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1、北京东西分析仪器有限公司乳品中苯甲酸和山梨酸的测定一、 方法提要山梨酸、苯甲酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业。食品中添加的山梨酸、 苯甲酸若超标严重，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。根据FDA 的规定，苯甲酸在食品中的使用量为 0.21.0 gkg。但婴幼儿乳制品中不允许添加。婴幼儿长期摄入苯甲酸也可能带来哮喘、荨麻疹、代谢性酸中毒等不良反应。但是现在一些婴幼儿奶粉中检测出了山梨酸和苯甲酸含量。本实验根据 食品安全国家标准乳品中山梨酸和苯甲酸的测定中提供的方法进行分析测定。去除试样中的脂肪和蛋白质，甲醇稀释，过
2、滤后，采用反相液相色谱法分离测定。二、试剂及标准溶液配制2.12.12.12.1 试剂试剂2.1.1甲醇（CH3OH） ：色谱纯。2.1.2亚铁氰化钾溶液（92 g/L） ：称取亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O 106 g， 用水溶解于 1000 mL 容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.3乙酸锌溶液（183 g/L） ：称取乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O 219 g，加入32 mL 乙酸，用水溶解于 1000 mL 容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.4磷酸盐缓冲液（pH=6.7） ：分别称取 2.5 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）和 2.5g 磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）于
3、 1000 mL 容量瓶中，用水定容到刻度后混匀，用滤膜过滤后备用。2.1.5氢氧化钠溶液 （0.1 mol/L） ： 称量 4 g 氢氧化钠 （NaOH） ， 用水溶解于 1000mL 容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.6硫酸溶液（0.5 mol/L） ：移取 30 mL 的浓硫酸（H2SO4）到 500 mL 水中，边搅拌边缓慢加入，冷却到室温后转移到 1000 mL 容量瓶，定容到刻度后混匀。2.1.7甲醇水溶液：体积分数为 50 %。2.22.22.22.2 标准溶液配制标准溶液配制北京东西分析仪器有限公司2.2.1 苯甲酸和山梨酸标准贮备液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各 500 g。准
4、确称取苯甲酸、山梨酸标准品各 50.0 mg，分别置于 100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度。摇匀后，冷藏于冰箱中，有效期 2 个月。2.2.2 苯甲酸和山梨酸的混合标准工作液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各 10 g。分别吸取苯甲酸和山梨酸的标准贮备液各 5 mL，至 250 mL 的容量瓶中，用甲醇水溶液定容至刻度后混匀。冷藏于冰箱中，有效期 5 d。三、仪器及工作条件3.13.13.13.1 仪器3.1.1 LC 5500 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器（北东西分析仪器有限公司） 。3.1.2 分析天平：感量为 0.0001 g（北京赛多利斯仪器系统有限公司） 。3.1
5、.3 超声波水浴（DS6150，Do-Chrom） 。3.1.4 滤膜：0.45 m。3.23.23.23.2 色谱条件色谱柱：C18，250 mm4.6mm，5m。流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液=14，0.45 m 滤膜过滤。流速：1.2 mL/min。检测波长：227 nm。柱温：室温。进样量：20 L。四、分析步骤及分析结果4.14.14.14.1 试样处理4.1.1液态试样 贮藏在冰箱中的乳与乳制品， 应在试验前预先取出， 并达室温，称量 20 g（精确至 0.01g）样品于 100 mL 容量瓶中。4.1.2固态试样 称量 3 g（精确至 0.01g）样品于 100 mL 容量瓶中，加
6、10 mL水（40左右） ，用玻璃棒搅拌至完全溶解。4.24.24.24.2 萃取和净化萃取和净化向盛有试样的容量瓶中加入 25 mL 氢氧化钠溶液，混合后置于超声波水浴或 70 水浴中处理 15 min。冷却后，用硫酸溶液（约 2mL 左右）将 pH 调节到北京东西分析仪器有限公司8(用 pH 计或 pH 试纸均可)， 然后加入 2 mL 亚铁氰化钾溶液和 2 mL 乙酸锌溶液。剧烈振摇，静置 15 min，混合后冷却到室温，再用甲醇定容，静置 15 min，上清液经过滤膜过滤。收集滤液作为试样溶液，用于高效液相色谱仪测定。4.34.34.34.3 测定测定测定测定吸取试样溶液和苯甲酸和山梨
7、酸的混合标准工作液，注入色谱仪进行分析。以色谱峰面积定量。图 1山梨酸、苯甲酸混合标准液谱图图 2样品谱图 4.44.44.44.4 分析结果的计算分析结果的计算北京东西分析仪器有限公司试样中苯甲酸、山梨酸的含量按下式计算:X =mVA AsCs式中：X 试样中苯甲酸、山梨酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ；A试样溶液中苯甲酸、山梨酸的峰面积；As 标准溶液中苯甲酸、山梨酸的峰面积；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ；V 试样最终定容体积，单位为毫升(mL) ；m 取样质量，单位为克（g） 。经过计算，样品中山梨酸的含量为 38.60 mg/kg，苯甲酸含量为 56.38 mg/kg。4.54.54.54.5 精密度精密度相同的条件下测定三次，结果如下组分名称第一次测定结果（mg/kg）第二次测定结果（mg/kg）第三次测定结果（mg/kg）RSD（）山梨酸39.6738.1437.992.41苯甲酸55.0057.9256.222.60五 结论用 LC5500 高效液相色谱分析乳品中山梨酸和苯甲酸的含量，峰形较好，重复性较好。 在重复性条件下获得的三次测定结果的绝对差值均未超过算术平均值的 10 %，符合国标 GB 217032010 的要求。（吴琳 张磊）
