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1、总糖和还原糖的测定斐林氏法2006-08-30 00:00:00 来源： 评论：0 我要评论总糖和还原糖测定方法较多，如 3，5二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理还原糖在碱性溶液中能将 Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可总糖和还原糖测定方法较多，如 3，5二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理二、原理 还原糖在碱性溶液中能将 Ag+
2、，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。酒石酸络铜（）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（）钾盐。Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O K2Cu2Fe(CN
3、)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾 亚铁氰酸络铜（）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂：三、器材及试剂：1器材： 山芋粉 广范试纸 pH112。
4、 吸管 5 毫升（4），10 毫升（2） 容量瓶 100 毫升（3） 烧杯 150 毫升（1），100 毫升（1） 三角烧瓶 250 毫升（6） 滴定管 25 毫升（1） 双孔橡皮塞 电炉 300W（1） 天平。 2试剂 斐林氏甲液：15 克硫酸铜、0.05 克次甲基蓝溶于 1 升蒸馏水中。 斐林氏乙液：50 克酒石酸钾钠、54 克氢氧化钠、4 克亚铁氰化钾溶于 1 升蒸馏水中。 0.1%标准葡萄糖溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖 1.00 克，加入少量蒸馏水溶解后，再加 8 毫升浓盐酸（防止微生物生长），蒸馏水定容至 1 升。 6molL-1 盐酸； 6 molL-1 氢氧化钠。四、操作步骤四
5、、操作步骤 1还原糖提取：称取 2.00 克山芋粉，在小烧杯中先用少量水调成糊状，再加入 70 毫升水，50保温 15 分钟，取出后定容至 100 毫升， 经过滤，取滤液进行还原糖测定。2总糖水解：称取 1.00 克山芋粉在小烧杯中，加 6molL-1盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，在沸水浴上加热半小时，取出后用 6molL-1 氢氧化钠中和至中性，然后定容至 100 毫升，经过滤，取滤液 10 毫升稀释至 100 毫升，即为稀释 1000 倍的总糖水解液。 3糖的定量测定：按图 1-1 装置热滴定仪器。在三角瓶中按下表加入各试剂。在加入斐林试剂甲液和乙液后， 为了保证处于沸腾状态下快速
6、滴定（整个滴定时间在三分钟内完成），在滴定前先从滴定管中加入适量的葡萄糖液，然后在沸腾状态下以 45 秒一滴的速度，继续自滴定管加入葡萄糖液，直至蓝色消失停止滴定。由于还原型的次甲基蓝遇到空气后又能转为氧化型，而恢复蓝色，因此当滴定到蓝色刚消失，出现黄色时应立即停止滴定，如果再现蓝色切勿继续滴定。五、计算：五、计算：相关热词搜索：相关热词搜索：总糖 还原糖 斐林氏法 上一篇：上一篇：用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因下一篇：下一篇：转氨作用 延伸阅读：延伸阅读：还原糖和总糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法(2008-05-21) 费林试剂法测定总糖(2006-09-23) 植物组织中总糖及还原糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法(2006-09-12) 总糖和还原糖的测定:3,5二硝基水杨酸法(2006-09-05) 粗脂肪的定量（Soxhlet 提取法）(2006-08-30) 还原糖含量测定(砷钼酸比色法)(2008-05-21)
