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1、本实验仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。本实验仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。 VER:1112 酵母酵母基因组基因组 DNA 提取试剂盒提取试剂盒 （GD2415 Yeast gDNA Miniprep kit） 产品组成产品组成 成分成分 GD2415-00 GD2415-01 GD2415-02 包装规格 4 50 250 ezBind DNA Mini Columns 4 50 250 2 mL Collection Tubes 8 100 500 Buffer YTL 1.0 mL 13 mL 65 mL BufferYBL 1.0
2、mL 13 mL 65 mL Buffer KB 2.2 mL 28 mL 130 mL DNA Wash Buffer 2.0 mL 15 mL 3 x 24 mL Glass Beads 220 mg 3 g 15 g Elution Buffer 2.0 mL 15 mL 70 mL Buffer SE 2.5 mL 30 mL 130 mL Lyticase 110 L 1.3 mL 5 x 1.3 mL Protease K 2.8 mg 35 mg 5 x 35 mg Proteinase K Store Buffer 120 L 1.5 mL 7.5 mL RNase A 25
3、L 270 L 1.4 mL Instruction Booklet 1 1 1 技术支持：技术支持：021-54461558 订货电话：订货电话：021-54461657 贮存条件及产品稳定性贮存条件及产品稳定性 本试剂盒自购买之日起可保存12个月。 其中蛋白酶K和溶壁酶贮存在-20oC， RNase储存于4 C，其他试剂及用品可保存于室温（22-25 C）。 产品说明产品说明 EZgeneTM酵母 gDNA 提取试剂盒适用于从不同来源的酵母细胞中纯化基因组 DNA。采用独特的缓冲液，结合膜吸附技术，一次性可处理 3mL 处于对数生长 期的酵母菌液（YPD 培养基中 OD600 为 1.0）
4、，纯化到 A260/A280 为 1.7-1.9 的 DNA 15-30g DNA，整个过程无需有机溶剂抽提，有效降低污染和处理时间，能 同时处理多个样品。本试剂盒提取的细胞核 DNA，包括质粒 DNA。若第一次使 用酵母 gDNA 试剂盒，请在操作之前仔细阅读说明书，酵母细胞需培养至对数生 长期，收集菌液，裂解细胞，通过吸附柱吸附基因组 DNA，再经两步快速漂洗， 去除多余盐分和蛋白质污染物，最后用水或者低盐缓冲液将 DNA 洗脱下来。纯 化到的 DNA 可直接用于下游实验而不需要额外的纯化。 要点要点 请按照标准溶解蛋白酶 K（蛋白酶 K应避免反复冻融，建议溶解后分装在几个小管，并贮藏在-
5、20 C，使用前取出置于室温中）。 GD2415-00：加入110 L Elution Buffer； GD2415-01：加入1.4 mL Elution Buffer； GD2415-02：每管加入1.4 mL Elution Buffer； 按标准在DNA Wash Buffer中加入无水乙醇，终浓度为80。 GD2415-00：加入8 mL 无水乙醇； GD2415-01：加入60 mL 无水乙醇； GD2415-02：加入96mL/每瓶 无水乙醇； 温度较低时，Buffer BL缓冲液会生成少量沉淀，使用之前于37 C温浴备用。 安全信息安全信息 Buffer BL为离液盐，当与漂白
6、剂作用时会发生化学反应，勿直接加入漂白剂及酸溶液，使用时请带上手套并保护眼睛。 Web： E-mail： 实验前需准备的材料实验前需准备的材料 台式离心机、已灭菌的1.5 mL离心管、30oC 水浴箱、55oC 振荡水浴箱、65oC 培养箱或水浴箱和无水乙醇(96%-100%) 操作操作步骤步骤 注： 此操作步骤适用于可从 3mL 酵母培养液( 2 x 107 个细胞)中提取基因组 DNA。 1. 在YPD培养基中培养酵母细胞质至OD600为1.0。 2. 将3mL 酵母菌液 ( 2 x 107个细胞)置于室温下4,000 x g离心10分钟。 3. 去掉上清液， 加入480 L Buffer
7、 SE和25 L 溶壁酶溶壁酶溶液重悬细胞， 30oC温浴30 分钟。 4. 室温下4,000 x g离心10分钟，弃上清，收集沉淀。 5. 加入200 L Buffer YTL重悬细胞，加入50 mg 玻璃珠玻璃珠，涡旋5分钟。 6. 加入25 L 蛋白酶蛋白酶 K 溶液，振荡混匀。50oC振荡水浴，至细胞完全裂解。一般情况下，不超过1小时细胞即可完全裂解。若无振荡水浴箱，温浴期间每20-30分钟颠倒混匀一次。 7. 向样品中加入5L RNase A 颠倒几次以混匀，室温放置5分钟。 8. 13,000 rpm 离心5分钟，沉淀不溶碎片，小心吸取上清至离心管中。 9. 加入220L Buff
8、er YBL，最大速度涡旋15秒，65oC水浴10分钟，加入Buffer YBL后可能会形成絮状沉淀，沉淀的生成并不影响DNA纯化。 10. 加入220L 无水乙醇无水乙醇 (96-100%)，最大速度涡漩20秒彻底混匀。若此时仍有沉淀，用移液枪反复吸取10次，打散沉淀。 11. 将吸附柱插入收集管中，将第10步得到的样品液（包括可能生成的沉淀）加入吸附柱中，13,000 rpm 离心1 分钟，倒掉废液并丢掉收集管。 12. 将吸附柱插入一个新的2 mL 收集管， 加入500 L Buffer KB， 13,000 rpm 离心1分钟，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。 13. 加入650
9、L DNA Wash Buffer 漂洗吸附柱， 13,000 rpm 离心1分钟，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。 技术支持：技术支持：021-54461558 订货电话：订货电话：021-54461657 注：DNA Wash Buffer作为浓缩液提供，使用前需加入乙醇稀释，详见第3页使用前注意事项。 14. 加入450 L DNA Wash Buffer，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉废液，将吸附柱放入新的收集管中。 15. 13,000 rpm 开盖离心2分钟，晾干乙醇，残留乙醇会降低洗脱效率和影响下游实验。 16. 将吸附柱插入1.5 mL离心管 （无内源核酸酶） 中，
10、 加入 50-100 L 预热预热 (65oC) Elution Buffer，室温放置3-5分钟。 注：或将吸附柱置于水浴锅或烘箱（65oC）3-5分钟效果更好， 洗脱得到的DNA量会有所增加。 17. 13,000 rpm 离心1分钟，洗脱DNA。 18. 加入 50-100 L Elution Buffer，第2次洗脱。 注：每加入50-100 L Elution Buffer洗脱可以得到60-70%的DNA，然而，增加洗脱液量会减小终产物浓度，为了得到浓度更高的DNA，可只加入50 L Elution Buffer 进行洗脱， 低于50 L的洗脱量将严重减少DNA得率。 3 mL 培养
11、样品能纯化到15-30 g DNA，具体量因酵母菌株，培养基和生长时期不同而有所差别。 测测定定 DNA 得率和纯度得率和纯度 所获基因组DNA通过分光光度计测定收获量，用去离子水、Tris-HCl缓冲液或者洗脱液做空白对照。DNA浓度计算如下： DNA浓度浓度 = 50 g/mL OD260 稀释倍数稀释倍数 DNA纯度测定采用260 nm和280 nm测定光吸值的方法，若A260/A280比值在 1.7-1.9，表明纯度在85%-90%。3 mL 培养样品培养样品能纯化到15-30 g DNA，具体量 因酵母菌株，培养基和生长时期不同而有所差别。若DNA由ddH2O洗脱，将纯化 到的DNA样品保存于-20oC，防止降解。
