06味连盛花期0.02779881 00.0022325042.00784E- 05味连末花期0.00798543 60.0020334622.00029E- 05味连初果期0.01835209 60.0002686497.72425E- 06雅连初花期0.01373268 80.0005471263.01898E- 05雅连盛花期0.00785971 70.0011409141.91004E- 05雅连末花期0.01180978 00.0013181177.31107E- 06野连初花期0.03025497 60.0
11、020732703.70857E- 05野连盛花期0.01025017 40.0014202021.41420E- 05野连末花期0.00145087 00.0001067781.34876E- 053 结论与讨论 峨眉黄连花中赤霉素的含量从初花期、盛花期到末花期一直呈现下降趋势，赤霉素有促进 植物开花的作用，在初花期和盛花期，植物正处于生长旺盛期，赤霉素的含量高可以促进 开花的顺利进行，而在末花期，花开时凋谢，赤霉素的含量开始降低，这有利于种子的形 成。赤霉素还可以打破芽的休眠作用，初花期的高含量可以诱使花芽加速向盛花期生长， 末花期种子的形成是另一种休眠的开始，自然赤霉素的含量就降下来了。
12、峨眉黄连花中吲哚乙酸的含量从初花期、盛花期到末花期也一直呈现下降趋势。吲哚乙酸 有促进雌花发育和抑制花朵脱落的作用，初花期的高含量有利于雌花正常的发育和抑制花 朵的脱落，在末花期完成授粉以后，吲哚乙酸的促进作用就逐渐减弱。峨眉黄连花中脱落酸的含量，从初花期到盛花期呈下降趋势，从盛花期到末花期又呈上升 趋势。脱落酸有使花芽成为休眠芽的作用，花芽经过一个冬天的休眠，在初花期时含量仍 然很高，随着花芽的休眠被打破，花期的进行，脱落酸的含量逐渐降低。脱落酸又有促进 种子和果实的脱落的作用，峨眉黄连的种子形成并逐渐成熟以后，脱落酸含量的升高有利 于种子的自然脱落。Luckwill(1970) 认为脱落酸
13、是一种重要的促花激素。三角叶黄连花中赤霉素的含量从初花期、盛花期到末花期一直呈现上升趋势。一致认为细 胞分裂素有利于花芽分化, 而赤霉素则抑制花芽分化，初花期的含量有利于打破花芽的休眠，而盛花期和末花期含量的持续升高则会产生消极作用，高浓度的赤霉素则抑制花芽分 化，这对三角叶黄连完成正常的授粉结实不利。三角叶黄连花中吲哚乙酸的含量从初花期、盛花期到末花期也一直呈现上升趋势。吲哚乙 酸对花芽孕育的启动起到促进作用，低浓度的吲哚乙酸是花芽孕育所必须的, 而高浓度吲 哚乙酸则抑制花芽的孕育。三角叶黄连花中脱落酸的含量，从初花期到盛花期呈上升趋势，从盛花期到末花期又呈下 降趋势。与峨眉黄连中脱落酸的含量变化趋势相比，三角叶黄连中的含量的下降要偏后一 些，可能产生不利的影响。峨眉黄连花中赤霉素的含量峨眉黄连花中吲哚乙酸的含量峨眉黄连花中脱落酸的含量三角叶黄连花中赤霉素的含量三角叶黄连花中吲哚乙酸的含量三角叶黄连花中脱落酸的含量味连赤霉素含量味连吲哚乙酸含量味连脱落酸含量
