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1、细胞工程细胞工程考试大纲考试大纲第一章第一章 绪论绪论一、名词一、名词高技术、生物技术、细胞工程、生化工程.二、知识点二、知识点现代生物技术是一项高技术；生物技术的基本内容； 细胞工程在整个生物工程中的地位； 细胞工程主要的技术领域；细胞工程的主要应用。第二章第二章 细胞工程理论基础细胞工程理论基础一、名词一、名词细胞、细胞周期、细胞凋亡、细胞分化、奢侈基因、管家基因.二、知识点二、知识点细胞共性。第三章细胞工程基本技术第三章细胞工程基本技术一、名词一、名词生物安全、p1 级实验室、清洁液、干热灭菌、湿热灭菌、无菌操作技术、细胞贴壁率、细胞计数、MTT 法、活体染色、成集落试验、污染。二、知识
2、点二、知识点细胞工程实验室主要的仪器设备；细胞培养室的基本要求；p1 级实验室的基本要求；细胞培养室常见的消毒方法；玻璃器皿的清洗方法；判断清洁液失效的方法及延长其寿命的方法；无菌操作的技术要领与要求；培养细胞的观察技术；培养细胞的主要污染与排除；细胞计数应注意的问题；细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项。第四章第四章 细胞培养与代谢调控细胞培养与代谢调控一、名词一、名词分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养。二、知识点二、知识点分批式培养、连续式培养、灌流式培养的特点。第五章第五章 植物人工繁殖植物人工繁殖一、名词一、名词植物细胞工程、植物组织培养、外植体、脱分化、再分化
3、、愈伤组织、胚状体、大量元素、微量元素、器官发生途径、胚状体发生途径、植物快速无性繁殖、植物脱毒、胚培养、胚乳培养、人工种子、体细胞胚。 。二、知识点二、知识点植物细胞工程的主要内容；植物组织培养的理论基础；植物细胞工程的技术手段；植物组织再分化的两条途径；植物组织培养的主要步骤与技术要点；影响植物细胞脱分化和再分化因素；愈伤组织有的特点及其在细胞工程中的重要性；愈伤组织再生植株的途径；植物组织与动物细胞的超低温保存原理及方法的不同；植物细胞的几种大规模培养系统的特点及其影响因素；生长素、细胞分裂素的生理作用及其在组织培养中的意义。成熟胚培养与幼胚培养在技术上的异同；植物胚乳培养的类型；植物胚
4、胎培养的意义及影响因素；愈伤组织的形成的三个阶段及主要特征；人工种子的组成、构建与应用；体细胞胚胎发生的同步控制；植物脱毒的方法；植物快繁技术的主要步骤；微繁殖中芽的增殖方式；植物脱毒时外植体的预处理途径。第六章第六章 动物人工繁殖动物人工繁殖一、名词一、名词胚胎工程 p96体外受精 p97胚胎移植 p97胚胎分割 p115胚胎融合 p6嵌合体 p6胚胎性别鉴定 p121胚胎冷冻技术 p6试管婴儿 p103超数排卵 p6同步发情 p6胚胎细胞克隆 p8同种体细胞克隆 p8异种体细胞克隆 p8核移植技术p108二、知识点二、知识点胚胎工程的主要技术领域 p6体外受精的基本过程 p7试管婴儿的基本
5、步骤 p104胚胎工程的意义 p7克隆研究的主要内容 p8克隆的理论与技术基础理论基础是细胞全能性技术基础：核移植技术胚胎移植技术核移植的技术要点、应用与发展前景 p8“多莉”的制备步骤 p9“多莉”引发的思考你对克隆人的看法。第七章第七章 细胞重组与细胞融合细胞重组与细胞融合一、名词一、名词细胞重组 p128胞质体 p128核质体微细胞 p128细胞融合 p132HAT 培养基 p6单克隆抗体 p239基因定位 p6二、知识点二、知识点细胞重组的方式与意义1）胞质体与完整细胞的融合形成胞质杂种；2）微细胞与完整细胞的融合形成微细胞异核体；3）胞质体与核体（小细胞）融合形成重组细胞（核质杂种）
6、HAT 选择的原理 p6细胞融合的主要应用1)进行基因定位，绘制人类基因图2）诱导 PC 染色体3）体细胞杂种的致瘤性分析4 )遗传缺陷的基因互补5)分化功能表达调控的研究6)淋巴细胞杂交瘤技术与单克隆抗体7 )植物细胞的原生质体融合培育杂种植株8 )核质相互作用关系9 )基因治疗10 )疾病诊断PEG 诱导细胞融合的基本原理PEG(polyethylene glycol)是一种多聚化合物，分子式为 H(OHCH2-CH2)nOH，平均分子量在 20020000 之间。诱导机制可能是由于带有大量负电荷的 PEG 分子和原生质体表面的负电荷间在钙离子的作用下形成静电键，促使原生质体间的黏着而结合
7、，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。融合体的基本类型及其筛选1）同核体同源原生质体的融合2）异核体非同源原生质体的融合3）多核体含有双亲不同比例核物质的融合体融合体的筛选方法1）遗传互补筛选法 2）抗性互补筛选法 3）生长特性筛选法 4）物理特性筛选法 5）其他方法第八章第八章新品种培育新品种培育一、一、名词名词花药培养 p150植物原生质体融合 p13端体系统:除了从细胞中去掉整条染色体外，还可以有计划的去除某一染色体的某一侧的臂。三体植物系统:如果细胞中增加一条同种的染色体，则染色体数成为 2n+1，称为三体（trisome） 。
8、如果增加两条同种染色体（非同源） ，结果有两对染色体都变成三条，则称双三体。单体系统 p13孤雌生殖 p150染色体加倍 p13染色体倍性改造工程:指有目的、有计划的增加或减少一组或几组同源或异源染色体，以创造我们所需的动植物新品种的一项染色体工程技术。植物染色体的非整倍体改造:是按照人们预定的目标,通过有计划的削减、添加和代换同种或异种的一个或若干条染色体或其一部分，可以在一定程度上达到定向改变植物的遗传性、选育新品种的目的。单体植物:从细胞中去掉一条染色体，则染色体数成为 2n-1，这样的植物叫做单体植物。缺体植物:去掉两条染色体(同源)，2n-2二、知识点二、知识点花药培养中外植体的选择
9、（1） 材料的遗传变异首先，不同物种之间花药培养的反应存在跟大差异；此外，同一属内不同种或品种之间也存在诱导性的差异。母本材料的基因型是影响花药培养的关键因素，不同基因型植株的花药对培养的反应不同。花药培养的诱导率也与杂种优势有关，一般情况下杂种比纯种容易诱导。（2） 母本生理状态的影响母本生理状态直接影响花药培养力母本的氮素营养水平是另一个重要的影响因素（3） 花粉发育时期被子植物的花粉发育过程经历三个阶段，即第一期四分体时期、第二期单核期（小孢 子阶段） 、第三期双核期和三核期（雄配子体阶段） 。单核期又分为单核早期、但和中期、单核晚期。对大多数植物来说，单核中期和晚期是诱导花粉胚或花粉愈
10、伤组织的最佳时期，尤其单核靠边期是花粉诱导的关键时期。不同植物的花粉对离体培养有其特定的、最敏感的发育时期，然而，对大多数植物，单核期的花粉比较容易培养。具有无限数目花药的植物，取材比较方便，具有有限数目花药的植物，按顺序找出小孢子发育时期不同的花药。将镜检结果与花蕾发育状态进行对比，发现花蕾状态与花粉发育时期的对应关系，为进一步取样培养奠定基础。供体植物的遗传背景对单倍体的诱导影响甚大。花药培养与花粉培养的不同点 p12花药培养中再生植株的形成途径与再生植株倍性的关系 p12花药培养再生植株的途径植物原生质体制备的方法原生质体再生植株的技术路线 p13植物染色体的人工加倍方法 p14植物远缘
11、杂交遇到的主要困难第九章第九章 植物细胞代谢产物制备植物细胞代谢产物制备一、名词一、名词看护培养 p165：用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖。这块愈伤组织被称为看护组织。饲养层培养 p165：与处理过的（如 X 射线处理）无分裂能力或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长。细胞固定化培养 p168：是指将游离的细胞埋在支持物内部或表面进行培养的一门技术。冠瘿组织 p186：是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基上生长。转基因植物 p266：是指将外源基因转入到植物的细胞或组织获得了新的遗传性状的植物。Ti 质粒 p14：是指在根
12、瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链 DNA。二、知识点二、知识点植物细胞定向富集驯化方法 p174：细胞株定向富集驯化是一种有效的筛选技术，主要包括:1激素自养型细胞株的筛选驯化：将愈伤组织或分离到的细胞接种在不含生长素、细胞分裂素的继代培养基中进行传代培养，挑选生长好的细胞进行反复继代培养驯化可以获得激素自养型细胞。2、耐受高剂量有毒物质的细胞株驯化：将愈伤组织或分离到的细胞接种在含高浓度的乙酸盐、苯甲酸钠等可能对细胞产生含毒化合物的培养基中反复继代培养驯化。不断提高这些成分含量，可以获得耐受高剂量有毒物质的细胞株。第十章第十章 微藻培养及应用微藻培养及应用一、名词一、名词
13、微藻 p190：一般指是那些在显微镜下才能辨别形态的微小藻类。二、知识点二、知识点微藻的特点及分类 p190；1、 特点：（1）利用太阳能和二氧化碳通过光合作用生产有机物，生长速度快，效率高，能耗低。 （2）微藻提取有效成分不需要复杂的前处理。 （3）种类多，许多微藻可以产生有生物活性的化合物。 （4）可以利用贫瘠土地、盐碱地等极端环境。 （5）微藻培养简单，容易产业化。2、 分类：微藻有原核微藻和真核微藻两大类。根据微藻生长环境可分为水生微藻、陆生微藻和气生微藻三类生态类群。水生微藻又有淡水生和海水生之分，根据分布又可分为浮游微藻和底栖微藻。微藻的应用 p190：微藻生物能源、藻类生物柴油、
14、藻类生物制氢、生物活性物质制备、水产饵料、微藻基因工程、其他应用。第十一章第十一章 动物动物细胞培养细胞培养一、名词一、名词动物细胞工程细胞培养组织培养器官培养原代培养 p215继代培养 p217细胞系 p220克隆接触抑制 p207密度抑制 p207天然培养液合成培养液“一代”细胞 p217组织块培养法单层细胞培养法大规模细胞培养技术 p223二、知识点二、知识点体外培养细胞的主要类型及其生长特点 p206细胞系的生长过程的主要阶段及其特征血清的主要用途及注意事项 p208209细胞培养液配置的技术要点 p211原代细胞培养的方法、主要步骤、技术要点以及各自的适用范围原代培养方法:组织块培养
15、法,组织消化培养贴壁细胞传代的主要方法及技术要点酶消化法悬浮细胞传代的主要方法及技术要点直接传代、离心法传代细胞模型的建立与应用细胞培养的作用意义生产实践方面 1）有害物质的快速检测（2）大面积皮肤烧伤的修复（3）遗传病的产前 诊断（4）建立各种医学模型（5）大量生产生物活性物质理论研究方面（1）细胞与细胞之间的相互作用（2）细胞内部与细胞外界之间的作用（3）细胞内胞质的活动 4）胞质与核质之间的流动第十二章第十二章 转基因生物反应器转基因生物反应器一、名词一、名词转基因动物 p259基因治疗 p9基因打靶 p9动物生物反应器 p249二、知识点二、知识点遗传物质导入受体细胞的方法1 物理法
16、；包括电穿孔法、显微注射法和裸露 DNA 直接注射法。2 化学法：DEAE-葡聚糖法、磷酸钙DNA 沉淀法和脂质体载体包埋法。3 生物学方法：指病毒介导的基因转移。常用 DNA 病毒载体和反转录病毒载体。转基因动物的制备方法1）原核期胚胎显微注射法 2）反转录病毒感染法 3）胚胎干细胞方法（ES 细胞途径）4）精子载体法 5）人工酵母染色体（YAC）转基因法 6）受精前卵细胞显微注射法 7）其它方法:包括电脉冲法、染色体片段注入法、磷酸钙共沉淀法、微弹轰击法、基因剔除和基因嵌入法等动物生物反应器的类型与特点乳腺生物反应器、血液生物反应器、基因改良动物第十三章第十三章 干细胞与组织工程干细胞与组织工程一、名词一、名词干细胞 p278胚胎干细胞 p280成体干细胞 p287ES 细胞 p7EC 细胞 p7EG 细胞 p7组织工程：利用细胞生物学和工程学原理，将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架上进行人工培养繁殖、扩增，然后移植到人体内所需要的部位
