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1、6 6现代检验医学杂志第2 4 卷第2 期2 0 0 9 年3 月JM o dL a bM e d ，V 0 1 2 4 N o 2 ，M a r c h 2 0 0 9尿液中氨基酸代谢物检测在恶性肿瘤筛查中的应用罗阳，王珏，张雪，张波，陈鸣，黄君富，府伟灵( 第三军医大学西南医院检验科，重庆4 0 0 0 3 8 )摘要：目的通过对肿瘤患者尿液标本中氨基酸代谢衍生物进行检测，探讨其在肿瘤筛查及判断手术疗效和预后中的可行性。方法采用癌症尿液筛查监测试剂( U R C ) 分剐对3 0 0 例癌症患者、3 5 0 例正常对照尿液标本进行检测，通过观察其反应沉淀物的颜色并与标准相对照来定性判断标本
2、中氨基酸代谢物的含量；并对其中肝癌患者血清进行甲胎蛋白( A F P )含量检测以判断U R C 与A F P 在诊断肝癌中的一致性。结果正常对照组中，U R C 的阳性检出率为2 8 6 ，癌症组中阳性检出率为9 8 6 7 ，方法特异性为9 7 1 4 ；肝癌患者手术前后的阳性率分别为1 0 0 和2 3 7 1 ，手术前阳性率显著高于手术后( P 2 0n g m l 为阳性。1 4 统计学方法采用S P S S l 3 0 软件对数据进行统计学分析。肿瘤组与对照组U R C 阳性率比较，不同肿瘤组的U R C 结果比较，肝癌患者手术 前后比较用Z 2 检验；对A F P 与U R C
3、同时检测肝癌患者标本结果的一致性比较用K a p p a 检验。 2 结果2 1 肿瘤组与对照组进行测试后的结果肿瘤组中有2 8 6 例阳性( 其中强阳性2 1 5 例，弱阳性7 1例) ，阴性1 4 例；正常对照组中有1 0 例阳性( 其中强阳性2 例，弱阳性8 例) ，阴性3 4 0 例。经妒检验，对照组与肿瘤组的代谢物检测结果的差异具有统计学显著性意义，肿瘤组显著高于正常对照组( Z 2 = 5 9 5 1 7 ，P 0 7 5 ，P 0 7 5 ，P )转移到蛋白靶位，形成线状或分支状的(ADP-核糖)重复单位同聚体，即(ADP-核糖)多聚体(poly(ADP- ribose)，PAR
4、)MeSH。在被发现四十多年后，(ADP-核糖)多聚化被视为一种重要的翻译后修饰。人的PARPs组成一个有17个成员的大家族，它们由不同 基因编码并有保守的催化结构域；其中多聚(ADP-核糖)聚合酶1(Poly(ADP-ribose)polymerase 1，PARP1)是原型。PArp1通过(ADP-核糖)多聚化修饰多种核蛋白，并在多种分子和细胞活动中起作用。PARP1的靶蛋白包括PARP1自身(体内主要靶点)，核心组蛋白，连 接组蛋白H1，和多种与PARP1作用的转录相关因子。PARP1密码子762内一常见单核苷酸多态性位点使催化结构域内一缬氨酸(Val)被丙氨酸(Ala)取代，而 涉及癌
5、症易感性。为了研究该多态性对PARP1功能的影响，我们对PARP1-Ala762和PARP1-Val762进行了体外酶学分析。我们发现PARP1-Ala762自修饰活性为PARP1- Val762的57.2；修饰组蛋白H1的活性为PARP1-Val762的61.9。两者活性降低是一致的。3-AB抑制后，PARP1-Ala762修饰组蛋白H1的活性降低是一致的。动力学分析显示PARP1-Ala762修饰组蛋白H1的米氏常数Km升高为PARP1-Val762的1.2倍。这样，可以解释PARP1-Ala762酶活性的降低PARP1第762氨基 酸残基可能涉及与底物的结合。hPARP1催化结构域晶体结
6、构表明第762氨基酸残基位于调节子域(PARP_Reg)中，对着活性部位口袋。Val变为Ala失去两个 甲基，增大第762氨基酸残基与活性部位中最近的Gly888的距离。该空间变化可能使底物NAD与活性口袋的结合变松而降低酶对底物的亲和力，表现 为Km增大，酶活性下降。PARP1 Val762Ala多态性引起PARP1活性下降近40，而该多态性在白种人和黄种人中是常见的，提示人群中PARP1的(ADP-核糖)多聚化水平是有差异 的。该多态性与多种癌症患病风险增高相关，且呈等位基因剂量依赖的关联方式，这可能与PARP1(ADP-核糖)多聚化的水平下降和下降的程度有关。数种：PARP1抑制剂已进入
7、临床试验。PARP1 Val762Ala多态性及相应的PARP1低活性应在临床试验和以后的治疗中被考虑到。8.学位论文 刘斌 癌相关基因CXorf36功能的初步研究 2008目的：我们用生物信息学分析筛选得到一个在多种癌组织中高表达，而在癌旁正常组织低表达的新基因CXorf36(chromosome X open reading frame 36)，并用RT-PCR方法在组织和细胞系中加以验证.以了解CXorf36在多种癌组织的阳性表达情况，从而希望得到一种筛查癌症的新方法。材料与方法：1材料：标本选自河北医科大学第二医院外科2006年1月至2007年12月的癌症手术治疗患者。786-O、A4
8、98、Caki三种肾癌细胞系为北京大学人民医院 泌尿研究所提供。宫颈癌Hela、肝癌HepG2、结肠癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌PC3细胞系为北京大学医学部生化实验室提供。2方法：分别取肝癌，胆管癌，胃癌，结直肠癌，肾癌的病人(均术后病理检查证实)手术切除的肿瘤标本癌组织和癌旁组织(位置距离癌组织至少5厘 米)作对照。分为5组，分别为肝癌10例，胆管癌5例，胃癌15例，大肠癌10例，肾癌10例。组织标本行RT-PCR方法检测CXorf36mRNA在各组的表达情况。 同时行RT-PCR方法检测CXorf36mRNA在宫颈癌Hela、肝癌HepG2、结肠癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌
9、PC3细胞系和786-O、A498、Caki三种肾癌细胞系的 表达情况。3数据处理：所得结果运用SPSS10.0统计软件包处理，每组计量资料均数比较采用t检验，五组计量资料间均数比较采用方差分析。以a=0.05为显著 性检验水准。结果：1癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况CXort36 mRNA在癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次为：4.270.87、 0.470.23。癌组织CXorf36 mRNA表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.051)。CXorf36 mRNA在各组癌组织(肝癌组、胆管癌组、胃癌组 、结直肠癌组、肾癌组)表达情况，以
10、均数土标准差表示，依次为：4.390.8 1、4.100.97、4.280.69、4.460.64、4.091.26，差异无统计学 意义(P0.05)。CXorf36 mRNA在各组癌旁正常组织(肝癌组、胆管癌组、胃癌组、结直肠癌组、肾癌组)的表达情况以均数士标准差表示，依次为 ：0.490.24、0.490.29、0.470.23、0.460.20、0.450.28，差异无统计学意义(P0.05)。2肝癌癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况CXorf36 mRNA在肝癌癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次为 ：4.390.81、0.490.24。肝癌癌组织C
11、Xorf36 mRNA表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.05)。3胆管癌癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况CXorf36 mRNA在胆管癌癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次为 ：4.100.97、0.490.29。胆管癌癌组织CXort36 mRNA表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.05)。4结直肠癌癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况 CXorf36 mRNA在结直肠癌癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次 为：4.280.69、0.470.23。结直肠癌癌组织CXorf36 mRNA表达明
12、显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.05)。5胃癌癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况CXorf36 mRNA在胃癌癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次为 ：4.460.64、0.460.20。胃癌癌组织CXort36 mRNA表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.05)。6肾癌癌组织和癌旁正常组织中CXorf36 mRNA表达情况CXort36 mRNA在肾癌癌组织和癌旁正常组织表达情况，以均数标准差表示，依次为 ：4.091.26、0.450.28。肾癌癌组织CXorf36 mRNA表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P0.05
13、)。7CXorf36基因mRNA在肿瘤细胞系中的表达情况CXorf36基因mRNA在3种肾癌细胞系(786-O、A498、Caki)以及前列腺癌细胞(PC3)、结肠癌细胞 (LOVO)、宫颈癌细胞(Hela)、肺腺癌细胞(A549)、肝癌细胞(HepG2)中的表达丰度很低。8CXorf36基因克隆和氨基酸序列分析：CXorf36基因序列全长由http：/www.genome.ucsc.edu/获得，编码区序列全长用RT-PCR方法从癌组织总RNA扩增得到.推译的蛋白含有182个氨基酸 ，预测分子量20.7kDa。氨基酸序列分析显示CXorf36蛋白有六个丝氨酸磷酸化位点和两个苏氨酸磷酸化位点，
14、没有酪氨酸磷酸化位点。比对分析显示 CXorf36蛋白与小鼠来源的猜测蛋白LOC75905氨基端有79的同源性，而该小鼠猜测蛋白可能是一种水解酶。结论：1CXorf36 mRNA在恶性肿瘤中肿瘤组织有明显高表达，说明Cxorf36基因可能参与恶性肿瘤的发生、发展及转移侵袭过程，并在其中发挥重要作用。2CXorf36 mRNA在肝癌、胆管癌、结直肠癌、胃癌和肾癌的肿瘤组织明显高表达，而在相对应的正常组织中表达明显降低，说明肝癌、胆管癌、结直 肠癌、胃癌和肾癌均为表达癌相关基因CXorf36的肿瘤谱。癌相关基因CXorf36可能作为肿瘤筛查监测、检测肿瘤是否侵袭转移、以及判断预后、了解早 期复发的
15、有效指标。同时癌相关基因CXorf36也为抗肿瘤侵袭转移治疗提供了一个新的靶点。3CXorf36 mRNA肿瘤细胞系中的低表达提示我们该基因可能属于间质表达的蛋白，但也不排除肿瘤细胞建系后体外培养逐渐失去该基因的表达.因此 ，肿瘤细胞及间质细胞的原代培养以及免疫组化实验对于探讨该基因在肿瘤组织中的定位和功能研究将有重要意义。9.期刊论文 鞠少卿.钱虎.王惠民 HER-2/neu癌基因及其产物测定在人类癌症的临床应用 -南通医学院学报2002,22(1)Shin等1981年在脑细胞瘤中发现了一种可转录的癌基因,称之neu.Padhy等进一步证实neu原癌基因的转化产物由1255个氨基酸残基组成,
16、其分子量 185kD,因此称之为p185蛋白质,并且该癌基因与编码表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的癌基因以及病毒癌基因V-erbB有很 高的同源序列,将EGFR癌基因命名c-erbB-1(或HER-1),而将neu癌基因命名c-erbB-2,源于人类表皮生长因子受体(Human epidermal growth factor Receptor,HER),因此原癌基因c-erbB-2,又称为HER-2或neu13.10.学位论文 王柳 人类谷胱甘肽转移酶Omega2和人类RNA结合蛋白KHDRBS基因的克隆和功能研究 2004谷胱甘肽转移酶是一类广谱分布的多功能酶.这类蛋白酶在细胞解毒功能中起着关键作用.谷胱甘肽转移酶Omega亚家族是最新发现的一个亚家族,具 有一些特有的新结构和功能.人类谷胱甘肽转移酶Omega亚家族成员1(GSTO1-1)能催化无机砷生物转化的限速反应,可能是砷在个体
